猪链球菌14型的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：13

1

作者 王治方 徐引弟 +8 位作者 张青娴 朱文豪 白红杰 焦文强 李海利 许峰 王克领 张彬 娄治国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第6期1861-1869,共9页

为了检测确定2019年5月河南某规模化猪场一栋保育仔猪发病猪群的病原,本研究从送检的发病猪关节液中分离获得1株细菌。通过细菌纯化培养、革兰氏染色、形态学观察及猪链球菌gdh基因PCR扩增,确定该分离菌株为猪链球菌。用猪链球菌分型引... 为了检测确定2019年5月河南某规模化猪场一栋保育仔猪发病猪群的病原,本研究从送检的发病猪关节液中分离获得1株细菌。通过细菌纯化培养、革兰氏染色、形态学观察及猪链球菌gdh基因PCR扩增,确定该分离菌株为猪链球菌。用猪链球菌分型引物对该菌株进行PCR扩增分型鉴定及软件比对分析,结果表明该分离菌株为猪链球菌14型,与猪链球菌JS14株(GenBank登录号:CP002465.1)同源性为100%。毒力基因检测结果表明,该菌株的同时携带有epf、mrp、sly、fbps、orf2毒力基因,属于高致病性菌株。小鼠致病性试验结果也证明该菌株是一株高致病性猪链球菌。药物敏感性试验结果显示,该菌株对β内酰胺类和喹诺酮类药物敏感,对氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类高度耐药,表现出多重耐药现象。对该菌株进行5大类24种耐药基因检测,该菌株同时携带有blaTEM、aadA1、strA、strB、aacC2、aphA1、tet(B)、gyrA、parC、sul2耐药基因。该研究为后续进一步开展猪链球菌14型流行特点和致病机制研究奠定了基础,为猪链球菌14型临床防控提供了理论依据,同时具有重要的公共卫生意义。 展开更多

关键词 链球菌14型 分型鉴定 毒力基因 药敏试验 耐药基因 猪

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副猪嗜血杆菌血清7型菌株毒力及耐药性分析 被引量：6

2

作者 王治方 徐引弟 +4 位作者 朱文豪 张青娴 焦文强 李海利 王克领 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3245-3255,共11页

【目的】了解河南地区副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)血清7型流行菌株的毒力及耐药情况。【方法】以Hps血清7型参考菌株为对照,对6株Hps血清7型临床分离菌株进行16S rRNA基因扩增、序列分析、毒力基因检测、致病性试验和药敏... 【目的】了解河南地区副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)血清7型流行菌株的毒力及耐药情况。【方法】以Hps血清7型参考菌株为对照,对6株Hps血清7型临床分离菌株进行16S rRNA基因扩增、序列分析、毒力基因检测、致病性试验和药敏试验研究。【结果】16S rRNA基因测序及相似性比对结果显示,菌株1436与参考菌株0007相似性为100%,菌株1565、1624与参考菌株0007相似性均为98.6%。系统发育树分析表明,菌株1436与参考菌株0007亲缘关系最近;菌株1624与参考菌株0007亲缘关系最远。6株临床菌株与参考菌株表现为2种毒力基因型,菌株均携带有vta1、vta2、vta3、wza、nanH、cdtA、cdtB、cdtC和espP2毒力基因,其中5株临床菌株还携带ompP2毒力基因。豚鼠致病性试验结果显示,临床菌株毒力较参考菌株表现出不同程度的增强,参考菌株不能感染豚鼠发病,未表现任何临床症状;临床菌株可感染豚鼠发病,表现出一定的临床症状,发病率为20%~40%,死亡率为0。参考菌株和临床菌株均对头孢他啶和头孢噻呋敏感,对强力霉素、氟苯尼考中介,对新霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、替米考星等耐药,且均表现出多重耐药现象。【结论】Hps血清7型临床菌株有一定的致病性,但毒力较弱,对头孢类药物敏感,有明显的多重耐药现象,临床上应注意对该血清型的防控。本研究为Hps血清7型流行病学、致病机制研究奠定了基础,为Hps血清7型的临床防控提供了参考依据。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌(Hps) 血清7型 分型鉴定 毒力基因 致病性试验 药敏试验

