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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失重组质粒的构建及序列分析
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作者 甄荣芬 喻启桂 +2 位作者 陈伟 樊荣 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期88-90,共3页
目的:构建HSV1 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法:以p UC18/ TK 重组质粒DNA 为模板,用PCR 方法扩增TK5′端503bp 基因片段,并将扩增的片段克隆入载体p UC18 中(p UC1... 目的:构建HSV1 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法:以p UC18/ TK 重组质粒DNA 为模板,用PCR 方法扩增TK5′端503bp 基因片段,并将扩增的片段克隆入载体p UC18 中(p UC18/TK1) ;用Pst I 和Hind Ⅲ双酶切pUC18/ TK, 获得TK3′端383bp 片段, 将此酶切片段克隆入pUC18/ TK1 中, 并进行测序。结果: 构建成重组质粒pUC18/ TK- 。经酶切鉴定获得1 条约900 bp 的基因片段; 序列测定证实, HSV117syn + TK 基因缺失了第493 ~744 位251 对碱基。结论:成功地构建了部分缺失的HSV1/TK- 基因重组质粒,为研制其突变株奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因缺失 序列分析
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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1-17区基因的原核表达、纯化及表达产物鉴定 被引量:6
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作者 缪军 薛采芳 +1 位作者 李珣 甄荣芬 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期30-32,共3页
目的 为进一步研究和应用恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 的17区基因(MSP1- 17),本文原核表达了FUP株MSP1 的17 区基因,并纯化及鉴定了表达蛋白。方法 将MSP1- 17 基因片段克隆入原核表达载体pGEX- ... 目的 为进一步研究和应用恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 的17区基因(MSP1- 17),本文原核表达了FUP株MSP1 的17 区基因,并纯化及鉴定了表达蛋白。方法 将MSP1- 17 基因片段克隆入原核表达载体pGEX- 4T- 1,形成pGEX- 4T- 1/MSP1- 17。IPTG诱导pGEX- 4T- 1/MSP1- 17 转化的BL21菌,纯化并用MSP1- 17 特异性单克隆抗体鉴定表达产物。结果 成功地构建了pGEX- 4T- 1/MSP1- 17,转化菌经诱导表达出与GST融合的蛋白(约40KD),纯化后纯度达72% ,MSP1- 17 特异性单克隆抗体可识别表达蛋白。结论 成功表达并纯化了MSP1- 17 蛋白,为深入研究和应用MSP1- 17 展开更多
关键词 恶性疟原虫 裂殖子 表面蛋白1 原核表达 纯化
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通过序列分析筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS-1结合蛋白 被引量:1
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作者 刘军 李英辉 +5 位作者 薛采芳 甄荣芬 李旬 王宪锋 刘忠湘 万磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期123-125,共3页
目的筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果该方法可有效地筛选出PACS1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱... 目的筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果该方法可有效地筛选出PACS1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱疹病毒I型蛋白组中,共筛选出可能与PACS1结合的蛋白质33种。结论建立了一种有效的筛选PACS1结合蛋白的方法。筛选出的单纯疱疹病毒I型的PACS1结合蛋白,将为研究PACS1在疱疹病毒发生及潜伏性感染中的作用提供指导。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅰ型 PACS-1 蛋白组 序列分析 生物信息学 筛选
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pLTRNL介导HSV-1 TK基因长期稳定转染人肝癌细胞系的建立 被引量:1
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作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 樊荣 甄荣芬 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期26-28,共3页
以脂质体基因转移技术,将含HSV1TK基因的重组逆转录病毒载体pLTRNL转染人肝癌细胞系hHCC。经抗生素G418选择,筛选出HSV1TK基因转染的hHCC,再进行克隆化和亚克隆化后扩大培养。应用PCR,RT... 以脂质体基因转移技术,将含HSV1TK基因的重组逆转录病毒载体pLTRNL转染人肝癌细胞系hHCC。经抗生素G418选择,筛选出HSV1TK基因转染的hHCC,再进行克隆化和亚克隆化后扩大培养。应用PCR,RTPCR及slotblot狭槽印迹等方法,对转染细胞基因组DNA和总RNA进行了鉴定。结果表明,HSV1TK基因已整合入hHCC细胞基因组中,且有TK基因的mRNA转录。HSV1TK基因稳定转染的hHCC的建立,为在体外和动物模型上对肝癌进行基因治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 基因治疗 胸苷激酶 HSV-1 pLTRNL
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:1
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作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 薛采芳 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期91-93,共3页
