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hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
1
作者
王旻东
孙自勇
+3 位作者
陈俊勇
吴盛
智强
刘建宁
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期62-65,共4页
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用I...
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
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关键词
人白细胞介素-10(hIL-10)
克隆
表达
大肠杆菌
生物学活性
夹心ELISA
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职称材料
题名
hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
1
作者
王旻东
孙自勇
陈俊勇
吴盛
智强
刘建宁
机构
南京市公安局刑警支队
南京大学分子医学研究所
出处
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期62-65,共4页
基金
南京大学分子医学研究所资助项目
文摘
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
关键词
人白细胞介素-10(hIL-10)
克隆
表达
大肠杆菌
生物学活性
夹心ELISA
Keywords
interleukin 10（hIL-10）, clone, expression, E.coli, biological activity, sandwich ELISA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
王旻东
孙自勇
陈俊勇
吴盛
智强
刘建宁
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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