湖羊PSMB9基因克隆、序列分析及对成肌细胞增殖的影响

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作者 谢蓓伊庭 王悦 +6 位作者 孟春花 钱勇 张俊 张建丽 王慧利 曹少先 李隐侠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期1-12,共12页

[目的]探讨湖羊蛋白酶体亚基β9(proteasome 20S subunit beta 9,PSMB9)基因编码区、启动子区序列特征、转录调控机制及其对成肌细胞增殖的影响。[方法]采用克隆测序法获得湖羊PSMB9基因编码区序列,根据绵羊PSMB9基因组的定位确定其启... [目的]探讨湖羊蛋白酶体亚基β9(proteasome 20S subunit beta 9,PSMB9)基因编码区、启动子区序列特征、转录调控机制及其对成肌细胞增殖的影响。[方法]采用克隆测序法获得湖羊PSMB9基因编码区序列,根据绵羊PSMB9基因组的定位确定其启动子区大小,并通过生物学软件分析PSMB9基因编码区和启动子区序列特性,采用Mega 5.0中的邻接法(Neighbor-Joining)构建基于PSMB9氨基酸序列的系统进化树;采用实时荧光定量PCR鉴定PSMB9基因在湖羊不同组织中的表达谱;利用双酶切法构建湖羊PSMB9基因过表达载体,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力,通过实时荧光定量PCR检测PSMB9基因在C2C12细胞系中的过表达效果和增殖基因PCNA的表达水平。[结果]湖羊PSMB9基因编码区长660 bp,编码219个氨基酸残基,其核苷酸序列和氨基酸序列与哺乳动物(如人、牛、猪和小鼠)的相似性较高,PSMB9氨基酸中活性位点和β亚基相互作用位点均高度保守;系统进化树显示,湖羊与牛先聚在一起,再与猪、人和小鼠聚在一起,说明PSMB9在哺乳动物中相对保守。PSMB9基因启动子区含有1个CpG岛、2个GC-box(CCGCCC)和2个E-box(CANNTG),且存在SP1、KLF4、STAT3、YY1、CREB1等多种转录因子潜在结合位点。组织表达谱显示,PSMB9基因在湖羊各组织中广泛表达,其中在脾脏中表达量最高,肌肉次之。与对照组相比,在C2C12细胞系中过表达PSMB9基因后极显著提升了细胞的增殖能力(P<0.01),增殖标志基因PCNA表达水平极显著上调(P<0.01)。[结论]本研究成功克隆获得了湖羊PSMB9基因序列,该基因在哺乳动物中高度保守,启动子区含有重要调控元件、CpG岛和转录因子潜在结合位点。PSMB9基因在湖羊脾脏和肌肉组织中高表达,PSMB9基因过表达可促进成肌细胞的增殖。研究结果为进一步阐明PSMB9基因调控湖羊肌肉发育的分子机制提供依据。 展开更多

关键词 湖羊 PSMB9基因 克隆 组织表达谱 C2C12细胞系 细胞增殖

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不同嫩度徐州牛肌肉转录组比较分析

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作者 沈阳阳 安振江 +7 位作者 高林娜 夏淑雯 陈坤琳 丁强 高运东 薛金果 仲跻峰 王慧利 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期522-533,共12页

