卤化多肽真空紫外激光解离及蛋白质组学分析

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作者 罗盼 薛洁滢 +1 位作者 刘哲益 王方军 《色谱》 北大核心 2025年第2期131-138,共8页

化学修饰在蛋白质组学定量和相互作用分析等研究领域应用广泛。本工作发展了一种针对复杂组织提取蛋白质酶解样品的多肽溴化、碘化光化学修饰新方法,实现了酪氨酸、组氨酸、色氨酸位点的高效溴化和酪氨酸、组氨酸位点的高效碘化修饰。... 化学修饰在蛋白质组学定量和相互作用分析等研究领域应用广泛。本工作发展了一种针对复杂组织提取蛋白质酶解样品的多肽溴化、碘化光化学修饰新方法,实现了酪氨酸、组氨酸、色氨酸位点的高效溴化和酪氨酸、组氨酸位点的高效碘化修饰。进一步采用193 nm真空紫外激光解离(UVPD)串联质谱技术对光化学溴化和碘化标记后的鼠肝酶解肽样品进行了序列、修饰位点和光解离机制分析。由于Br和I原子对193 nm紫外光子的强吸收特性,193 nm UVPD可引起卤化位点的C-Br/C-I键断裂并产生多肽自由基离子,自由基迁移进一步引起多肽骨架碎裂。此外,193 nm UVPD与常规的高能碰撞诱导解离(HCD)模式结合可以提升蛋白质组学的卤化位点定位准确性。因此,整合光化学卤化修饰和193 nm UVPD可引发新型自由基解离途径,提升蛋白质组学的分析性能。 展开更多

关键词 蛋白质组学 光化学卤化 串联质谱 193 nm紫外激光解离 自由基解离

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非变性质谱和紫外激光解离在蛋白质结构和相互作用分析中的应用

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作者 薛洁滢 刘哲益 王方军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期681-692,共12页

蛋白质结构及相互作用的动态变化与其生物学功能密切相关,对蛋白质结构及相互作用进行精准探测和分析面临着巨大挑战。非变性质谱(nMS)是一种能够在近生理条件下将蛋白质及其复合物通过电喷雾离子化引入气相离子并进行质谱分析的方法。... 蛋白质结构及相互作用的动态变化与其生物学功能密切相关,对蛋白质结构及相互作用进行精准探测和分析面临着巨大挑战。非变性质谱(nMS)是一种能够在近生理条件下将蛋白质及其复合物通过电喷雾离子化引入气相离子并进行质谱分析的方法。通过直接测定溶液中蛋白质及其复合物的组成或整合多种质谱解离技术,nMS可获取蛋白质及其复合物的计量关系、组装形式、解离常数、构象变化、结合界面及作用位点等关键信息,以揭示蛋白质相互作用与生物学功能之间的关系。紫外激光解离(UVPD)技术,特别是采用了193 nm准分子激光的UVPD是近年来迅速发展起来的质谱解离技术,其可以高效解离非变性蛋白质骨架,并保留碎片离子中的氢键等非共价相互作用力,从而实现单氨基酸位点分辨的蛋白质动态结构和相互作用质谱解析。本综述主要介绍了nMS和UVPD技术在蛋白质动态结构和相互作用分析中的应用和最新进展,包括由位点突变及配体结合等引起的蛋白质动态结构和相互作用变化,最后对蛋白质nMS表征的未来发展方向做出了展望。 展开更多

关键词 非变性质谱 紫外激光解离 蛋白质结构 蛋白质相互作用 综述

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整体柱制备技术的新进展及其在蛋白质组学中的应用 被引量：10

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作者 邹汉法 吴明火 +2 位作者 王方军 吴仁安 叶明亮 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期526-536,共11页

整体柱是通过在柱管内原位聚合或固化的方法制备得到的具有多孔结构的整体棒状固定相,与传统的填充柱相比,具有通透性好、传质速率快、容易制备等优点,因此在分离分析领域特别是生物分离分析中发挥的作用日益增大。整体柱的制备及应用... 整体柱是通过在柱管内原位聚合或固化的方法制备得到的具有多孔结构的整体棒状固定相,与传统的填充柱相比,具有通透性好、传质速率快、容易制备等优点,因此在分离分析领域特别是生物分离分析中发挥的作用日益增大。整体柱的制备及应用近年来也得到了快速发展,层出不穷的新型整体柱已被广泛用于色谱高效分离分析、固相萃取及酶反应器等方面,大大推动了分离分析科学的发展。本文主要总结了近五年来整体柱的制备技术及其在蛋白质组学应用中的一些最新研究进展。 展开更多

