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稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
1
作者
黄小久
雷磊
+7 位作者
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第5期2243-2252,共10页
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供...
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供理论依据。【方法】采用同源重组技术构建过表达pLV-CMV-NM-ⅡA Tail-3×Flag-CopGFP-Puro的重组质粒。将重组质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染HEK-293FT细胞,制备慢病毒液。采用慢病毒液侵染IPEC-J2细胞,经药物筛选后观察EGFP荧光标签蛋白的表达情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR技术鉴定过表达NM-ⅡA Tail的细胞株构建情况。结合Western blotting和免疫荧光试验(IFA)分析PEDV内化阶段的变化,通过测定病毒粒子的拷贝量和病毒滴度,分析过表达NM-ⅡA Tail对PEDV复制和释放阶段的影响。【结果】在成功构建的过表达细胞株中,NM-ⅡA Tail mRNA转录水平较对照组提高了15倍(P<0.01),且Western blotting验证结果显示,NM-ⅡA Tail蛋白存在高效表达。在PEDV内化阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV N蛋白表达量极显著高于对照组(P<0.01)。IFA结果显示,过表达NM-ⅡA Tail细胞中NM-ⅡA和PEDV的荧光信号强于对照组。在PEDV复制阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV M基因拷贝数及病毒半数组织感染剂量(TCID 50)显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。在PEDV释放阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞释放的PEDV M基因的拷贝数较对照组提高了2.7倍,上清中的病毒TCID 50极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞株,为深入研究NM-ⅡA在PEDV感染过程中的作用提供了试验材料。过表达NM-ⅡA Tail显著促进了PEDV的内化、复制和释放过程,为阐明PEDV的感染机制提供了新思路,并为疫病防控策略开发提供了参考依据。
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关键词
非肌性肌球蛋白ⅡA
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
慢病毒载体
过表达细胞系
在线阅读
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职称材料
建筑工程施工的质量控制
被引量:
37
2
作者
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2003年第3期36-38,共3页
分别从施工准备、施工过程、施工结果三个阶段论述了建筑工程施工质量控制的主要内容。
关键词
建筑工程
施工
质量控制
质量保证体系
在线阅读
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职称材料
从我校实验楼工程谈基建施工管理的几点体会
被引量:
2
3
作者
兰耀东
周保国
+1 位作者
崔建军
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002年第4期41-42,共2页
通过学校实验楼工程建设管理 。
关键词
实验楼工程
施工管理
高校
基础设施建设
在线阅读
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职称材料
基坑事故的预防与处理
被引量:
3
4
作者
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2011年第2期24-26,共3页
文中分析了基坑事故的影响因素,并针对基坑施工容易出现的问题,从支护设计、施工技术、现场监测等方面探讨了应采取的预防及处理措施。
关键词
基坑
事故
预防
处理
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职称材料
浅谈建筑施工物料提升机的安全用电
被引量:
1
5
作者
周保国
刘振中
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2006年第2期30-32,共3页
物料提升机是建筑施工中垂直运输的主要设备。在近几年发生的建筑安全事故中,物料提升机因电气安装引起的安全事故占相当大的比重。文中介绍了物料提升机在用电安装等方面的措施,来预防建筑施工中物料提升机安全事故的发生。
关键词
物料提升机
限位开关
接地体
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职称材料
建筑工程常见质量通病原因分析及预防
被引量:
1
6
作者
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002年第3期42-44,46,共4页
对建筑工程质量中存在的最常见的几种通病现象 ,进行了原因分析 。
关键词
建筑工程
质量
预防措施
在线阅读
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职称材料
预应力砼管桩静压施工的质量控制
7
作者
王诚杰
王玉格
+1 位作者
赵国良
高悦
《黑龙江科技信息》
2013年第9期294-294,共1页
静压高强预应力砼管桩近年来在华北地区的工民建、水利工程建设中得到了广泛应用。本文以河北工专学生公寓基础工程介绍了静压高强预应力砼管桩的施工技术、质量控制、施工中注意的事项及挤土效应的防治并分析了应用前景。
关键词
预应力砼管桩
施工技术
质量控制
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职称材料
建筑外墙外保温存在的问题及解决措施
被引量:
2
8
作者
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2013年第1期12-15,共4页
针对建筑外墙外保温存在的问题,提出外保温施工技术的质量控制要点,从基层处理、保温层施工、抗裂防护层施工、饰面层施工等方面掌握要领,克服施工带来的问题。从节点设计、材料选择、施工工艺改进等方面采取措施,提出解决问题的办法。...