用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I 型胸苷激酶( HSV1 TK) 基因的p UC18/TK 质粒,将切出的TK 基因片段克隆入原核表达载体p WR4501 中,构建成HSV1 TK 基因重组表达质粒... 用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I 型胸苷激酶( HSV1 TK) 基因的p UC18/TK 质粒,将切出的TK 基因片段克隆入原核表达载体p WR4501 中,构建成HSV1 TK 基因重组表达质粒p WR4501/TK。以HSV1 TK 特异性引物TK1 For 和TK2 Rev 进行PCR 鉴定可扩增出预期的503 bp 的TK 基因编码区部分序列;EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切质粒p WR4501/ TK, 可切出约1150bp 的DNA 片段, 表明重组质粒中已插入HSV1 TK基因片段。用IPTG 诱导p WR4501/TK/JM109 ,表达出相对分子质量( Mr) 约为97 000 的TK 和β半乳糖苷酶( Mr55 000) 融合蛋白。薄层扫描显示,该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的27 .47 % 。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 融合表达 大肠杆菌
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因融合表达产物的免疫学特性研究 被引量:2
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作者 陈伟 薛采芳 +1 位作者 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期305-307,共3页
目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹... 目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹显示 ,自制和国外提供的抗TK兔血清 ,均能特异性地识别Mr 约为97000的TK融合蛋白。免疫荧光染色得到的结果满意 ,而且自制抗血清的效价和染色强度均优于国外提供的免疫血清。结论原核表达的HSV 1TK融合蛋白具有较好的免疫学活性 ;自制抗HSV 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因治疗 基因表达
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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B胞浆区编码基因的原核表达、纯化及抗体制备
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作者 李英辉 刘军 +5 位作者 薛采芳 甄荣芬 李旬 王宪锋 刘忠湘 万磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期549-551,共3页
目的获得高纯度的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1糖蛋白BgB胞浆区蛋白并制备其特异性抗体。方法从感染HSV-1的BHK细胞中提取总RNA用RT-PCR特异性扩增HSV-1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆入表达载体pGEX4T-1中,进行融合表达... 目的获得高纯度的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1糖蛋白BgB胞浆区蛋白并制备其特异性抗体。方法从感染HSV-1的BHK细胞中提取总RNA用RT-PCR特异性扩增HSV-1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆入表达载体pGEX4T-1中,进行融合表达。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗体,进行Westernblot鉴定。结果用IPTG诱导后,表达出相对分子质量Mr约42000的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备的抗体滴度为1400。结论获得重组HSV-1gB胞浆区蛋白及其特异性抗体,为后续功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒I型 糖蛋白B 原核表达 谷胱甘肽巯基-转移酶 纯化 抗体
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约氏疟原虫纯化保护性抗原对鼠疟红内期保护性免疫调节作用的研究 Ⅲ.53kDa抗原的免疫保护性
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作者 王春莉 薛采芳 +1 位作者 张荣庆 甄荣芬 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1995年第5期3-6,共4页
用53kDa抗原单独或加佐剂经不同途径、以不同剂量免疫BALB/c小鼠,再用约氏疟原虫非致死株105PRBc/只攻击,观察各组小鼠血原虫率变化,比较血清抗体水平。53kDa抗原20μg/只加福氏完全佐剂经腹腔注射免疫... 用53kDa抗原单独或加佐剂经不同途径、以不同剂量免疫BALB/c小鼠,再用约氏疟原虫非致死株105PRBc/只攻击,观察各组小鼠血原虫率变化,比较血清抗体水平。53kDa抗原20μg/只加福氏完全佐剂经腹腔注射免疫2次可使小鼠产生有效的免疫保护。以腹腔注射产生的保护作用最好。 展开更多
关键词 约氏疟原虫 保护性抗原 原虫率 53kDa 疟原虫
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恶性疟原虫富组氨酸蛋白2的原核表达、纯化及表达产物的鉴定 被引量:2
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作者 李珣 薛采芳 +2 位作者 缪军 甄荣芬 刘忠湘 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期35-38,共4页
目的为将恶性疟原虫的富组氨酸蛋白2(HRP2)应用于疟疾诊断和疫苗研究,本文原核表达、纯化及鉴定了恶性疟原虫的HRP2。方法将HRP2基因片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,形成pGEX-4T-1/HRP2;诱导pGEX-4T1/HRP2转化的BL21菌,纯化... 目的为将恶性疟原虫的富组氨酸蛋白2(HRP2)应用于疟疾诊断和疫苗研究,本文原核表达、纯化及鉴定了恶性疟原虫的HRP2。方法将HRP2基因片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,形成pGEX-4T-1/HRP2;诱导pGEX-4T1/HRP2转化的BL21菌,纯化表达产物并免疫BALB/C小鼠;以免疫色谱法鉴定表达产物,以免疫小鼠血清对受染红细胞(IRBC)进行Westemblot分析。结果成功构建了pGEX-4T-1/HRP2,经诱导表达出与GST融合的蛋白(约60KD),纯化后纯度达92%;HRP2特异性单抗可识别表达蛋白,免疫小鼠血清可识别IRBC中的原虫HRP2抗原。结论成功表达并纯化了HRP2蛋白,为深入研究和应用HRP2打下基础。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 富组氨酸蛋白2 GST融合蛋白
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