关键词 整体柱 制备 色谱分离 蛋白质组学 综述

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“一锅法”制备C18-硅胶杂化毛细管整体柱及其应用 被引量：3

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作者 张振宾 欧俊杰 +4 位作者 董靖 王方军 吴明火 林辉 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期830-836,共7页

发展了一种"一锅法"制备有机-无机杂化毛细管整体柱的方法。首先将四甲氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷在弱酸条件下水解,然后加入有机单体(甲基丙烯酸-N,N-二甲基十八烷基溴化铵乙酯)及自由基聚合引发剂,同步原位完成硅羟基间... 发展了一种"一锅法"制备有机-无机杂化毛细管整体柱的方法。首先将四甲氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷在弱酸条件下水解,然后加入有机单体(甲基丙烯酸-N,N-二甲基十八烷基溴化铵乙酯)及自由基聚合引发剂,同步原位完成硅羟基间的缩聚反应及双键间的自由基聚合反应,从而制成C18-硅胶杂化整体柱;同时用毛细管电色谱(CEC)和毛细管液相色谱(CLC)对其柱效和分离能力进行了初步评价,并将其应用到微柱液相色谱-串联质谱对牛血清白蛋白酶解液的分离分析。结果表明,该C18-硅胶杂化整体柱具有较高的柱效和较好的重现性,在分离分析复杂生物样品方面具有较大的应用前景。此外,本文所发展的方法在制备杂化整体柱的过程中不借助相应的硅烷试剂,为杂化整体柱的制备提供了一种新的思路。 展开更多

关键词 整体材料 有机-无机杂化 一锅法 毛细管电色谱 毛细管液相色谱 蛋白质组分析

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北京“十二五”时期碳强度年度目标分解研究 被引量：2

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作者 王方军 王文举 《首都经济贸易大学学报》 北大核心 2013年第2期121-123,共3页

依据诺德豪斯提出的经典边际减排成本函数,运用EPPA模型给出的中国边际减排成本数据,可推算出中国"十二五"时期各年的边际减排成本函数,并由同期全国和北京的边际减排成本函数之间的关系,得到北京各年的减排成本函数。在国家... 依据诺德豪斯提出的经典边际减排成本函数,运用EPPA模型给出的中国边际减排成本数据,可推算出中国"十二五"时期各年的边际减排成本函数,并由同期全国和北京的边际减排成本函数之间的关系,得到北京各年的减排成本函数。在国家下达的北京"十二五"时期碳强度下降18%的目标约束下,使北京各年减排成本总额最小化,得到北京各年二氧化碳最优减排率,给出北京"十二五"时期碳强度的年度目标分解。 展开更多

关键词 北京 碳强度 目标分解

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博弈计量经济模型研究 被引量：7

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作者 王文举 王方军 《首都经济贸易大学学报》 北大核心 2014年第3期108-113,共6页

博弈计量经济模型是博弈论与计量经济学的结合,是对博弈模型的计量经济分析。博弈论和计量经济学已成为当今分析经济问题的两种最有力的方法,博弈计量经济模型分析将这两种方法结合在一起,必将使问题的分析以更加符合现实的方式揭示经... 博弈计量经济模型是博弈论与计量经济学的结合,是对博弈模型的计量经济分析。博弈论和计量经济学已成为当今分析经济问题的两种最有力的方法,博弈计量经济模型分析将这两种方法结合在一起,必将使问题的分析以更加符合现实的方式揭示经济活动的内在规律。从静态博弈计量经济模型、动态博弈计量经济模型、序贯博弈计量经济模型三个方面梳理博弈计量经济模型的已有研究,分析现有研究的贡献和不足,并指出进一步研究的方向和思路。 展开更多

关键词 博弈计量经济模型 静态博弈 动态博弈 序贯博弈

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基于两相预柱的在线二维分离系统用于人肝组织中磷酸肽的规模化鉴定

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作者 宋春侠 王方军 +3 位作者 程凯 边阳阳 叶明亮 邹汉法 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1070-1074,共5页

