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小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达被引量：3: 1; 作者田晓灵赵永刚 +2 位作者宋厚辉王志亮王凤龙《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期28-30,共3页; 目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,... 展开更多; 关键词小反刍兽疫 H基因表达抗原位点; 在线阅读下载PDF 职称材料

小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达被引量：2: 2; 作者田晓灵赵永刚 +3 位作者包静月王志亮李金明吴树清《中国动物检疫》 CAS 2009年第8期31-34,共4页; 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序... 展开更多; 关键词小反刍兽疫病毒真核表达重组质粒转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析被引量：2: 3; 作者赵永刚王君玮 +8 位作者王志亮赵云玲王清华张维陈义平刘华雷王华王伟伟田晓灵《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期25-28,共4页; 根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp... 展开更多; 关键词猪链球菌2型毒力基因检测序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达: 4; 作者赵永刚田晓灵 +2 位作者宋厚辉王志亮吴树清《中国动物检疫》 CAS 2009年第7期23-25,共3页; 目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重... 展开更多; 关键词小反刍兽疫病毒 F基因原核表达抗原位点; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达被引量：3: 1; 作者田晓灵赵永刚宋厚辉王志亮王凤龙; 机构内蒙古农业大学动物医学与科学学院中国动物卫生与流行病学中心中国科学院青岛生物能源与过程研究所; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期28-30,共3页; 文摘目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRVH基因的主要抗原位点;用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达。结论成功表达了PPRVH基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础。; 关键词小反刍兽疫 H基因表达抗原位点; Keywords peste des petits ruminants （PPRV） H gene express antigen epitope; 分类号 S852.43 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达被引量：2: 2; 作者田晓灵赵永刚包静月王志亮李金明吴树清; 机构中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心内蒙古农业大学; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第8期31-34,共4页; 基金农业部重大外来动物疫病诊断方法研究及防治技术推广储备项目农业部948项目资助; 文摘目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础。; 关键词小反刍兽疫病毒真核表达重组质粒转染; Keywords Peste des petits ruminants virus eukaryotic expression recombinant plasmid, transfection; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析被引量：2: 3; 作者赵永刚王君玮王志亮赵云玲王清华张维陈义平刘华雷王华王伟伟田晓灵; 机构中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心扬州大学农学院四川农业大学; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期25-28,共4页; 基金国家"十五"攻关项目2003BA712A04-04; 文摘根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp目的片段(外引物)和1443bp的目的片段(内引物)。说明分离株SSsc0501为MRP+EF+SLY+,属于具有3种主要毒力因子的强毒株。经对PCR阳性产物测序及序列分析,结果其与P1/7株的核苷酸序列完全一致,与1933株的同源性达99.7%,仅在128位、217位、744位、1380位、1386位的5个核苷酸发生突变。在氨基酸水平上SSsc0501株与1933株的同源性达99.6%,有2个氨基酸发生替代。; 关键词猪链球菌2型毒力基因检测序列分析; Keywords Streptococcus suis 2 virulence gene detection sequence analysis; 分类号 S852.611 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达: 4; 作者赵永刚田晓灵宋厚辉王志亮吴树清; 机构中国动物卫生与流行病学中心内蒙古农业大学动物医学与科学学院; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第7期23-25,共3页; 文摘目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。; 关键词小反刍兽疫病毒 F基因原核表达抗原位点; Keywords Peste des petits ruminants virus （PPRV） F gene Prokaryotic expression Antigen epitope; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达	田晓灵赵永刚宋厚辉王志亮王凤龙	《中国动物检疫》 CAS	2009	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达	田晓灵赵永刚包静月王志亮李金明吴树清	《中国动物检疫》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析	赵永刚王君玮王志亮赵云玲王清华张维陈义平刘华雷王华王伟伟田晓灵	《中国动物检疫》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达	赵永刚田晓灵宋厚辉王志亮吴树清	《中国动物检疫》 CAS	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料