针对建筑外墙外保温存在的问题,提出外保温施工技术的质量控制要点,从基层处理、保温层施工、抗裂防护层施工、饰面层施工等方面掌握要领,克服施工带来的问题。从节点设计、材料选择、施工工艺改进等方面采取措施,提出解决问题的办法。保证外墙外保温系统的整体性、安全性、耐久性、保温性和防火性。
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关键词
外墙外保温
质量问题
解决措施
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职称材料
题名
稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
1
作者
黄小久
雷磊
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
机构
湖南农业大学动物医学院
出处
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第5期2243-2252,共10页
基金
湖南省自然科学基金项目(2020JJ4041)。
文摘
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供理论依据。【方法】采用同源重组技术构建过表达pLV-CMV-NM-ⅡA Tail-3×Flag-CopGFP-Puro的重组质粒。将重组质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染HEK-293FT细胞,制备慢病毒液。采用慢病毒液侵染IPEC-J2细胞,经药物筛选后观察EGFP荧光标签蛋白的表达情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR技术鉴定过表达NM-ⅡA Tail的细胞株构建情况。结合Western blotting和免疫荧光试验(IFA)分析PEDV内化阶段的变化,通过测定病毒粒子的拷贝量和病毒滴度,分析过表达NM-ⅡA Tail对PEDV复制和释放阶段的影响。【结果】在成功构建的过表达细胞株中,NM-ⅡA Tail mRNA转录水平较对照组提高了15倍(P<0.01),且Western blotting验证结果显示,NM-ⅡA Tail蛋白存在高效表达。在PEDV内化阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV N蛋白表达量极显著高于对照组(P<0.01)。IFA结果显示,过表达NM-ⅡA Tail细胞中NM-ⅡA和PEDV的荧光信号强于对照组。在PEDV复制阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV M基因拷贝数及病毒半数组织感染剂量(TCID 50)显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。在PEDV释放阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞释放的PEDV M基因的拷贝数较对照组提高了2.7倍,上清中的病毒TCID 50极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞株,为深入研究NM-ⅡA在PEDV感染过程中的作用提供了试验材料。过表达NM-ⅡA Tail显著促进了PEDV的内化、复制和释放过程,为阐明PEDV的感染机制提供了新思路,并为疫病防控策略开发提供了参考依据。
关键词
非肌性肌球蛋白ⅡA
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
慢病毒载体
过表达细胞系
Keywords
non-muscle myosinⅡA(NM-ⅡA)
Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
lentiviral vector
overexpressing cell line
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
建筑工程施工的质量控制
被引量:
37
2
作者
周保国
王玉格
机构
河北工程技术高等专科学校基建办公室
沧州市第一建筑安装工程有限公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2003年第3期36-38,共3页
文摘
分别从施工准备、施工过程、施工结果三个阶段论述了建筑工程施工质量控制的主要内容。
关键词
建筑工程
施工
质量控制
质量保证体系
Keywords
architectural engineering
construction
quality control
分类号
TU712 [建筑科学—建筑技术科学]
在线阅读
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职称材料
题名
从我校实验楼工程谈基建施工管理的几点体会
被引量:
2
3
作者
兰耀东
周保国
崔建军
王玉格
机构
河北工程技术高等专科学校
河北工程技术高等专科学校基建办公室
沧州市第一建筑安装工程公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002年第4期41-42,共2页
文摘
通过学校实验楼工程建设管理 。
关键词
实验楼工程
施工管理
高校
基础设施建设
分类号
TU71 [建筑科学—建筑技术科学]
TU244.5 [建筑科学—建筑设计及理论]
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职称材料
题名
基坑事故的预防与处理
被引量:
3
4
作者
周保国
王玉格
机构
河北工程技术高等专科学校
河北金品建筑工程集团有限责任公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2011年第2期24-26,共3页
文摘
