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鸡白细胞介素2真核表达质粒的构建、表达及对AIV疫苗免疫增强作用研究 被引量:9
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作者 由振强 于涟 +2 位作者 翁继锋 许健 徐根亮 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第6期350-353,共4页
将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和... 将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和外周血淋巴细胞(PBLC),荧光显微镜观察到融合蛋白在体外能稳定表达。HI试验显示,pCI-ChIL-2-EGFP与AIV疫苗共注射可明显提高AIV疫苗的免疫原性。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 EGFP 真核表达 AIV
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ChIL-2对H_5亚型AIV疫苗免疫增强作用研究 被引量:7
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作者 刘岩 由振强 +2 位作者 许健 郑江涛 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期797-801,共5页
鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果... 鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果表明:pCI-IL-2及rChIL-2均能显著增强AIV疫苗的免疫效果(P<0.05),pCI-IL-2和rChIL-2两组间差异不显著(P>0.05);证实鸡白细胞介素2对H5亚型禽流感疫苗有免疫增强作用.rChIL-2协同免疫组MTT及HI试验均在第四周达到峰值,pCI-IL-2协同免役组峰值出现时间稍晚,但随后质粒免疫组可维持在更高的水平值.提示IL-2蛋白的作用更迅速,IL-2质粒作用更持久. 展开更多
关键词 白细胞介素2 AIV MTT HI 免疫增强
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猪Ⅱ型圆环病毒浙江分离株全基因组的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 张朝政 由振强 +1 位作者 卢觅佳 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期777-782,共6页
越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中... 越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中的其它24株PCV2相比,核苷酸同源性为94.8%~99.8%,而与4株PCV1的核苷酸同源性仅为76.5%~78.0%.虽然PCV2基因从总体上来说相对稳定,但在不同地区分离到的PCV2中确实存在一定的基因差异. 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2) 断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS) 序列分析
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萧山鸡γ-干扰素(IFN-γ)成熟蛋白基因的克隆、原核表达及真核表达载体的构建 被引量:2
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作者 徐根亮 由振强 +2 位作者 余夏萌 吕冬梅 于涟 《浙江农业学报》 CSCD 2008年第2期88-91,共4页
以有丝分裂原ConA诱导鸡脾脏淋巴细胞,用Trizol试剂提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术获得了萧山鸡γ-干扰素成熟蛋白基因495 bp的序列,GenBank登录号为DQ470471。序列分析表明,与已经发表的鸡γ-干扰素成熟蛋白基因序列的核苷酸同源性为95%... 以有丝分裂原ConA诱导鸡脾脏淋巴细胞,用Trizol试剂提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术获得了萧山鸡γ-干扰素成熟蛋白基因495 bp的序列,GenBank登录号为DQ470471。序列分析表明,与已经发表的鸡γ-干扰素成熟蛋白基因序列的核苷酸同源性为95%-99.9%。将该cDNA序列构建得到鸡γ-干扰素的原核表达载体pET30a-ChIFN-γ,成功在大肠杆菌中表达了分子量20.88 kD的目的蛋白,与预期分子量一致;并构建得到了鸡γ-干扰素的pCI真核表达载体(pCI-ChIFN-γ)。 展开更多
关键词 萧山鸡γ-干扰素 RT-PCR 原核表达 真核表达载体
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鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析 被引量:3
5
作者 许健 于涟 +3 位作者 李龙 由振强 万旺军 刘岩 《科技通报》 2007年第1期52-57,101,共7页
根据鸡白细胞介素18(IL-18)cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因(Genbank accession,AY628648)。扩增片段全长591 bp,... 根据鸡白细胞介素18(IL-18)cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因(Genbank accession,AY628648)。扩增片段全长591 bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98.99%,只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在E.coli中得到表达,获得45 kD的GST-IL-18融合蛋白,经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析,为深入研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素18 克隆 序列分析 分子进化
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人参不定根乙醇提取物保护异丙肾上腺素诱导的心肌缺血作用研究 被引量:5
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作者 陈一豪 刘益凤 +6 位作者 曲雪峰 史红 陈建国 梅松 刘臻 由振强 王茵 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第12期4014-4020,共7页
目的研究人参不定根(ginseng adventitious roots,GAR)提取物对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌缺血损伤的保护作用。方法50只C57BL/6小鼠随机分为5组(n=10),包括对照组、ISO组、低剂量GAR+ISO组,高剂量GAR+ISO组、高剂... 目的研究人参不定根(ginseng adventitious roots,GAR)提取物对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌缺血损伤的保护作用。方法50只C57BL/6小鼠随机分为5组(n=10),包括对照组、ISO组、低剂量GAR+ISO组,高剂量GAR+ISO组、高剂量GAR组,连续灌胃28 d,在第27、28 d皮下注射ISO建立小鼠心肌缺血模型(对照组与高剂量GAR组注射同剂量生理盐水)。检测小鼠体重、心重、心重体重比和心电图变化,苏木精—伊红染色法染色检测心脏组织病理学改变,试剂盒检测心肌损伤相关酶及抗氧化相关酶活性,蛋白质印迹法检测炎症相关蛋白半胱天冬酶-1(caspase-1)及白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)表达变化。结果GAR预保护显著降低ISO导致的ST段升高和心重体重比增加,降低血清中心肌损伤相关酶乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶、谷丙转氨酶和心肌肌钙蛋白T水平,明显提高心肌组织抗氧化相关酶超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性。组织病理学分析也显示GAR能够减轻心肌损伤,通过蛋白质印记分析发现GAR明显减少炎症通路caspase-1、IL-1β蛋白表达。通过相同实验检测高剂量GAR组对正常机体组织病理及各类生化指标无任何明显损伤作用。结论GAR对ISO导致的心脏损伤具有明显的保护作用,其机制可能是增强内源性抗氧化能力及减少炎症蛋白表达。 展开更多
关键词 人参不定根 心肌缺血 人参皂苷 氧化应激 半胱天冬酶-1
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