将C18反相(RP)填充柱和磷酸基强阳离子交换(SCX)整体柱集成于一体的RP-SCX两相预柱,成功用于RPLC-MS/MS系统的自动进样和SCX分级,完成了磷酸肽在线多维分离平台的构建,可以减少样品的损失,极大地提高了系统的集成化水平和检测灵敏度。... 将C18反相(RP)填充柱和磷酸基强阳离子交换(SCX)整体柱集成于一体的RP-SCX两相预柱,成功用于RPLC-MS/MS系统的自动进样和SCX分级,完成了磷酸肽在线多维分离平台的构建,可以减少样品的损失,极大地提高了系统的集成化水平和检测灵敏度。对人肝组织酶解液富集的磷酸肽进行规模化鉴定,在假阳率小于1%的情况下,共鉴定到3 082条非重复的磷酸化肽段、3 056个磷酸化位点和1 332个磷酸化蛋白。对所鉴定到的磷酸化蛋白进行了功能分类和激酶分析。该实验结果对于了解蛋白质磷酸化在肝脏组织中发挥的生理学作用具有重要意义。 展开更多

关键词 在线多维色谱 磷酸肽 蛋白质组学 人肝

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毛细管整体柱在线二维分离系统应用于人体软骨的蛋白质组分析 被引量：3

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作者 谢沙洁 王方军 +3 位作者 晏丹 周广东 叶明亮 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期140-145,共6页

将已建立的7cm柱长的磷酸基团强阳离子交换富集整体柱与85cm柱长的C12烷基反相整体柱结合的在线二维分离平台应用于软骨提取蛋白的蛋白质组分析。对20μg软骨提取蛋白的酶解产物进行14个盐梯度的分级,然后对14个馏分进行反相色谱梯度分... 将已建立的7cm柱长的磷酸基团强阳离子交换富集整体柱与85cm柱长的C12烷基反相整体柱结合的在线二维分离平台应用于软骨提取蛋白的蛋白质组分析。对20μg软骨提取蛋白的酶解产物进行14个盐梯度的分级,然后对14个馏分进行反相色谱梯度分离及串联质谱鉴定,成功地鉴定得到了7434个独立肽段对应的1901个非冗余蛋白质。对所鉴定到的蛋白质进行定位分类,结果表明鉴定到的大部分蛋白质是来自于软骨细胞内部的低丰度蛋白质,这对于许多关节类疾病的研究有重要意义。 展开更多

关键词 整体柱 在线二维分离 蛋白质组学 软骨组织

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结构蛋白质组学研究进展 被引量：11

9

作者 周烨 刘哲益 王方军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期788-797,共10页

蛋白质结构与其生物学功能直接相关,蛋白质功能的调控也主要依赖于其构象和相互作用的动态调节。对蛋白质结构和功能的研究一直是生命科学领域的研究热点,也是当前蛋白质组学研究的重要发展方向。该综述重点讨论了近年来基于质谱的结构... 蛋白质结构与其生物学功能直接相关,蛋白质功能的调控也主要依赖于其构象和相互作用的动态调节。对蛋白质结构和功能的研究一直是生命科学领域的研究热点,也是当前蛋白质组学研究的重要发展方向。该综述重点讨论了近年来基于质谱的结构蛋白质组学主要分析方法的原理、进展和应用,主要包括非变性质谱法、限制性蛋白质酶切法、化学交联法、氢氘交换法、共价化学标记法、热稳定性分析法等;最后对结构蛋白质组学的发展进行了总结与展望。 展开更多

关键词 结构蛋白质组学 质谱 蛋白质相互作用 综述

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一种位点注释的蛋白质数据库用于磷酸化肽段的鉴定 被引量：2

10

作者 程凯 王方军 +2 位作者 边阳阳 叶明亮 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期10-16,共7页

磷酸化修饰的分析一直是蛋白质组学研究的热点之一。在鸟枪法的蛋白质组学研究中,通过在数据库检索中设定磷酸化为可变修饰可以直接鉴定磷酸化修饰的位点。但是翻译后修饰的引入会增加数据检索空间,造成鉴定灵敏度的降低。为了解决这一... 磷酸化修饰的分析一直是蛋白质组学研究的热点之一。在鸟枪法的蛋白质组学研究中,通过在数据库检索中设定磷酸化为可变修饰可以直接鉴定磷酸化修饰的位点。但是翻译后修饰的引入会增加数据检索空间,造成鉴定灵敏度的降低。为了解决这一问题,我们构建了一种位点注释的数据库,这种数据库包含蛋白质的磷酸化位点信息,并开发了一种新的数据库检索策略用于磷酸化肽段的可靠鉴定。用不同类型的数据作为分析对象,通过Mascot检索软件对这种新的数据库检索策略进行了考察,证明了这种方法在保证鉴定结果可靠性的前提下提高了磷酸化肽段鉴定的灵敏度。 展开更多