[目的]探究徐州牛不同嫩度背最长肌间的基因表达差异,挖掘相关调控基因和信号通路,为进一步研究徐州牛肌肉生长调控的作用机制提供理论依据。[方法]本研究以江苏地方特色牛种——徐州牛为研究对象,屠宰后对背最长肌进行剪切力测定,依据... [目的]探究徐州牛不同嫩度背最长肌间的基因表达差异,挖掘相关调控基因和信号通路,为进一步研究徐州牛肌肉生长调控的作用机制提供理论依据。[方法]本研究以江苏地方特色牛种——徐州牛为研究对象,屠宰后对背最长肌进行剪切力测定,依据剪切力值大小分为高嫩度组6头(剪切力<5.5 kg)和低嫩度组4头(剪切力>7 kg),并对两组肌肉组织进行转录组测序,对数据进行过滤、质控、比对、定量后使用R语言DEseq2包筛选差异表达基因并进行功能富集分析。对差异极显著基因胱抑素B(cystatin B,CSTB)进行物种相似性比对及蛋白理化性质等分析。[结果](1)转录组结果显示,相对于低嫩度组,高嫩度组中有94个基因上调、37个基因下调,位于前二十的差异表达基因包括CSTB、VWF、DIRAS3、CDKN1A、CFB等。(2)GO和KEGG富集分析发现,差异表达基因主要涉及凝血、免疫效应、伤口愈合等生物学过程,以及参与脂质代谢的Wnt信号通路等。基因通路网络分析发现,生物过程和分子功能中共同存在CSTB、PRKG1、PLAUR等差异表达基因。(3)牛CSTB基因与羊的相似性最高,为97.96%,其次是猪;蛋白理化性质发现,CSTB含有98个氨基酸残基,不稳定系数为33.17(<40),为稳定蛋白;蛋白二级结构预测显示,CSTB主要是由延伸链和无规则卷曲构成;STRING在线数据库分析结果显示,CSTB可能与CTSH、WC1-10、CTSB等存在相互作用。[结论]本研究筛选出影响徐州牛肌肉不同嫩度的差异表达基因CSTB、VWF、DIRAS3、CDKN1A、CFB等。研究结果可为牛肉品质研究提供理论依据和数据支撑。 展开更多

关键词 徐州牛 背最长肌 转录组测序 肌肉嫩度

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CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎 被引量：2

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作者 张晨俭 李隐侠 +5 位作者 丁强 刘伟佳 王慧利 何南 吴家顺 曹少先 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期129-141,共13页

旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体,体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体... 旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体,体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率;在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组,2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物,对照组注射超纯水,以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板,PCR扩增靶区域并测序鉴定,发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式;根据在线网站预测,每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。结果表明,在SOCS2基因83和96号氨基酸密码子附近区域获得2条sgRNA并成功构建表达载体,体外转录获得高质量sgRNA和Cas 9 mRNA;两条sgRNA均可引导Cas9蛋白在体外完全切割靶DNA;SOCS2-sg-83对胚胎的编辑效率为94.1%,160个T-A克隆中有152个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为95.0%,其中81.3%发生了移码突变,9.4%的克隆缺失83号氨基酸密码子,累计90.6%的克隆实现了SOCS2基因功能性敲除;SOCS2-sg-96对胚胎的编辑效率为50.0%,80个T-A克隆中有70个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为87.5%,移码突变概率为75.0%,5.0%的克隆缺失了96号氨基酸密码子,累计80.0%的克隆实现了SOCS2基因功能性敲除。另外,在所有已编辑胚胎中均未发现脱靶。综上,SOCS2-sg-83可实现山羊胚胎SOCS2基因的高效、精准编辑和敲除,为高效制备SOCS2基因敲除山羊,培育快长型肉用山羊奠定了技术基础。 展开更多

关键词 山羊胚胎 细胞因子信号传导抑制因子2 CRISPR/Cas9 基因编辑

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江苏地区荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数估计 被引量：2

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作者 夏淑雯 陈坤琳 +6 位作者 沈阳阳 安振江 赵芳 丁强 仲跻峰 林志平 王慧利 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1030-1039,共10页