文中分析了基坑事故的影响因素,并针对基坑施工容易出现的问题,从支护设计、施工技术、现场监测等方面探讨了应采取的预防及处理措施。
关键词
基坑
事故
预防
处理
Keywords
pit
accident
prevention
treatment
分类号
TU753 [建筑科学—建筑技术科学]
在线阅读
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职称材料
题名
浅谈建筑施工物料提升机的安全用电
被引量:
1
5
作者
周保国
刘振中
王玉格
机构
河北工程技术高等专科学校
沧州市第一建筑安装工程有限公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2006年第2期30-32,共3页
文摘
物料提升机是建筑施工中垂直运输的主要设备。在近几年发生的建筑安全事故中,物料提升机因电气安装引起的安全事故占相当大的比重。文中介绍了物料提升机在用电安装等方面的措施,来预防建筑施工中物料提升机安全事故的发生。
关键词
物料提升机
限位开关
接地体
Keywords
building material elevator
limit switch
ground wire
分类号
TU732 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
建筑工程常见质量通病原因分析及预防
被引量:
1
6
作者
周保国
王玉格
机构
河北工程技术高等专科学校基建科
沧州市第一建筑安装工程有限公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002年第3期42-44,46,共4页
文摘
对建筑工程质量中存在的最常见的几种通病现象 ,进行了原因分析 。
关键词
建筑工程
质量
预防措施
分类号
TU712 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
预应力砼管桩静压施工的质量控制
7
作者
王诚杰
王玉格
赵国良
高悦
机构
河北工程技术高等专科学校
河北金品建筑工程集团有限责任公司
出处
《黑龙江科技信息》
2013年第9期294-294,共1页
文摘
静压高强预应力砼管桩近年来在华北地区的工民建、水利工程建设中得到了广泛应用。本文以河北工专学生公寓基础工程介绍了静压高强预应力砼管桩的施工技术、质量控制、施工中注意的事项及挤土效应的防治并分析了应用前景。
关键词
预应力砼管桩
施工技术
质量控制
分类号
TU753.3 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
建筑外墙外保温存在的问题及解决措施
被引量:
2
8
作者
王玉格
机构
河北金品建筑工程集团有限责任公司
出处
《河北工程技术高等专科学校学报》
2013年第1期12-15,共4页
文摘
针对建筑外墙外保温存在的问题,提出外保温施工技术的质量控制要点,从基层处理、保温层施工、抗裂防护层施工、饰面层施工等方面掌握要领,克服施工带来的问题。从节点设计、材料选择、施工工艺改进等方面采取措施,提出解决问题的办法。保证外墙外保温系统的整体性、安全性、耐久性、保温性和防火性。
关键词
外墙外保温
质量问题
解决措施
Keywords
exterior insulation
quality problems
solution
分类号
TU761.12 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
黄小久
雷磊
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
建筑工程施工的质量控制
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2003
37
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职称材料
3
从我校实验楼工程谈基建施工管理的几点体会
兰耀东
周保国
崔建军
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002
2
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职称材料
4
基坑事故的预防与处理
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2011
3
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职称材料
5
浅谈建筑施工物料提升机的安全用电
周保国
刘振中
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2006
1
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下载PDF
职称材料
6
建筑工程常见质量通病原因分析及预防
周保国
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2002
1
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职称材料
7
预应力砼管桩静压施工的质量控制
王诚杰
王玉格
赵国良
高悦
《黑龙江科技信息》
2013
0
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职称材料
8
建筑外墙外保温存在的问题及解决措施
王玉格
《河北工程技术高等专科学校学报》
2013
2
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职称材料
已选择
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引证文献
统计分析
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