关键词 蛋白质组学 磷酸化 检索空间 位点注释

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色谱技术在药物-血浆蛋白相互作用研究中的应用进展 被引量：3

11

作者 白玉 范玉凡 +1 位作者 葛广波 王方军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1077-1085,共9页

小分子药物进入人体血液循环系统后与人血清白蛋白(HSA)、α1-酸性糖蛋白(AGP)等血浆蛋白存在广泛的相互作用,这些相互作用深刻影响药物在体内的分布及其与靶标蛋白的结合,进而影响药物效应的发挥。深入探究药物与血浆蛋白间的相互作用... 小分子药物进入人体血液循环系统后与人血清白蛋白(HSA)、α1-酸性糖蛋白(AGP)等血浆蛋白存在广泛的相互作用,这些相互作用深刻影响药物在体内的分布及其与靶标蛋白的结合,进而影响药物效应的发挥。深入探究药物与血浆蛋白间的相互作用对于候选药物的成药性优化、新药研发、联合用药的风险评控等意义重大。而发展高效、灵敏、准确的分析检测方法是开展药物-血浆蛋白相互作用研究的关键。近年来,色谱技术由于其高通量、高分离性能、高灵敏度等特点在该领域得到了广泛的应用,包括测定血浆蛋白翻译后修饰对药物结合的影响,多种药物的竞争性结合等。其中,高效亲和色谱(HPAC)和毛细管电泳(CE)应用最为广泛,能够通过多种分析方法获取结合常数、结合位点数、解离速率常数等相互作用信息。该文着重综述了HPAC和CE在药物-血浆蛋白相互作用研究中的常用策略及最新研究进展,包括HPAC中常用的前沿色谱法、竞争洗脱法、超快亲和提取法、峰值分析法和峰衰减分析法,以及CE中常用的亲和毛细管电泳法(ACE)和毛细管电泳前沿分析法(CE-FA)等。最后,该文还对当前色谱方法存在的不足进行了总结,并对色谱技术在药物-血浆蛋白相互作用研究领域的应用前景和发展方向进行了展望。 展开更多

关键词 药物-血浆蛋白相互作用 高效亲和色谱 毛细管电泳 综述

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浅议青海资金市场的现状和出路

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作者 王方军 《青海金融》 1996年第S1期14-15,共2页

关键词 资金市场 中介机构 证券公司 证券交易所 证券市场 金融工具 国库券 同业拆借市场 信托投资公司 金融机构

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微课在初中物理实验教学中的应用

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作者 王方军 《新课程教学（电子版）》 2019年第8期69-69,共1页

微课就是主题突出、内容精简、针对性强的教学视频.教师将实验内容制作成通俗易懂的微课,可以让学生在课前对实验内容做到心中有数,在动手操作时有的放矢.本文重点研究微课在初中物理实验教学中的应用,供参考.

关键词 微课 初中物理 实验应用

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钒微合金化对高性能4J32合金微观组织和性能的影响

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作者 马逵 张腾中 +2 位作者 王方军 王东哲 甄大崴 《航天返回与遥感》 CSCD 北大核心 2023年第1期144-152,共9页

随着空间光学遥感器性能的发展,对光机结构的力、热稳定性提出了更高的要求,而材料性能的提升是提高结构稳定的重要技术途径。文章研究了钒(V)微合金化超因瓦(4J32)合金在不同锻造温度和热处理过程中合金的微观组织、一次碳化物、晶粒... 随着空间光学遥感器性能的发展,对光机结构的力、热稳定性提出了更高的要求,而材料性能的提升是提高结构稳定的重要技术途径。文章研究了钒(V)微合金化超因瓦(4J32)合金在不同锻造温度和热处理过程中合金的微观组织、一次碳化物、晶粒度及性能的变化。结果表明,通过向4J32合金中添加0.1%的微合金元素V,采用真空感应熔炼+电渣重熔的冶炼工艺,并将终锻温度控制在850℃,经过800~850℃固溶处理,产品显微组织更加均匀,具有较高的强度和较低的热膨胀系数,满足了空间光学遥感器支撑结构的力、热稳定性要求。 展开更多

关键词 超因瓦合金 钒微合金化 固溶处理 热膨胀系数 空间光学遥感器

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