旨在估计荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数及评估育种值,为提高生产性能及实施平衡育种提供参考。本研究共收集江苏地区9个规模化牧场2017—2023年间19 756头荷斯坦成母牛的离群记录,分析牛只的长寿性和淘汰情况。利用R软件的GLM程序对影... 旨在估计荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数及评估育种值,为提高生产性能及实施平衡育种提供参考。本研究共收集江苏地区9个规模化牧场2017—2023年间19 756头荷斯坦成母牛的离群记录,分析牛只的长寿性和淘汰情况。利用R软件的GLM程序对影响奶牛长寿性状的固定效应(包括牧场、出生年季、头胎产犊月龄)进行显著性检验;采用BLUPF90软件进行遗传参数估计以及育种值评估,并绘制遗传趋势图。结果表明:江苏地区规模化牧场成母牛平均在群寿命为1 640.87 d,生产寿命为917.15 d,平均利用胎次为2.60胎;长寿性状遗传力估计值变化范围为0.07~0.15,属低遗传力性状;7个长寿性状(在群天数、生产寿命、利用胎次和L1-L4)间均具有中等到较高的遗传和表型相关(0.27~0.99),其中在群寿命与生产寿命的相关性趋近于1;通过计算长寿性状的育种值,绘制遗传趋势图,发现近年来长寿性状遗传进展缓慢且整体呈下降趋势。本研究对江苏地区规模化牧场成母牛长寿性状进行了系统的遗传分析,可为制定南方地区奶牛长寿性状育种规划提供参考。 展开更多

关键词 荷斯坦牛 长寿性状 遗传力 遗传相关 育种值

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利用CRISPR/Cas9技术制备BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系

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作者 丁修虎 林志平 +8 位作者 赵芳 陈坤琳 仲跻峰 张燕 高运东 李惠侠 王慧利 张建丽 丁强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4475-4488,共14页

旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA,与CRISPR/Cas9表... 旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA,与CRISPR/Cas9表达载体电转染入bMECs,利用浓度为1.8μg·mL^(-1)嘌呤霉素和6μg·mL^(-1)稻瘟菌素双药筛和PCR分析鉴定获得BLG基因编辑的单克隆细胞株;利用Western blot(WB)验证细胞BLG表达;绘制生长曲线和CCK-8试验检测BLG基因敲除对bMECs细胞增殖的影响;同时根据sgRNA序列,对基因组上潜在脱靶位点进行PCR测序分析。经筛选和PCR序列分析,共筛选获得了9株BLG基因编辑细胞株,其编辑效率为90%(9/10),其中4株细胞株BLG基因大片段删除。序列分析结果显示,单克隆细胞株编辑位点呈现片段插入缺失和碱基替换等多种编辑类型,WB结果显示敲除细胞株BLG蛋白表达显著降低,且细胞生长曲线和CCK-8检测结果表明BLG基因敲除的细胞生长速度加快。本研究利用CRISPR/Cas9技术成果构建了牛乳腺上皮细胞BLG基因高效敲除方法,BLG基因敲除后可显著影响牛乳腺上皮细胞的增殖,为探究BLG敲除牛在乳腺上皮细胞水平探究其功能机制提供细胞模型。 展开更多

关键词 BLG基因 牛乳腺上皮细胞系 CRISPR/Cas9 基因编辑

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松材线虫携带细菌在疫区和寄主中的分布及致病性研究 被引量：17

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作者 王慧利 韩素芬 赵博光 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期48-53,共6页

作者在江苏、上海、广东、安徽、湖北、浙江等疫区 ,采集了呈现松材线虫病典型症状的黑松、马尾松的病样 ,采用病木组织分离法 ,分离获得松材线虫所携带的细菌菌株 2 4株 ,经鉴定 ,2 4株细菌中 ,假单胞菌属有 11株 ,泛菌属有 6株 ,其余... 作者在江苏、上海、广东、安徽、湖北、浙江等疫区 ,采集了呈现松材线虫病典型症状的黑松、马尾松的病样 ,采用病木组织分离法 ,分离获得松材线虫所携带的细菌菌株 2 4株 ,经鉴定 ,2 4株细菌中 ,假单胞菌属有 11株 ,泛菌属有 6株 ,其余有不解糖消化链球菌、河生肠杆菌、乡间步丘菌和粘质沙雷菌 .由此可知 ,假单胞菌和泛菌分布较广 ,在所有采样疫区感染松材线虫病的马尾松和黑松病死木中都能分离到 ,是普遍存在病木组织中松材线虫携带的主要细菌 .致萎活性测定结果表明 :所有假单胞菌属和泛菌属的菌株对无菌黑松切根苗均有致萎活性 .用假单胞菌和泛菌分别与无菌松材线虫混合接种室内无菌黑松苗和野外多年生黑松 ,结果表明 :用细菌单独接种 ,无菌黑松苗和野外黑松均不发病 ,无菌松材线虫单独接种的无菌黑松苗和野外黑松也不发病或发病轻、慢 ,无菌线虫和致萎细菌二者混合接种能使无菌黑松苗和野外黑松发病快且严重 . 展开更多