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两种不同方法对猪瘟免疫效果评估对比试验 被引量：9

3

作者 王治方 郭成留 +2 位作者 张清华 徐引弟 张玉杨 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第9期99-100,共2页

通过正向间接血凝试验和酶联免疫吸附试验(阻断ELISA)对3个规模化猪场提供的350份血清样品进行猪瘟免疫效果平行对比检测,结果:A猪场120份,正向间接血凝试验检测免疫合格为95份,免疫合格率为79.2%;阻断ELISA检测免疫合格为92份,免疫合... 通过正向间接血凝试验和酶联免疫吸附试验(阻断ELISA)对3个规模化猪场提供的350份血清样品进行猪瘟免疫效果平行对比检测,结果:A猪场120份,正向间接血凝试验检测免疫合格为95份,免疫合格率为79.2%;阻断ELISA检测免疫合格为92份,免疫合格率为76.7%。B猪场120份,正向间接血凝试验检测免疫合格为108份,免疫合格率为90.0%;阻断ELISA检测免疫合格为104份,免疫合格率为86.7%。C猪场110份,正向间接血凝试验检测免疫合格为58份,免疫合格率为52.7%;阻断ELISA检测免疫合格为55份,免疫合格率为50.0%。 展开更多

关键词 猪瘟 正向间接血凝试验 阻断ELISA

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2型猪链球菌河南株的生物学特性研究 被引量：6

4

作者 王治方 徐引弟 +7 位作者 张青娴 朱文豪 焦文强 李海利 许峰 王克领 张彬 娄治国 《养猪》 2020年第3期97-102,共6页

从河南省豫东某规模化猪场保育猪群发生疫情的病死猪脑组织分离得到一株细菌,通过对该株细菌纯化鉴定、血清型分型鉴定、致病性试验及毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测等一系列研究,结果表明,该株细菌鉴定为2型猪链球菌,毒力较强,... 从河南省豫东某规模化猪场保育猪群发生疫情的病死猪脑组织分离得到一株细菌,通过对该株细菌纯化鉴定、血清型分型鉴定、致病性试验及毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测等一系列研究,结果表明,该株细菌鉴定为2型猪链球菌,毒力较强,为携带胞外因子epf基因、溶血素sly基因、溶菌酶释放蛋白mrp基因的3个毒力基因的强毒力菌株;该菌株对头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、青霉素、复方新诺明、左氟沙星、氧氟沙星等β-内酰胺类、磺胺类和喹诺酮类药物敏感;对氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类药物高度耐药,携带有β-内酰胺类耐药基因blaTEM和氨基糖苷类耐药基因strB。该研究对临床防控猪链球菌病具有重要意义。 展开更多

关键词 猪链球菌 分型鉴定 毒力基因 药敏试验 耐药基因

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耐药性大肠杆菌卵黄性腹膜炎病例的诊治 被引量：2

5

作者 王治方 朱文豪 +3 位作者 陈直 徐引弟 李姝 李建林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第12期147-148,共2页

关键词 卵黄性腹膜炎 大肠杆菌 耐药性 诊治 病例 输卵管 常见疾病 经济损失

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副猪嗜血杆菌血清7型菌株的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：3

