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题名产青霉素G酰化酶工程菌的构建
被引量：1
- 1
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作者
邵威平
吴卓颖
张永玲
杨富民
田常庆
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机构
甘肃农业大学食品科学与工程学院
临夏州人民医院
甘肃农业大学生命科学技术学院
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出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期132-137,共6页
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基金
甘肃省科技重大专项(1102NKDN058)
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文摘
【目的】构建表达巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶(PGA)的枯草芽孢杆菌工程菌.【方法】首先采用PCR从巨大芽孢杆菌基因组DNA中扩增出长度为2 409bp的PGA编码基因,经琼脂糖凝胶电泳检测及DNA测序验证后,再将其与枯草芽孢杆菌穿梭表达载体PMA5(7.5kb)连接后导入到枯草芽孢杆菌10397中表达,并通过聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳(SDS-PAGE)检验其能否表达.【结果】构建了9.9kb大小的PMA5-PGA重组质粒,经SDS-PAGE验证,青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌10 397中作出表达.基因工程菌在37℃、220r/min培养36h发酵条件下,所产PGA的酶活可达到12.426U/mL,比巨大芽孢杆菌发酵产PGA酶提高了5.26倍.【结论】所构建的枯草芽孢杆菌是青霉素G酰化酶的高产工程菌.
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关键词
青霉素G酰化酶
PCR
重组表达
基因工程菌
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Keywords
penicillin G acylase
PCR
recombinant expression
gene engineering bacteria
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分类号
Q815
[生物学—生物工程]
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题名重组枯草芽孢杆菌发酵产青霉素G酰化酶的条件优化
被引量：1
- 2
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作者
吴卓颖
邵威平
张永玲
杨富民
田常庆
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机构
甘肃农业大学食品科学与工程学院
临夏州人民医院
甘肃农业大学生命科学技术学院
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出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期116-126,共11页
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基金
甘肃省科技重大专项(1102NKDN058)
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文摘
【目的】研究提高PGA酶活力及稳定性.【方法】以重组枯草芽孢杆菌10397(pMA5-PGA)产PGA酶活力为研究对象,在单因素试验基础上,采用响应面设计,对重组菌发酵产PGA的培养基及发酵条件进行了研究.【结果】以葡萄糖20.39g/L、胰蛋白胨15.48g/L、糊精6.1g/L为培养基,在三角瓶装液量16.23%、接种量4.32%、温度35.43℃、时间48.34h、摇床转速220r/min的条件下,所产PGA的酶活力为14.167U/mL,比初始发酵条件下发酵重组菌产PGA的酶活提高了1.14倍.【结论】通过条件优化,可提高重组枯草芽孢杆菌PGA的酶活力,并为工业化生产PGA提供科学依据.
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关键词
重组枯草芽孢杆菌
发酵
青霉素G酰化酶
工艺优化
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Keywords
Bacillus megaterium
fermentation
penicillin G Acylase
process optimization
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分类号
Q814
[生物学—生物工程]
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