关键词 黑松 马尾松 松材线虫 细菌 分离 鉴定 致病性

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多孔隔热材料的研究现状与进展 被引量：23

7

作者 王慧利 邓建国 舒远杰 《化工新型材料》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期18-21,共4页

多孔隔热材料是利用其基体内封闭气孔中气体的低导热性来达到隔热效能的,是隔热材料体系中应用最广、最有效的材料之一。根据基体中引入气孔方式不同,制备多孔隔热材料的方法可分为基体发泡法,外部引入法和结构控制形成法。此文重点介... 多孔隔热材料是利用其基体内封闭气孔中气体的低导热性来达到隔热效能的,是隔热材料体系中应用最广、最有效的材料之一。根据基体中引入气孔方式不同,制备多孔隔热材料的方法可分为基体发泡法,外部引入法和结构控制形成法。此文重点介绍了由以上方法制得的多孔隔热材料的性能及应用,同时展望了多孔高效能隔热材料的发展趋势。 展开更多

关键词 多孔隔热材料 性能 应用

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对接受PFNA内固定术的股骨粗隆间骨折患者实施强化护理干预的效果分析 被引量：4

8

作者 王慧利 《当代医药论丛》 2015年第17期102-103,共2页

目的:探讨分析对接受PFNA(股骨近端髓内钉)内固定术的股骨粗隆间骨折患者实施强化护理干预的临床效果。方法 :选取2013年3月~2015年3月间我院收治的接受PFNA内固定术的股骨粗隆间骨折患者40例作为研究对象,采用随机数表法将其分为对照组... 目的:探讨分析对接受PFNA(股骨近端髓内钉)内固定术的股骨粗隆间骨折患者实施强化护理干预的临床效果。方法 :选取2013年3月~2015年3月间我院收治的接受PFNA内固定术的股骨粗隆间骨折患者40例作为研究对象,采用随机数表法将其分为对照组(20例)和观察组(20例),为对照组患者进行常规护理,为观察组在进行常规护理的基础上实施强化护理干预,观察对比两组患者的临床疗效,并将对比的结果及两组患者的临床资料进行回顾性的分析。结果 :观察组患者治疗的优良率为95.00%,对照组患者治疗的优良率为70.00%,观察组患者的临床疗效明显优于对照组患者,差异显著(P<0.05),具有统计学意义。观察组患者的术后并发症发生率为5.00%,对照组患者的术后并发症发生率为30.00%,观察组患者的术后并发症发生率明显低于对照组患者,差异显著(P<0.05),具有统计学意义。结论 :对接受PFNA内固定术的股骨粗隆间骨折患者实施强化护理干预的临床效果显著,此护理方法不仅能提高患者的临床疗效,还能降低其术后并发症的发生率,值得在临床上推广应用。 展开更多

关键词 PFNA内固定术 股骨粗隆间骨折 强化护理干预 临床效果 分析

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除草剂咪唑烟酸高效降解菌的筛选及其降解性能的研究 被引量：17

9

作者 王学东 欧晓明 +1 位作者 王慧利 樊德方 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期102-105,共4页

