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HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定被引量：2: 1; 作者席文锦彭红艳 +7 位作者白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-95,共3页; 目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并... 展开更多; 关键词 HER2 原核表达基因工程菌种稳定性; 在线阅读下载PDF 职称材料

hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响被引量：1: 2; 作者方丹东李俊堂 +5 位作者杨韬张雷鸣皇甫罗锴王曦张剑宁杨安钢《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期247-250,共4页; 目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的... 展开更多; 关键词 hsa-miR-128 慢病毒构建 U87细胞细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

针对B7-H1的siRNA对脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 3; 作者王曦皇甫罗锴 +5 位作者杨帆史圣甲郭张燕杨安钢温伟红张剑宁《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期183-188,共6页; 目的:利用针对B7-H1的siRNA在脑胶质瘤U87细胞中下调B7-H1的表达,研究B7-H1的表达下调对U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:根据人B7-H1的mRNA序列设计并合成两对针对B7-H1的siRNA,于转染前一天将U87细胞接种于10 cm细胞培养皿中,以转染时... 展开更多; 关键词 B7-H1 RNAI U87细胞脑胶质瘤; 在线阅读下载PDF 职称材料

含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定: 4; 作者皇甫罗锴王曦 +7 位作者郭张燕席文锦史圣甲杨帆陈晓燕杨安钢张剑宁温伟红《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期242-245,共4页; 目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒... 展开更多; 关键词 B7-H1 SHRNA 慢病毒载体 U251MG细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定被引量：2: 1; 作者席文锦彭红艳白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢; 机构第四军医大学基础部免疫学教研室新疆解放军第第四军医大学西京医院神经外科第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室第四军医大学药学系生物制药学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-95,共3页; 基金国家自然科学基金重点项目(81030045) 陕西省科学技术研究发展计划社发攻关项目(2012K13-02-06); 文摘目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。; 关键词 HER2 原核表达基因工程菌种稳定性; 分类号 R392.9 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响被引量：1: 2; 作者方丹东李俊堂杨韬张雷鸣皇甫罗锴王曦张剑宁杨安钢; 机构第四军医大学西京医院神经外科洛阳市第第四军医大学免疫学教研室海军总院神经外科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期247-250,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30872978); 文摘目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒,包装病毒,以改构的Plenti6.3-mCherry载体包装的病毒为对照,感染人胶质瘤U87细胞,通过Blasticidin筛选出能够稳定表达抗生素抗性的细胞株。荧光显微镜观察mCherry的荧光表达,实时荧光定量检测miR-128的表达量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞增殖。结果:成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2,经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.1×107-8.3×107TU/mL之间,细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制。结论:成功构建了分别含有两种hsa-miR-128前体的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达hsa-miR-128的U87细胞株。miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖。; 关键词 hsa-miR-128 慢病毒构建 U87细胞细胞增殖; 分类号 R739.41 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名针对B7-H1的siRNA对脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 3; 作者王曦皇甫罗锴杨帆史圣甲郭张燕杨安钢温伟红张剑宁; 机构第四军医大学西京医院神经外科基础部免疫教研室海军总医院神经外科; 出处《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期183-188,共6页; 文摘目的:利用针对B7-H1的siRNA在脑胶质瘤U87细胞中下调B7-H1的表达,研究B7-H1的表达下调对U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:根据人B7-H1的mRNA序列设计并合成两对针对B7-H1的siRNA,于转染前一天将U87细胞接种于10 cm细胞培养皿中,以转染时细胞融合度为50%-80%为宜,分别用250μl OPTI-MEM稀释15μl siRNA与15μl转染试剂Lipofectamine 2000,将两者混匀室温静置20 min后,滴入细胞培养皿中。转染60或72 h后利用流式细胞术检测B7-H1在细胞表面的表达情况,利用荧光定量PCR和Western Blot分别检测B7-H1的mRNA和蛋白质水平,并用MTT和流式细胞术检测B7-H1表达下调后,U87细胞增殖和凋亡的改变。结果:与阴性对照组相比,两对针对B7-H1的siRNA均可有效下调U87细胞中B7-H1的表达,流式细胞术结果显示与阴性对照组相比,B7-H1阳性表达率由53.2%分别下调至26.7%和20.6%;MTT结果显示B7-H1表达下调后U87细胞的增殖被显著抑制,培养第5天吸光度值由0.58±0.02分别下降至0.451±0.02及0.342±0.016;流式细胞术结果显示B7-H1表达下调后U87细胞凋亡明显,早期凋亡率由0.1%分别增加至12.8%及13.2%。结论:B7-H1的表达下调可有效抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示B7-H1可能作为脑胶质瘤基因治疗的一个潜在靶点。; 关键词 B7-H1 RNAI U87细胞脑胶质瘤; Keywords B7-H1 RNAi U87 cell Glioma; 分类号 R739.4 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定: 4; 作者皇甫罗锴王曦郭张燕席文锦史圣甲杨帆陈晓燕杨安钢张剑宁温伟红; 机构第四军医大学西京医院神经外科第四军医大学基础部免疫学教研室海军总医院神经外科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期242-245,共4页; 基金国家自然科学基金(81171924); 文摘目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果。结果 qRT-PCR及Westernblot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达。结论所制备的针对B7-H1的shR-NA慢病毒能特异性沉默B7-H1。; 关键词 B7-H1 SHRNA 慢病毒载体 U251MG细胞; Keywords B7-H1 shRNA lentiviral expression vector U25 1 MG cell; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定	席文锦彭红艳白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响	方丹东李俊堂杨韬张雷鸣皇甫罗锴王曦张剑宁杨安钢	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	针对B7-H1的siRNA对脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响	王曦皇甫罗锴杨帆史圣甲郭张燕杨安钢温伟红张剑宁	《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定	皇甫罗锴王曦郭张燕席文锦史圣甲杨帆陈晓燕杨安钢张剑宁温伟红	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料