6

作者 王治方 朱文豪 +4 位作者 徐引弟 张青娴 焦文强 李海利 王克领 《养猪》 2022年第4期89-93,共5页

为了掌握河南某规模化猪场保育猪发病猪群的感染病原,研究从濒死期病猪的肺脏、心血样品中分离获得一株细菌,通过对该株细菌分离鉴定、血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验等一系列研究工作。结果表明,该株细菌为副猪嗜血杆... 为了掌握河南某规模化猪场保育猪发病猪群的感染病原,研究从濒死期病猪的肺脏、心血样品中分离获得一株细菌,通过对该株细菌分离鉴定、血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验等一系列研究工作。结果表明,该株细菌为副猪嗜血杆菌,血清型为7型,与副猪嗜血杆菌vHPS7株(GenBank登录号:CP049089)同源性为100%。该菌株同时携带有vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、dtC、espP等毒力基因,结合豚鼠致病性试验结果和临床发病情况,该菌株具有较强的致病性;对头孢噻呋、头孢他啶、强力霉素、土霉素、四环素、阿奇霉素6种药物敏感;对青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、复方新诺明、左氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、壮观霉素、卡那霉素、阿米卡星11种药物耐药。该研究为今后副猪嗜血杆菌血清7型致病机制研究奠定了基础,为副猪嗜血杆菌血清7型的临床防控提供了理论基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌血清7型 分型鉴定 毒力基因 药敏试验

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副猪格拉菌血清2型毒力及耐药性分析 被引量：1

7

作者 王治方 徐引弟 +5 位作者 朱文豪 焦文强 张青娴 李海利 许峰 王克领 《广东农业科学》 CAS 2023年第5期112-120,共9页

【目的】副猪格拉菌是引起猪格拉泽氏病的病原,是危害养猪业最为严重的细菌性病原之一,该菌血清型众多,不同血清型之间交叉保护力弱。血清2型是中等毒力毒株,近年来临床分离比例越来越高,危害越来越严重。从河南某规模化猪场保育猪群分... 【目的】副猪格拉菌是引起猪格拉泽氏病的病原,是危害养猪业最为严重的细菌性病原之一,该菌血清型众多,不同血清型之间交叉保护力弱。血清2型是中等毒力毒株,近年来临床分离比例越来越高,危害越来越严重。从河南某规模化猪场保育猪群分离到副猪格拉菌血清2型并进行系列试验,为科学防控该病提供参考。【方法】对副猪格拉菌临床疑似病例猪只无菌采集肺脏、气管、心血等样品,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检、常规PCR、豚鼠致病性试验及琼脂扩散药敏试验等方法,对疑似细菌进行形态观察、鉴定、血清型分型、毒力基因检测、耐药基因检测、致病性和耐药性等一系列生物学特性研究。【结果】从肺脏样品中分离获得1株副猪格拉菌,经鉴定为血清2型,该菌株携带vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、cdtC、espP2毒力基因,对豚鼠有较强的致病力。该菌株携带有aadA1、strA、strB、aphA1、tet(B)、sul2多个耐药基因,对青霉素G、卡那霉素、阿米卡星、链霉素、四环素、土霉素、复方新诺明有较强的耐药性;对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、左氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星敏感性较好,临床用药效果显著。【结论】分离出的副猪格拉菌2型菌株毒力较强,且能透过血脑屏障,有明显的多重耐药性。研究结果可为副猪格拉菌血清2型流行病学调查、致病机制研究以及临床防控措施制定提供参考。 展开更多

关键词 副猪格拉菌血清2型 毒力基因 致病性 药敏试验 耐药基因

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免疫接种途径对猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响 被引量：3

8

作者 王治方 郭成留 +1 位作者 徐引弟 张玉杨 《养猪》 2007年第6期69-70,共2页

在养猪生产实践中，疫苗免疫接种的常规途径不外乎肌肉免疫接种和皮下免疫接种，而肌肉免疫接种操作方便最为常用。近几年，中兽医领域提出穴位免疫接种和给药，并逐渐得到推广应用。本文为了比较不同免疫途径对疫苗免疫接种效果的影响... 在养猪生产实践中，疫苗免疫接种的常规途径不外乎肌肉免疫接种和皮下免疫接种，而肌肉免疫接种操作方便最为常用。近几年，中兽医领域提出穴位免疫接种和给药，并逐渐得到推广应用。本文为了比较不同免疫途径对疫苗免疫接种效果的影响，进行了猪口蹄疫疫苗常规免疫和穴位免疫效果对比试验，证明穴位免疫能够适当提高疫苗的免疫效果。现将试验过程报告如下。 展开更多