经过瓶培养法富集培养,从长期使用咪唑烟酸的非耕地土壤中,分离出两株该除草剂的高效降解菌ZJX-5和ZJX-9,经VITEK-AMS细菌自动鉴定仪对上述两菌株分别进行鉴定为:ZJX-5为荧光假单胞菌Ⅱ型(pseudomonasfluorescenesbiotypeⅡ);ZJX-9为腊... 经过瓶培养法富集培养,从长期使用咪唑烟酸的非耕地土壤中,分离出两株该除草剂的高效降解菌ZJX-5和ZJX-9,经VITEK-AMS细菌自动鉴定仪对上述两菌株分别进行鉴定为:ZJX-5为荧光假单胞菌Ⅱ型(pseudomonasfluorescenesbiotypeⅡ);ZJX-9为腊状芽孢杆菌(Bacilluscereus)。当原始浓度为100mg·L-1时,其在5d内的降解率分别可达89.40%和95.56%,并研究了单一菌株和混合菌株对咪唑烟酸的降解能力。结果表明,混合菌的降解能力明显优于单一菌株,尤其在咪唑烟酸浓度较高时,混合菌在降解率及耐性方面均比单一菌株明显提高。 展开更多

关键词 除草剂 降解性能 咪唑烟酸 筛选方法 降解菌 混合菌

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咪唑烟酸在不同土壤中的降解动态及其影响因子 被引量：15

10

作者 王学东 周红斌 +1 位作者 王慧利 樊德方 《农药学学报》 CAS CSCD 2004年第1期53-57,共5页

研究了咪唑烟酸在小粉土、海涂土、黄筋泥及黄红壤4种不同类型土壤中的降解动力学,并探讨了土壤各性质对其降解的影响。结果表明:咪唑烟酸在4种土壤中的降解速率常数分别为0.0227、0.0233、0.0175、0.0157,即在海涂土中降解最快,在黄红... 研究了咪唑烟酸在小粉土、海涂土、黄筋泥及黄红壤4种不同类型土壤中的降解动力学,并探讨了土壤各性质对其降解的影响。结果表明:咪唑烟酸在4种土壤中的降解速率常数分别为0.0227、0.0233、0.0175、0.0157,即在海涂土中降解最快,在黄红壤中降解最慢。土壤中影响降解的主要因子为有机质含量,其次为土壤酸碱度,即有机质含量越高,土壤碱性越强,则其半衰期越短,降解速度越快。外界环境条件对咪唑烟酸的降解影响也较大,温度越高,湿度越大,则咪唑烟酸的降解越快,温度效应系数(Q)的范围在1.08～1.42之间,与范特荷夫(Van,tHoff)规则不吻合,说明温度对咪唑烟酸在土壤中降解速率的影响明显低于对水解的影响,最适的降解温度为25～35℃。与上述因子的影响相反,添加浓度高,则降解速率明显下降。 展开更多

关键词 咪唑烟酸 土壤性质 温度 湿度 添加浓度

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除草剂咪唑烟酸在土壤中的微生物降解研究 被引量：17

11

作者 王学东 欧晓明 +1 位作者 王慧利 樊德方 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期156-159,共4页

关键词 除草剂 咪唑烟酸 土壤 微生物降解 优势降解菌

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Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数的关联分析 被引量：8

12

作者 李隐侠 张俊 +5 位作者 钱勇 李静心 孟春花 王慧利 钟声 曹少先 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1917-1923,共7页

为了研究Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数之间的关系,本研究采用DNA池测序技术筛选苏淮山羊Kiss-1基因突变位点,采用AS-PCR和PCR-RFLP方法检测130只苏淮山羊Kiss-1基因突变位点的多态性,并分析其与产羔数的关联性。结果表明,在苏淮山... 为了研究Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数之间的关系,本研究采用DNA池测序技术筛选苏淮山羊Kiss-1基因突变位点,采用AS-PCR和PCR-RFLP方法检测130只苏淮山羊Kiss-1基因突变位点的多态性,并分析其与产羔数的关联性。结果表明,在苏淮山羊内含子1中发现2个突变位点g.2270C>T和g.2510A>G,其中g.2510A>G位点有3种基因型AA、AG和GG,基因型频率分别为0.209、0.496和0.295;g.2270C>T位点在苏淮山羊中共检测3种基因型(CC、CT和TT),基因型频率分别为0.143、0.750和0.107。关联分析发现,g.2510A>G位点3种基因型在苏淮山羊各胎产羔数和平均产羔数间差异不显著,g.2270C>T位点中CC型的二胎产羔数显著高于CT和TT型(P<0.05)。单倍型分析发现,g.2510A>G和g.2270C>T位点在苏淮山羊群体中共构建8种单倍型,其中AGCT是主要的单倍型;各单倍型与苏淮山羊产羔数的关联分析发现仅AGCT单倍型的头胎产羔数与AACT单倍型的头胎产羔数间差异显著,其他单倍型在苏淮山羊的各胎产羔数间差异均不显著。综合以上研究表明,Kiss-1基因的g.2270C>T位点可能对苏淮山羊繁殖性状的选育具有一定的指导作用。 展开更多

