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人GM－CSF在大肠杆菌中的表达及纯化
1
作者
李迎秋
徐帆
+2 位作者
许琳
龙綮新
王章
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
1996年第S2期80-85,共6页
通过ＰＣＲ定点突变，对编码人ＧＭ－ＣＳＦ因子成熟蛋白基因的５′端进行改造．将改造的ＧＭ－ＣＳＦ基因克隆入质粒ｐＢＶ２２０，构建成表达质粒ｐＢＶ２２０－ＧＭ－ＣＳＦ，将其转化ＤＨ５ａ感受态菌后，在温度诱导下，ＧＭ－ＣＳ...
通过ＰＣＲ定点突变，对编码人ＧＭ－ＣＳＦ因子成熟蛋白基因的５′端进行改造．将改造的ＧＭ－ＣＳＦ基因克隆入质粒ｐＢＶ２２０，构建成表达质粒ｐＢＶ２２０－ＧＭ－ＣＳＦ，将其转化ＤＨ５ａ感受态菌后，在温度诱导下，ＧＭ－ＣＳＦ非融合基因获得了表达，表达产物以包涵体形式沉积在细胞内，占细胞总蛋白的１３％，并能特异地与抗人ＧＭ－ＣＳＦ单克隆抗体结合．通过对包涵体的提取、裂解，得到变性的ＧＭ－ＣＳＦ，再经疏水柱层析，凝胶过滤，可纯化出ＧＭ－ＣＳＦ，纯度达９９％以上，比活达１．２８×１０７ｕ／ｍｇ。
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关键词
粒/巨噬细胞集落刺激因子
PCR
包涵体
表达纯化
活性鉴定
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题名
人GM－CSF在大肠杆菌中的表达及纯化
1
作者
李迎秋
徐帆
许琳
龙綮新
王章
机构
中山大学昆虫学研究所
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
1996年第S2期80-85,共6页
文摘
通过ＰＣＲ定点突变，对编码人ＧＭ－ＣＳＦ因子成熟蛋白基因的５′端进行改造．将改造的ＧＭ－ＣＳＦ基因克隆入质粒ｐＢＶ２２０，构建成表达质粒ｐＢＶ２２０－ＧＭ－ＣＳＦ，将其转化ＤＨ５ａ感受态菌后，在温度诱导下，ＧＭ－ＣＳＦ非融合基因获得了表达，表达产物以包涵体形式沉积在细胞内，占细胞总蛋白的１３％，并能特异地与抗人ＧＭ－ＣＳＦ单克隆抗体结合．通过对包涵体的提取、裂解，得到变性的ＧＭ－ＣＳＦ，再经疏水柱层析，凝胶过滤，可纯化出ＧＭ－ＣＳＦ，纯度达９９％以上，比活达１．２８×１０７ｕ／ｍｇ。
关键词
粒/巨噬细胞集落刺激因子
PCR
包涵体
表达纯化
活性鉴定
Keywords
GM CSF, PCR, E.coli , expression and purification, activity assay
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
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1
人GM－CSF在大肠杆菌中的表达及纯化
李迎秋
徐帆
许琳
龙綮新
王章
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
1996
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