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内含赤羽病病毒S基因假病毒的构建、鉴定及初步应用
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作者 李超 潘俊慧 +6 位作者 王素春 隋金钰 魏世萌 祁倩 吴发兴 李博文 王楷宬 《中国动物检疫》 2025年第1期96-102,共7页
为制备赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)核酸诊断试剂中的阳性对照品,本研究首先合成AKAV S全基因,然后构建重组慢病毒穿梭载体pLenti-GIII-CMV-CBH-GFP-2A-Puro-AKAV,并将测序鉴定成功的重组慢病毒穿梭载体与包装载体共转染293T细胞;收... 为制备赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)核酸诊断试剂中的阳性对照品,本研究首先合成AKAV S全基因,然后构建重组慢病毒穿梭载体pLenti-GIII-CMV-CBH-GFP-2A-Puro-AKAV,并将测序鉴定成功的重组慢病毒穿梭载体与包装载体共转染293T细胞;收获纯化的细胞培养液上清,进行核酸质粒残留检测;将上清感染293T细胞,观察绿色荧光蛋白基因表达情况,并采用RT-PCR和荧光定量RT-PCR试验检测上清中是否存在AKAV S基因片段,最终通过数字RT-PCR方法进行绝对定值。结果显示;纯化的细胞培养液上清中无核酸质粒残留,在培养72 h的293T细胞中可观察到绿色荧光;采用RT-PCR和荧光定量RT-PCR试验均可扩增出AKAV S基因目的片段;采用数字RT-PCR方法,将制备的假病毒溶液拷贝数浓度定值为3.36×10^(3)copies/μL。结果表明,本研究成功构建了含AKAV S全基因片段的假病毒,可作为AKAV核酸检测的阳性对照品,为后续研发AKAV核酸诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 S基因 假病毒粒子 阳性对照品
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合成生物学概述及其在兽医领域的应用前景展望
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作者 潘俊慧 周凯钰太 +6 位作者 王素春 许铭柯 隋金钰 魏世萌 祁倩 李超 王楷宬 《中国动物检疫》 2025年第2期57-65,共9页
合成生物学是以人工设计和基因组改造为核心的一门多学科交叉融合的前沿学科,其基于工程学原理,通过人工合成生物调控元件、模块和基因线路调控网络等对底盘细胞进行设计和改造,以实现底盘细胞和基因线路的工程化。近年来,合成生物学在... 合成生物学是以人工设计和基因组改造为核心的一门多学科交叉融合的前沿学科,其基于工程学原理,通过人工合成生物调控元件、模块和基因线路调控网络等对底盘细胞进行设计和改造,以实现底盘细胞和基因线路的工程化。近年来,合成生物学在我国兽医领域得到快速发展,目前已被用于基因工程疫苗研究、病原微生物检测、抗生素替代品研发等方面,并在兽用药品与生物制品研发方面展示出了巨大应用潜力,但同时也伴随着生物安全、伦理、监管、公众认知等方面的挑战。本文对合成生物学进行概述,对其在兽医领域中的研究和应用前景进行展望,以期为合成生物学在兽医领域的深入应用提供参考。 展开更多
关键词 合成生物学 兽医领域 基因工程 应用前景
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全球兽药产业发展现状 被引量:4
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作者 潘俊慧 周凯钰太 +4 位作者 王素春 冷寅赫 陈义平 范根成 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期52-58,共7页
兽药产业是促进养殖业健康发展的基础性产业,在保障动物源性食品安全和公共卫生安全等方面具有重要作用。为了解全球兽药行业发展状况,对全球兽药产业结构、发展现状和研发投入等进行了综述分析。受全球动物疫病频发、政府支持力度加大... 兽药产业是促进养殖业健康发展的基础性产业,在保障动物源性食品安全和公共卫生安全等方面具有重要作用。为了解全球兽药行业发展状况,对全球兽药产业结构、发展现状和研发投入等进行了综述分析。受全球动物疫病频发、政府支持力度加大、公众对动物源食品卫生安全要求提高、宠物市场快速增长等因素影响,全球兽药产业市场规模快速增长,2015—2021年全球兽药总销售额从357.16亿美元增长到477.83亿美元,复合增长率为3.70%;全球兽药产业发展高度集中,北美洲、欧洲和亚洲掌控了全球80.52%的兽药市场;兽用生物制品市场份额占比持续增长,从2005年的25%增加到2020年的30%,而兽用化学药品市场份额却呈下降趋势,从63%降到59%;全球兽药产业结构逐步调整,宠物行业兽药销售额逐步上升,已接近食品动物份额;兽药研发投入持续加大,全球兽药行业专利授权数量2019年后呈现快速上升趋势。本文通过分析全球兽药产业结构及发展变化趋势,了解制约产业发展的因素及当前面临的形势和挑战,以期为我国兽药行业的高质量发展提供新思路和新举措。 展开更多
关键词 兽药产业 生物制品 发展现状 全球
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动物疫病活载体疫苗研究进展 被引量:2
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作者 周凯钰太 潘俊慧 +5 位作者 王素春 禹兰平 杨文静 梁晚枫 孙福亮 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期47-57,共11页