关键词 苏淮山羊 KISS-1基因 PCR-RFLP AS-PCR 单倍型 产羔数

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咪唑烟酸在土壤表面光解动力学及深度的研究 被引量：9

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作者 徐淑霞 王学东 +1 位作者 周红斌 王慧利 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期944-948,共5页

运用模拟太阳光,探讨了咪唑烟酸在浙江4种典型土壤表面的光解动力学特征,分析了不同添加浓度,不同光强对其降解动力学的影响。结果表明,4种土壤的光解快慢顺序为:黄筋泥>黄红壤>海涂土>小粉土,其中最快的降解速率是最慢的1.38... 运用模拟太阳光,探讨了咪唑烟酸在浙江4种典型土壤表面的光解动力学特征,分析了不同添加浓度,不同光强对其降解动力学的影响。结果表明,4种土壤的光解快慢顺序为:黄筋泥>黄红壤>海涂土>小粉土,其中最快的降解速率是最慢的1.38倍;影响光解半衰期最主要的因素为土壤的酸碱度,呈正相关,即土壤的pH值越高,其半衰期越长;而在光照强度较高,添加浓度相对较低的情况下,咪唑烟酸的降解较快。咪唑烟酸在不同湿度土壤中的光解深度明显不同,在风干土壤中,4种土壤的光解深度分别在0.07～0.14mm之间;而在60%田间持水量的土壤中,4种土壤的光解深度比风干土壤平均提高2～3倍。 展开更多

关键词 咪唑烟酸 光解速率 光照强度 土壤表面

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猪CD163基因的单碱基编辑研究 被引量：7

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作者 赵为民 王慧利 +8 位作者 曹少先 郭日红 王泽平 陈哲 徐奎 付言峰 李碧侠 任守文 程金花 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1041-1050,共10页

旨在利用YE1-BE3-FNLS载体对猪的CD163基因进行C>T的单碱基突变,形成终止密码子TAA,从而导致CD163基因翻译的提前终止。利用网站在猪CD163基因的第7外显子筛选到高效率的sgRNA序列使其符合C5位点,并且C5后续的两个碱基为AA,CAA与起... 旨在利用YE1-BE3-FNLS载体对猪的CD163基因进行C>T的单碱基突变,形成终止密码子TAA,从而导致CD163基因翻译的提前终止。利用网站在猪CD163基因的第7外显子筛选到高效率的sgRNA序列使其符合C5位点,并且C5后续的两个碱基为AA,CAA与起始密码子ATG之间的碱基数为3的整数倍。PCR扩增CD163-sgRNA和YE1-BE3-FNLS载体中的APOBEC-Cas9n-UGI片段,通过体外转录形成CD163-sgRNA和APOBEC-Cas9n-UGI mRNA。体外培养猪卵母细胞并进行孤雌激活,利用显微操作仪对孤雌胚胎进行CD163-sgRNA和APOBEC-Cas9n-UGI mRNA注射,待胚胎发育至桑椹胚和囊胚阶段,提取胚胎基因组DNA对单碱基编辑区域进行PCR扩增测序。结果显示,在49个候选sgRNA中成功筛选出一个CD163-sgRNA,利用PCR成功扩增了CD163-sgRNA和APOBEC-Cas9n-UGI片段,注射CD163-sgRNA和APOBEC-Cas9n-UGI mRNA后的猪孤雌胚胎发育到2~4细胞期。挑选注射的20个2~4细胞期胚胎经过PCR扩增与产物测序后发现有12个胚胎的CD163基因的第7外显子的预期位点C(num1479)>T,单碱基编辑效率约60%。对CD163-sgRNA的off-target分析发现,在错配3个碱基的情况下该CD163-sgRNA有5个off-target区域,对这5个区域进行PCR扩增和sanger测序分析后发现都没有发生C>T的突变。本研究利用YE1-BE3-FNLS工具在胚胎水平上对猪的CD163基因进行了单碱基编辑,成功使得该基因第7外显子预期位点(num1479)C变为T,从而使得密码子CAA变为TAA,可提前终止CD163基因的翻译。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 单碱基编辑 CD163基因 猪