关键词 口蹄疫疫苗 免疫效果 养猪生产 接种途径 疫苗免疫接种 免疫接种效果 穴位免疫 免疫途径

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某规模化猪场猪瘟普查报告 被引量：3

9

作者 王治方 郭成留 +2 位作者 张清华 徐引弟 张玉杨 《养猪》 2007年第1期56-56,共1页

近年来，河南省一些规模化猪场频繁发生猪瘟，而且一旦发病疫情连绵不断，很难彻底根除。猪场种猪群携带猪瘟病毒和规模化猪场高密度的封闭式饲养、生产的连续性，给猪瘟病毒在一些易感猪体内传代繁殖创造了条件，尤其种猪群隐性感染会... 近年来，河南省一些规模化猪场频繁发生猪瘟，而且一旦发病疫情连绵不断，很难彻底根除。猪场种猪群携带猪瘟病毒和规模化猪场高密度的封闭式饲养、生产的连续性，给猪瘟病毒在一些易感猪体内传代繁殖创造了条件，尤其种猪群隐性感染会引起母猪妊娠期间流产、死胎和哺乳仔猪发病死亡，这是猪瘟频繁发生和难以根除的主要原因。为了解某规模化猪场种猪群的猪瘟感染情况和免疫状况，笔者分别用酶联免疫吸附试验（抗原捕获ELISA即AC-ELISA）和猪瘟正向间接血凝试验，对该猪场提供的164份血清样品进行了检测，现报告如下。 展开更多

关键词 规模化猪场 猪瘟病毒 普查报告 正向间接血凝试验 酶联免疫吸附试验 发病死亡 封闭式饲养 ELISA

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副猪嗜血杆菌4型分离株耐药表型及耐药基因分析研究 被引量：4

10

作者 王治方 徐引弟 +6 位作者 张青娴 朱文豪 焦文强 李海利 白红杰 许峰 王克领 《养猪》 2020年第6期97-101,共5页

为了解掌握副猪嗜血杆菌4型(Haemophilus parasuis serotype4,HPS4)临床分离菌株的耐药性和耐药基因携带情况。试验选用6大类18种常用抗菌药物,通过药敏纸片扩散法对10株HPS4菌株的耐药性进行检测研究,并通过PCR方法检测了菌株携带氨基... 为了解掌握副猪嗜血杆菌4型(Haemophilus parasuis serotype4,HPS4)临床分离菌株的耐药性和耐药基因携带情况。试验选用6大类18种常用抗菌药物,通过药敏纸片扩散法对10株HPS4菌株的耐药性进行检测研究,并通过PCR方法检测了菌株携带氨基糖苷类和喹诺酮类药物的耐药基因情况。结果表明,被检菌株对红霉素、阿奇霉素、替米考星、四环素、土霉素、强力霉素和氟苯尼考有很好敏感性,耐药率均为10%;对头孢噻呋、头孢他啶和大观霉素较敏感,耐药率为20%;对氨基糖苷类卡那霉素、阿米卡星、新霉素和喹诺酮类诺氟沙星、左氟沙星、氧氟沙星表现出较高耐药性,耐药率均在50%以上,且所有菌株均表现出3重及以上多重耐药现象。10株HPS4菌株共检出了strB、aphA1、gyrA、parC 4种耐药基因,检出率分别为50%、60%、80%、80%,结合耐药表型结果,表明这4种耐药基因可能是介导HPS4菌株对氨基糖苷类及喹诺酮类药物产生耐药性的主要原因。研究为临床防控副猪嗜血杆菌4型选药用药提供了科学的理论依据,充实了副猪嗜血杆菌耐药谱的数据库,为进一步研究其耐药机制奠定基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌4型 耐药性 耐药基因