活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领... 活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领域应用较多。病毒载体包括DNA病毒(如腺病毒、腺相关病毒和痘病毒等)和RNA病毒(如新城疫病毒、流感病毒等);细菌载体包括减毒致病菌与非致病菌两类,主要包括乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。活载体疫苗常用的抗原呈递策略有载体-宿主平衡致死系统、微生物表面展示系统。多种疫苗载体的开发及抗原呈递策略的选择,使得活载体疫苗的使用价值最大化。不同载体疫苗在预防疫病方面均有不同优缺点,应根据实际情况选择最优最适合的活载体疫苗。本文综述了动物疫病防控领域的病毒和细菌活载体疫苗研究进展及其抗原呈递方式,以期为活载体疫苗的进一步研究提供参考。 展开更多
关键词 活载体疫苗 病毒载体 细菌载体 疫苗开发 抗原呈递
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猫冠状病毒病诊断技术研究进展
5
作者 魏世萌 郝英男 +4 位作者 潘俊慧 王素春 周凯钰太 祁倩 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期76-82,共7页
猫冠状病毒病是由猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)感染引起的一种以上呼吸道、肠道和胸腹膜炎症为主的猫传染性疾病,主要通过粪口途径传播,在全世界均有流行,目前无有效疫苗和特效治疗药物。其中由猫传染性腹膜炎病毒引发的猫传染... 猫冠状病毒病是由猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)感染引起的一种以上呼吸道、肠道和胸腹膜炎症为主的猫传染性疾病,主要通过粪口途径传播,在全世界均有流行,目前无有效疫苗和特效治疗药物。其中由猫传染性腹膜炎病毒引发的猫传染性腹膜炎致死率极高,且不易诊断和预防,已成为病死率最高的猫病毒性疾病之一。猫冠状病毒病的临床诊断和大部分实验室检测技术均不具有特异性,对于区分猫肠道冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒感染还存在一些困难。目前,基于PCR技术的RT-PCR和RT-qPCR特异性相对较高,RT-LAMP和RT-RAA等新技术的开发和应用可逐步填补临床快速检测的空白。本文通过对猫冠状病毒病诊断技术研究进展进行综述,以期为建立猫冠状病毒病快速诊断方法和制定诊断技术标准奠定基础。 展开更多
关键词 猫冠状病毒 猫传染性腹膜炎病毒 诊断技术 临床诊断 实验室诊断
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赤羽病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
6
作者 李超 王素春 +5 位作者 隋金钰 潘俊慧 魏世萌 祁倩 周凯钰太 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期111-117,共7页
为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并... 为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并利用该方法与AKAV检疫行业标准推荐方法同时对临床采集的80份牛羊血液样品进行检测,以检验方法的临床应用效果。结果显示:本研究建立的检测方法敏感性较高,最低检测限为13.4 copies/μL;特异性良好,与口蹄疫病毒、牛冠状病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒、牛白血病病毒等均无交叉反应;组内试验变异系数为0.93%~2.47%,组间试验为1.25%~2.76%,重复性良好;利用建立的方法从80份临床样品中检出AKAV阳性样品21份,该检测结果与AKAV检疫行业标准推荐方法的符合率为98.75%。结果表明,本研究建立的AKAV荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高,特异性及重复性好,适用于赤羽病临床检测,为赤羽病病原学监测和诊断技术标准开发提供了技术支撑。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 实时荧光定量RT-PCR 方法建立 初步应用
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H5、H7和H9亚型禽流感病毒四重荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 王素春 仲焕香 +6 位作者 姜楠 姜利建 潘子豪 孙福亮 刘华雷 黄保续 王楷宬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1429-1437,共9页