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高温环境下湖羊直肠温度和血液生化指标的监测 被引量：7

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作者 李隐侠 王慧利 +5 位作者 邓维 张莉 张俊 钱勇 孟春花 曹少先 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期271-277,共7页

本研究以南方特色绵羊品种湖羊为研究对象,在夏季高温环境下,连续监测10d湖羊直肠温度变化,测定血常规指标,并比较不同年龄、不同性别的湖羊在高温环境下血常规指标的差异;以湖羊高温环境下直肠温度的变化为基础,结合血常规指标,在湖羊... 本研究以南方特色绵羊品种湖羊为研究对象,在夏季高温环境下,连续监测10d湖羊直肠温度变化,测定血常规指标,并比较不同年龄、不同性别的湖羊在高温环境下血常规指标的差异;以湖羊高温环境下直肠温度的变化为基础,结合血常规指标,在湖羊群体内鉴别高温应激敏感和高温应激抗性湖羊个体。结果显示,湖羊最高直肠温度出现在环境温度最高的时段(11∶00~15∶00),最低温度一般出现在03∶00左右,且以24h为周期循环;平均最高直肠温度和最低直肠温度差在湖羊个体间差异显著(P<0.05);高温暴露后湖羊群体淋巴细胞(LYM)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)数量及平均血红蛋白浓度(MCHC)均超出了绵羊正常参考值,且在不同性别和年龄上有一定的差异:母羊嗜碱性细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有高于公羊的趋势,但差异不显著(P>0.05);1周岁湖羊淋巴细胞(P>0.05)、嗜碱性细胞计数(P<0.01)及百分比(P<0.05)均高于半岁湖羊;依据温度变化结合血常规指标变化在湖羊群体中鉴别了高温应激敏感和抗性的湖羊个体,在测试的母羊群体中高温应激敏感湖羊占35.3%,高温应激抗性湖羊占26.5%。肌酸激酶(CK)含量在高温应激敏感和抗性湖羊个体间差异显著(P<0.05)。综合以上结果,高温环境下湖羊不同个体间直肠温度变化差异显著;从血常规指标来看,高温应激对母羊和1岁湖羊的影响比较大。试验结果为深入研究夏季高温应激对湖羊的影响及抗高温应激差异的分子机制提供了一定的依据。 展开更多

关键词 湖羊 高温 直肠温度 血液生化指标 监测

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6个绵羊品种微卫星多样性分析 被引量：8

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作者 王亚磊 李静心 +5 位作者 茆达干 王慧利 李隐侠 钱勇 孟春花 曹少先 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期174-179,共6页

