目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为...目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。展开更多
文摘目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。