旨在提高对禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)检测效率,及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域,设计并合成了相关探针和引物,建立了禽流感病毒(AIV)四重荧光RT-PCR检测方法,该方法可在检测禽... 旨在提高对禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)检测效率,及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域,设计并合成了相关探针和引物,建立了禽流感病毒(AIV)四重荧光RT-PCR检测方法,该方法可在检测禽流感病毒(AIV)的同时,确定病原是否为H5、H7和H9亚型。结果显示,该检测方法耗时短、特异性好、检测下限达到10^-5 ng·μL^-1。采用该方法检测临床采集的13个活禽交易市场的384份禽咽喉和泄殖腔双拭子样品,经检测,其中有60份样品为流感病毒阳性,且全部是H9亚型,该结果与行业标准方法(NY/T 772-2013)检测结果一致,κ值为1(P<0.001)。本方法能实现对禽流感病毒及H5、H7和H9亚型的高通量快速检测,将在AIV快速检测中发挥重要作用。 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型 四重荧光RT-PCR检测方法
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全面取代活禽市场的必要性和可行性分析 被引量:4
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作者 王素春 蒋文明 +3 位作者 侯广宇 李金平 刘朔 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期38-40,共3页
活禽市场在禽流感的发生和传播中发挥着病毒汇集、增殖、杂交、变异、储存和传播的作用,严重威胁着我国养禽业健康持续发展和公共卫生安全,与我国禽流感防控和养禽业转型升级方向相悖。随着冰鲜禽肉上市和日益普及的电子商务等业务的发... 活禽市场在禽流感的发生和传播中发挥着病毒汇集、增殖、杂交、变异、储存和传播的作用,严重威胁着我国养禽业健康持续发展和公共卫生安全,与我国禽流感防控和养禽业转型升级方向相悖。随着冰鲜禽肉上市和日益普及的电子商务等业务的发展,在全国范围内,使其全面取代传统的活禽市场成为可能,并可以让民众通过更好的途径消费新鲜美味的禽肉。全面取代活禽市场,禽流感防控事半功倍。 展开更多
关键词 禽流感 活禽市场 电子商务 疫病防控 公共卫生
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新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 王素春 孙亚伟 +6 位作者 樊擎莹 黄保续 康京丽 汪洋 刘华雷 张云香 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期74-78,共5页
为满足新城疫病毒高通量快速检测的需要,针对新城疫病毒M基因序列,通过基因比对分析保守区域,经同源性分析后,设计合成多条引物和探针并对其筛选,建立了一种能够快速检测新城疫病毒的实时荧光RTPCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性... 为满足新城疫病毒高通量快速检测的需要,针对新城疫病毒M基因序列,通过基因比对分析保守区域,经同源性分析后,设计合成多条引物和探针并对其筛选,建立了一种能够快速检测新城疫病毒的实时荧光RTPCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性进行了评估。结果显示,该方法检测耗时短、特异性好,检测下限达10-4 ng/μL。利用该方法,对480份临床采集的各类家禽咽拭子样品进行检测,共检测出25份阳性,与常规RT-PCR检测方法结果一致,κ值为1(P<0.001)。结果表明,该方法快速、准确,可用于新城疫病毒的快速检测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 M基因 实时荧光RT-PCR 检测方法 建立与应用
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GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒的病原特性分析 被引量:2
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作者 王素春 周凯钰太 +9 位作者 潘俊慧 肖志宇 徐太辉 李金积 张富友 禹兰平 杨文静 崔成都 孙福亮 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2023年第7期8-16,共9页
为了解GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的病原特性,筛选6株GI-19型IBV进行EID_(50)测定以及鸡胚致病力和雏鸡致病性试验,并应用高通量测序技术进行基因组测序,分析病毒基因组和主要结构蛋白编码基... 为了解GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的病原特性,筛选6株GI-19型IBV进行EID_(50)测定以及鸡胚致病力和雏鸡致病性试验,并应用高通量测序技术进行基因组测序,分析病毒基因组和主要结构蛋白编码基因生物特性。结果显示:IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株对鸡胚有致病性,导致鸡胚表现胚体蜷缩、矮小等典型病变特征,经SPF鸡胚传代至第5代,表现较为稳定的EID_(50)(10^(-5.33)/0.1 mL),但其对雏鸡无致病性;IBV/Chicken/Sichuan/C1452/2021分离株对鸡胚没有致病性,但将其接种1日龄雏鸡,可导致雏鸡出现33.33%(5/15)的发病率,引起的典型病变为雏鸡肾脏尿酸盐沉积。