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规模化猪场利巴韦林中毒病例分析 被引量：4

11

作者 王治方 徐引弟 +1 位作者 侯自花 李震 《养猪》 2008年第3期70-70,共1页

利巴韦林别名称病毒唑、三氮唑核苷、威乐星，在机体内能够阻碍病毒核酸和蛋白质的合成，对多种RNA,DNA病毒有抑制作用，在临床上被人医广泛用于病毒性感冒、病毒性角膜炎、甲型肝炎等病毒性疾病的控制，被认为是一种副作用较少的广谱... 利巴韦林别名称病毒唑、三氮唑核苷、威乐星，在机体内能够阻碍病毒核酸和蛋白质的合成，对多种RNA,DNA病毒有抑制作用，在临床上被人医广泛用于病毒性感冒、病毒性角膜炎、甲型肝炎等病毒性疾病的控制，被认为是一种副作用较少的广谱抗病毒核苷类化合物。近几年在兽医领域，由于猪病毒性传染病的发生越来越频繁和复杂，临床治愈率低，部分兽医工作者开始借鉴利用利巴韦林控制猪的某些病毒性传染性疾病，但由于兽医领域缺乏利巴韦林使用的相关说明和试验资料， 展开更多

关键词 规模化猪场 利巴韦林 病例分析 病毒性感冒 兽医工作者 中毒 核苷类化合物 病毒性传染病

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河南省猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：29

12

作者 徐引弟 孙帅杰 +6 位作者 王治方 张青娴 朱文豪 焦文强 李海利 郎利敏 王克领 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期501-509,共9页

为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况,本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定,并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定,对其中的2型猪链球菌进行了药敏... 为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况,本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定,并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定,对其中的2型猪链球菌进行了药敏试验。结果显示,试验共鉴定出189株猪链球菌,流行的猪链球菌的血清群主要以D群为主,其次是G群和C群;优势的血清型是2型、7型、9型和1型。其中87株为2型猪链球菌,超过90%的2型菌株对β-内酰胺类(青霉素G、阿莫西林和头孢菌素类)、氯霉素、万古霉素、环丙沙星敏感,超过40%的2型菌株对多西环素、四环素、红霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、克林霉素、链霉素、米诺环素产生耐药性。以上结果为指导猪场使用敏感药物及时控制疫情、选择血清型相符的疫苗进行预防及减少损失提供参考依据。 展开更多

关键词 猪链球菌 血清型 血清群 耐药性

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河南省规模化猪场猪链球菌2型的分离鉴定和药敏试验 被引量：15

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作者 徐引弟 王治方 +3 位作者 朱文豪 焦海燕 梁跃 郭成留 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期155-157,共3页

从2006-2009年河南省发生猪高热综合征的113家规模化猪场291份病料中分离革兰氏阳性球菌,通过培养特性试验、生化试验、猪链球菌和猪链球菌2型的PCR试验,结果鉴定125株为链球菌,其中35株为猪链球菌2型。对35株猪链球菌2型进行小鼠毒力... 从2006-2009年河南省发生猪高热综合征的113家规模化猪场291份病料中分离革兰氏阳性球菌,通过培养特性试验、生化试验、猪链球菌和猪链球菌2型的PCR试验,结果鉴定125株为链球菌,其中35株为猪链球菌2型。对35株猪链球菌2型进行小鼠毒力试验及药敏试验,结果显示,35株猪链球菌2型对小鼠均有毒力,均对头孢噻肟、头孢唑啉、头孢他啶、阿莫西林、氯霉素、环丙沙星、氧氟沙星敏感。 展开更多

关键词 猪 链球菌2型 分离 鉴定 药敏试验

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猪源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的耐药性调查与耐药基因型分析 被引量：14

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作者 张青娴 徐引弟 +8 位作者 王治方 郎利敏 李海利 焦文强 朱文豪 张立宪 游一 许峰 王克领 《养猪》 2019年第4期105-108,共4页

为了解猪源产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)大肠杆菌的耐药基因型分布情况,采用CLSI推荐方法进行ESBLs表型检测和确证试验,采用PCR方法ESBLs耐药基因型分析。结果表明,60.21%(112/186)的猪源大肠杆菌菌株... 为了解猪源产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)大肠杆菌的耐药基因型分布情况,采用CLSI推荐方法进行ESBLs表型检测和确证试验,采用PCR方法ESBLs耐药基因型分析。结果表明,60.21%(112/186)的猪源大肠杆菌菌株为ESBLs阳性。blaCTX-M、blaTEM、blaSHV和blaOXA型ESBLs菌株检出率分别为91.07%、68.75%、4.46%和1.78%。由此可见,河南部分猪场大肠杆菌广泛流行ESBLs,流行的主要基因型为blaCTX-M型和blaCTX-M+blaTEM型,且多为复合基因型耐药菌株。 展开更多

关键词 大肠杆菌 超广谱Β-内酰胺酶 基因型 耐药性

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副猪嗜血杆菌14型的分离鉴定和药敏试验 被引量：4

15

作者 徐引弟 王治方 +5 位作者 焦文强 朱文豪 李海利 张青娴 郞利敏 王克领 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期7-11,共5页

为了明确河南省某规模化猪场断奶保育猪副猪嗜血杆菌感染情况,从濒死期病猪的肺脏、心血样品中分离获得1株细菌,通过对该株细菌分离鉴定、血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验等一系列试验,证实该株细菌为副猪嗜血杆菌14型... 为了明确河南省某规模化猪场断奶保育猪副猪嗜血杆菌感染情况,从濒死期病猪的肺脏、心血样品中分离获得1株细菌,通过对该株细菌分离鉴定、血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验等一系列试验,证实该株细菌为副猪嗜血杆菌14型,该菌株携带有capd、vta1、vta2、vta3、wza、hhdA、hhdB、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、cdtC、espP等13种主要毒力基因;该菌株对保育仔猪表现出较强的致病性,对头孢他啶、氟苯尼考、头孢噻呋、氨苄西林、强力霉素、土霉素、氧氟沙星敏感,对青霉素、阿米卡星、诺氟沙星、复方新诺明耐药。研究结果可为副猪嗜血杆菌血清14型流行病学研究提供参考。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌血清14型 鉴定分型 毒力基因 毒力试验 药敏试验

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超前免疫对仔猪猪瘟抗体水平的影响 被引量：6

16

作者 马强 任巧玲 +1 位作者 王治方 郭红霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期188-190,共3页

通过阻断ELISA试验研究超前免疫对仔猪猪瘟抗体水平的影响,结果表明,在20日龄左右,超免组和非超免组抗体水平比较接近;30～80日龄之间,超免组的抗体水平上升较快,明显高于非超免组。猪瘟超前免疫能够刺激机体较好地产生猪瘟抗体。

关键词 猪瘟 超前免疫 抗体

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黄牛MEF2A基因克隆及真核表达载体构建 被引量：3

17

作者 陈付英 李锋 +4 位作者 安森亚 牛晖 楚秋霞 王治方 徐照学 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期140-144,共5页

旨在克隆MEF2A基因和构建其真核表达载体,为黄牛种质资源保存利用以及肉牛转基因育种和产业化提供基因资源和育种素材。本研究通过RT-PCR克隆黄牛MEF2A基因CDS区,并将其插入到质粒载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建真核表达载体pEGFP-C1-... 旨在克隆MEF2A基因和构建其真核表达载体,为黄牛种质资源保存利用以及肉牛转基因育种和产业化提供基因资源和育种素材。本研究通过RT-PCR克隆黄牛MEF2A基因CDS区,并将其插入到质粒载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建真核表达载体pEGFP-C1-MEF2A。同时应用生物学软件分析MEF2A基因及其编码蛋白的生物学特性,了解其复杂的调控机能。结果,MEF2A基因的CDS区全长1 494bp,编码498个氨基酸残基。生物信息学分析表明,N端第2～56位氨基酸肽段为MADS-box结构域,第57～77位氨基酸肽段为MEF2结构域;C端没有明显的功能域。成功的构建了含有牛MEF2A基因的真核表达载体pEGFP-C1-MEF2A。 展开更多

关键词 MEF2A基因 克隆 真核表达载体

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间接血凝方法检测副猪嗜血杆菌抗体 被引量：4

18

作者 徐引弟 王治方 +3 位作者 朱文豪 梁跃 许保疆 郭成留 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期189-192,共4页