对6株GI-19型IBV分离株的基因组和主要结构蛋白编码基因进行系统进化分析和生物特性分析,发现IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株与其他分离株存在明显差异,且在1a和1b基因区域存在重组现象。结果表明:我国流行的部分IBV毒株对鸡胚和雏鸡的致病性存在差异;IBV毒株S1基因的变异可能会影响其致病力,而N基因的变异可能会影响其感染细胞的能力。本研究分析了部分GI-19型IBV毒株的病原学特征,为揭示IBV的致病机理和免疫机制奠定了基础,为制定鸡传染性支气管炎防控策略提供了依据。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 致病性 高通量测序 病原特性
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2011—2012年我国细菌性禽病临床信息调查分析
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作者 王素春 庄青叶 +6 位作者 李金平 蒋文明 侯广宇 刘朔 黄保续 陈继明 韩先杰 《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期65-67,共3页
为了解我国禽群细菌性疾病的临床发病情况,2011—2012年,在全国有代表性的禽病门诊单位,开展禽病临床信息监测,共收集禽细菌性疾病临床诊断信息5319条。通过对这些信息进行统计分析,阐明不同宿主、不同季节和不同地域禽群细菌性疾病的... 为了解我国禽群细菌性疾病的临床发病情况,2011—2012年,在全国有代表性的禽病门诊单位,开展禽病临床信息监测,共收集禽细菌性疾病临床诊断信息5319条。通过对这些信息进行统计分析,阐明不同宿主、不同季节和不同地域禽群细菌性疾病的临床发病情况,为我国有针对性开展禽细菌性疾病的防控提供重要参考资料。 展开更多
关键词 禽病 临床 调查 细菌病
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川芎、当归、红花和人参萃取液对低切应力环境下血管内皮细胞凋亡的影响 被引量:28
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作者 范柳 王素春 +2 位作者 张旭静 黄久仪 王桂清 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期239-241,共3页
目的:探讨川芎、当归、红花和人参萃取液对动脉粥样硬化的预防作用及其机制。方法:采用~3H-胸腺嘧啶掺入率分析和DNA片段凝胶电泳测定,研究川芎、当归、红花和人参萃取液抑制体外培养的血管内皮细胞在低切应力环境下的增殖并阻止其... 目的:探讨川芎、当归、红花和人参萃取液对动脉粥样硬化的预防作用及其机制。方法:采用~3H-胸腺嘧啶掺入率分析和DNA片段凝胶电泳测定,研究川芎、当归、红花和人参萃取液抑制体外培养的血管内皮细胞在低切应力环境下的增殖并阻止其凋亡的作用。结果:(1)处理6h后,~3H-胸腺嘧啶掺入率随剂量增加而逐渐下降,0.5%浓度时~3H-胸腺嘧啶掺入率下降已非常明显,达40%,12h后趋于稳定。(2)在低切应力条件下,内皮细胞出现明显的DNA梯形带,在高切应力环境时,内皮细胞凋亡被抑制;给予0.5%的萃取液处理2h后DNA梯形带消失。结论:川芎、当归、红花和人参萃取液可阻止低切应力环境下内皮细胞的凋亡。 展开更多
关键词 川芎 当归 红花 人参 萃取液 低切应力环境 血管内皮细胞 细胞凋亡 动脉粥样硬化
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当归、川芎、红花、人参萃取液对离体培养牛血管内皮细胞一氧化氮合酶的影响 被引量:10
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作者 张旭静 王素春 +2 位作者 范柳 黄久仪 王桂清 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期36-38,共3页
目的 :研究以当归、川芎、红花、人参为主要成份的CO2 超临界萃取液对低切应力条件下培养的内皮细胞一氧化氮合酶 (eNOS)表达的影响 ;探讨该萃取液改善血管功能、防止动脉粥样硬化的机理。方法 :采用Westernblot印迹免疫检测 ,研究该萃... 目的 :研究以当归、川芎、红花、人参为主要成份的CO2 超临界萃取液对低切应力条件下培养的内皮细胞一氧化氮合酶 (eNOS)表达的影响 ;探讨该萃取液改善血管功能、防止动脉粥样硬化的机理。方法 :采用Westernblot印迹免疫检测 ,研究该萃取液对低切应力环境下体外培养的牛血管内皮细胞eNOS表达的影响。结果 :低切应力水平下 ,内皮细胞eNOS表达降低 ,给予 0 .5 %萃取液 1ml(以萃取原液为 1 0 0 % ) ,eNOS的表达明显增加 ,并接近在高切应力水平下内皮细胞eNOS的正常表达水平。结论 :当归、川芎、红花、人参萃取液可上调低切应力环境下内皮细胞eNOS的表达。 展开更多
关键词 当归 川芎 红花 人参 离体培养 血管内皮细胞 一氧化氮合酶 动脉粥样硬化 细胞凋亡
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2014—2016年华东地区某市活禽市场禽流感流行病学调查与分析 被引量:22