将副猪嗜血杆菌（Hps）4、5、13型分离菌株超声产物致敏经戊二醛和鞣酸处理的绵羊红细胞,建立了检测Hps抗体的间接血凝试验方法。对15种血清型Hps阳性血清进行检测,结果均为阳性,抗体效价达1∶25-1∶210,敏感性明显高于琼脂扩散试验。... 将副猪嗜血杆菌（Hps）4、5、13型分离菌株超声产物致敏经戊二醛和鞣酸处理的绵羊红细胞,建立了检测Hps抗体的间接血凝试验方法。对15种血清型Hps阳性血清进行检测,结果均为阳性,抗体效价达1∶25-1∶210,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对其它16种病毒和细菌的阳性血清进行检测,结果除胸膜肺炎放线杆菌有凝集外,其余均为阴性。对620份临床血清进行检测,阳性率为67.58%。结果表明,该方法敏感性较高、特异性强,可用于Hps抗体水平的检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 间接血凝试验 抗体检测

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猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和药敏试验 被引量：17

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作者 徐引弟 王治方 +3 位作者 朱文豪 梁跃 许保疆 郭成留 《中国兽药杂志》 2011年第5期5-7,共3页

为了对河南省猪高热综合征发生期间多杀性巴氏杆菌引起的感染有全面了解,从2006-2010年河南省发生猪高热综合征的245家规模化猪场568份病料中分离革兰氏阴性小球杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验分离鉴定到35株。对分离菌进行... 为了对河南省猪高热综合征发生期间多杀性巴氏杆菌引起的感染有全面了解,从2006-2010年河南省发生猪高热综合征的245家规模化猪场568份病料中分离革兰氏阴性小球杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验分离鉴定到35株。对分离菌进行毒力和药敏试验,结果显示所分离的猪多杀性巴氏杆菌对小鼠均有毒力,对头孢噻呋、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考敏感。 展开更多

关键词 猪多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定 药敏试验

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猴源葡萄糖调节蛋白78生物信息学分析及其真核表达 被引量：3

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作者 焦文强 刘运超 +5 位作者 邢广旭 陈鹏举 徐引弟 王治方 张青娴 许峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1170-1178,共9页

试验旨在探究葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein 78,GRP78)基因的理化性质和结构特点,阐述GRP78在猪流行性腹泻病毒复制中的分子伴侣作用和调控机制。通过RT-PCR方法扩增GRP78基因,并插入到pMD20-T Simple载体进行克隆测序,... 试验旨在探究葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein 78,GRP78)基因的理化性质和结构特点,阐述GRP78在猪流行性腹泻病毒复制中的分子伴侣作用和调控机制。通过RT-PCR方法扩增GRP78基因,并插入到pMD20-T Simple载体进行克隆测序,利用生物信息学方法对其氨基酸序列、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、三级结构等进行预测和分析。将GRP78基因插入pCDNA 3.1中,然后转染Vero-E6细胞。Western blotting检测Vero-E6细胞中GRP78的表达。生物信息学分析结果表明,GRP78基因全长1965 bp,编码654个氨基酸,蛋白质分子质量为72.33 ku,理论等电点为5.07,分子式为C_(3189)H_(5153)N_(865)O_(1019)S_(13)。遗传进化树分析显示,猴源GRP78基因与双峰驼、犬、猫、大猩猩、蝙蝠、狒狒、猪、马的氨基酸序列同源性为99.5%~99.8%;遗传进化分析显示,大猩猩和狒狒亲缘关系最为接近。跨膜区和信号肽预测结果显示,该蛋白存在信号肽但不存在跨膜结构。GRP78蛋白无N-糖基化修饰位点,存在6个O-糖基化位点、28个磷酸化位点,表明GRP78可能有与激酶磷酸化有关的PKC、PKA特异性蛋白激酶的结合位点,可能参与己糖代谢和单糖代谢。 展开更多

关键词 GRP78基因 生物信息学分析 真核表达

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