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作者 蒋文明 王艳 +6 位作者 李金平 侯广宇 彭程 刘朔 王素春 黄保续 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第1期14-18,共5页
为了解华东地区某市活禽市场中禽流感病毒的污染状况,2014—2016年对该市活禽市场的家禽进行了禽流感流行病学调查。结果显示:该市活禽市场禽流感病毒污染面较广,94.12%的市场存在禽流感病毒污染;H9N2亚型病毒感染率较高,样品总体阳性率... 为了解华东地区某市活禽市场中禽流感病毒的污染状况,2014—2016年对该市活禽市场的家禽进行了禽流感流行病学调查。结果显示:该市活禽市场禽流感病毒污染面较广,94.12%的市场存在禽流感病毒污染;H9N2亚型病毒感染率较高,样品总体阳性率为22.66%,场点总阳性率为94.12%;H7N9亚型病毒感染率经历了一个升降过程,2015年上半年达到高峰,之后显著降低;农贸市场中的H7N9亚型病毒分离率显著高于批发市场。本次调查未在活禽市场中检出H5亚型高致病性禽流感病毒。这些数据为深入了解活禽市场中禽流感病毒的污染状况和该病防控措施的制定提供了技术支持。 展开更多
关键词 活禽市场 禽流感病毒 H7N9 H9N2
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H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析 被引量:14
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作者 蒋文明 李金平 +5 位作者 侯广宇 彭程 刘朔 王素春 张玉新 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2016年第9期27-32,共6页
为深入了解我国H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原性变异情况及其规律,对我国2012—2015年分离的H5亚型高致病性禽流感病毒进行了HA基因的扩增、测序与遗传进化分析。结果发现这些流行毒株主要分布在第2.3.2.1分支、第2.3.4.4分支和第7.2... 为深入了解我国H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原性变异情况及其规律,对我国2012—2015年分离的H5亚型高致病性禽流感病毒进行了HA基因的扩增、测序与遗传进化分析。结果发现这些流行毒株主要分布在第2.3.2.1分支、第2.3.4.4分支和第7.2分支。制备流行毒株的单因子阳性血清,与相应疫苗株进行交叉血凝抑制试验,计算抗原相关系数,并对各分支流行毒与相应疫苗之间的HA1主要抗原位点差异进行分析。结果表明,Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8疫苗株之间的血凝抑制抗原相关系数在0.17-0.67之间,表明不同分支之间的抗原性有较大差异。随着时间的推移,分支内流行毒与疫苗之间的血凝抑制抗原相关性差异会越来越大,抗原性变异程度增加,这与HA1主要抗原位点差异分析的结果一致。因此,要取得理想的防控效果,必须及时更新疫苗,使用与流行毒匹配性更好的疫苗。这些数据为深入了解H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原变异和对该病毒的防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 H5 禽流感病毒 抗原性 变异 疫苗
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H5N6亚型禽流感病毒反向遗传疫苗株的构建及免疫保护试验 被引量:12
16
作者 蒋文明 侯广宇 +3 位作者 王素春 李金平 刘朔 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2015年第1期64-67,共4页
为应对抗原性已发生变异的第2.3.4.6分支H5N6亚型禽流感病毒(AIV)引发的潜在流行,本研究利用反向遗传操作技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以H5N6亚型AIV A/Chicken/SC/6/2014(C6)的基因组为模板,经RT-PCR扩增其HA及NA... 为应对抗原性已发生变异的第2.3.4.6分支H5N6亚型禽流感病毒(AIV)引发的潜在流行,本研究利用反向遗传操作技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以H5N6亚型AIV A/Chicken/SC/6/2014(C6)的基因组为模板,经RT-PCR扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行分子修饰,去除与H5亚型AIV致病力有关的HA蛋白裂解位点处的多个碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征(即将-PLRERRRKR-突变为-PQRETR-),成功构建了H5N6亚型AIV疫苗候选株r C6。免疫效力试验表明,r C6重组灭活疫苗可以诱导产生高水平的血凝抑制抗体。免疫攻毒保护试验表明,r C6重组灭活疫苗可以提供SPF鸡抵抗同源和异源H5N6病毒100%的保护,而针对第2.3.4分支的Re-5疫苗仅能提供大约10%的保护。利用反向遗传技术构建的r C6重组疫苗候选株为该分支病毒的防控提供了有益的尝试。 展开更多
关键词 禽流感病毒 变异株 H5N6 反向遗传 疫苗
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微流控芯片技术在微生物检测中的应用 被引量:11
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作者 王楷宬 孙瑞妮 +9 位作者 姜楠 姜利建 庄青叶 李阳 王素春 张富友 赵成龙 潘子豪 孙福亮 刘华雷 《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期87-93,共7页
微流控芯片是一项以芯片为基础,结合化学、物理学、生物学等多学科形成的技术平台,能够在一个芯片上实现样品制备、反应、分离、检测等流程,具有高通量、高效率和易操作的特点。随着材料科学和纳米技术的发展,该项技术得到迅速发展并应... 微流控芯片是一项以芯片为基础,结合化学、物理学、生物学等多学科形成的技术平台,能够在一个芯片上实现样品制备、反应、分离、检测等流程,具有高通量、高效率和易操作的特点。随着材料科学和纳米技术的发展,该项技术得到迅速发展并应用于化学分析、微生物检测等,尤其是在微生物检测和分析方面发挥着重要作用,并逐步产生了商品化的微流控芯片。微流控芯片因具有小型化、节约试剂、速度快、集成化程度高等优点,适用于处理突发公共卫生事件,但目前在动物疫病检测中的应用还很少见。本文对微流控芯片的技术原理、结构及其在微生物检测中的应用进行综述,以期为动物疫病的高通量检测提供借鉴。 展开更多
关键词 微流控芯片 原理 结构 微生物 应用
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鸡传染性喉气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量:9
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作者 王楷宬 王素春 +5 位作者 孙亚伟 樊擎莹 康京丽 汪洋 刘华雷 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 2020年第3期98-102,共5页
为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引... 为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引物和探针与其他禽类常见病毒无交叉反应,检测下限达到100拷贝/反应;对来自13个场的480份临床样本进行检测,检测出17个阳性样品,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,此方法特异性强,灵敏度高、耗时少,可用于鸡传染性喉气管炎的快速检测。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 实时荧光PCR检测 方法建立 应用
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双重RT-PCR快速检测H7N9流感病毒方法的建立 被引量:10
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作者 蒋文明 李金平 +8 位作者 于美芳 孙文博 王素春 彭程 侯广宇 刘朔 杜翔 于建敏 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2015年第5期65-68,81,共5页
为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型... 为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR。对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板。利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 流感病毒 H7N9 双重RT-PCR
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山西省圣天湖天鹅H5N8禽流感疫情与当前H5亚型病毒谱系分析 被引量:7
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作者 蒋文明 田文霞 +6 位作者 侯广宇 李金平 程隆 王素春 彭程 王仲兵 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期14-17,43,共5页
2016年12月,山西省芮城县圣天湖景区的18只白天鹅陆续出现异常死亡。经病毒分离、基因组测序与分析,确定此次疫情的病原为H5N8亚型高致病性禽流感病毒。该毒株与同期在欧洲流行的H5N8病毒同源性很高,其HA和NA基因同源性分别为99.1%~99.6... 2016年12月,山西省芮城县圣天湖景区的18只白天鹅陆续出现异常死亡。经病毒分离、基因组测序与分析,确定此次疫情的病原为H5N8亚型高致病性禽流感病毒。该毒株与同期在欧洲流行的H5N8病毒同源性很高,其HA和NA基因同源性分别为99.1%~99.6%和98.7%~99.6%;同期在欧洲流行的H5N8病毒的HA基因主要从2010—2013年在韩国、保加利亚、泰国、越南流行的病毒进化而来。基因组序列分析表明,2016年流行的H5N8病毒是一种新重组病毒。病毒的不断变异进化,造成了全球H5亚型禽流感流行的复杂性,增加了对其防控的难度,疫苗也需要随之更新换代。因此,建议加大疫苗的研发投入力度,改进水禽养殖模式,提高水禽免疫覆盖率和合格率,从而降低其感染和排毒的风险。 展开更多
关键词 禽流感 野鸟 H5 防控
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