为检测兰坪乌骨绵羊的遗传多样性及其与其他5个绵羊品种(湖羊、小尾寒羊、杜泊羊、特克塞尔羊和无角陶赛特羊)的亲缘关系,试验选择9个微卫星位点对共计117个体进行了检测,将各微卫星位点的PCR扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,POPG... 为检测兰坪乌骨绵羊的遗传多样性及其与其他5个绵羊品种(湖羊、小尾寒羊、杜泊羊、特克塞尔羊和无角陶赛特羊)的亲缘关系,试验选择9个微卫星位点对共计117个体进行了检测,将各微卫星位点的PCR扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,POPGEN32软件计算遗传参数。结果表明,9个微卫星位点均表现为高度多态,各绵羊群体内的PIC平均值为湖羊(0.7211)>陶赛特羊(0.6780)>小尾寒羊(0.6492)>乌骨绵羊(0.6479)>特克塞尔羊(0.5930)>杜泊羊(0.5728)。6个品种中乌骨绵羊的平均杂合度最大(0.9543),而杜泊羊最小(0.2556)。UPGMA聚类分析表明,湖羊与小尾寒羊首先聚为一类,乌骨绵羊与湖羊、小尾寒羊遗传距离较近,而与3个引进品种的遗传距离较远。这些结果提示乌骨绵羊可与湖羊或小尾寒羊杂交提高繁殖力,与引进品种杂交提高肉用性能。 展开更多

关键词 绵羊 微卫星 遗传多样性 遗传距离

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N-{1-[取代吡啶(噻唑)甲基]-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰基}-N′-(芳氧乙酰)肼的合成与生物活性 被引量：5

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作者 严曼 石德清 王慧利 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1266-1270,共5页

采用2-氯-5-(氯甲基)吡啶和2-氯-5-(氯甲基)噻唑为原料,经过叠氮化、乙酰乙酸乙酯环化、水解、酰氯化,然后与芳氧乙酰肼的缩合反应,合成了9种目标化合物,其结构经1H NMR、IR、MS和元素分析测试技术确证,初步的生物活性测定结果表明,目... 采用2-氯-5-(氯甲基)吡啶和2-氯-5-(氯甲基)噻唑为原料,经过叠氮化、乙酰乙酸乙酯环化、水解、酰氯化,然后与芳氧乙酰肼的缩合反应,合成了9种目标化合物,其结构经1H NMR、IR、MS和元素分析测试技术确证,初步的生物活性测定结果表明,目标化合物在100 mg/L质量浓度下显示出良好的除草活性,但杀虫活性较弱。 展开更多

关键词 吡啶 噻唑 三唑 双酰肼化合物 生物活性

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两种方法测量反射速调管的电子渡越时间及其比较 被引量：2

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作者 王慧利 杜晓波 贺天民 《大学物理实验》 2011年第3期51-53,78,共4页

用静态法和动态法分别测量了K-19型反射速调管的电子渡越时间,并对两种方法测量的结果进行了分析和比较。

关键词 微波 反射式速调管 渡越时间 反射极电压

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临床拟诊冠心病患者145例心电图与冠脉造影对比分析 被引量：2

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作者 王慧利 《河南医学研究》 CAS 2017年第2期325-326,共2页

目的对比冠脉造影、心电图在临床拟诊冠心病患者中的诊断价值。方法选取2015年8月至2016年8月在济源市人民医院就诊的临床拟诊冠心病的患者145例作为研究对象,分别给予动态心电图及冠脉造影检查,对比两种方法的诊断准确率。结果动态心... 目的对比冠脉造影、心电图在临床拟诊冠心病患者中的诊断价值。方法选取2015年8月至2016年8月在济源市人民医院就诊的临床拟诊冠心病的患者145例作为研究对象,分别给予动态心电图及冠脉造影检查,对比两种方法的诊断准确率。结果动态心电图与冠脉造影准确性、特异性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。冠脉造影单支病变和双支病变的检出率均高于动态心电图,差异有统计学意义(P<0.05)。结论冠脉造影在诊断价值上优于动态心电图,但对适应证有着较高的要求,可根据具体情况进行针对性选择。 展开更多

关键词 冠脉造影 冠心病 心电图

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双甲脒与溴氰菊酯、氰戊菊酯混用对麦长管蚜的增效作用研究

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作者 王学东 王慧利 +1 位作者 薛银根 樊德方 《农药学学报》 CAS CSCD 2001年第1期94-96,共3页

利用室内浸渍法测定了双甲脒与溴氰菊酯、氰戊菊酯混用对麦长管蚜( M acrosiphum avenae F.)的增效作用。溴氰菊酯、氰戊菊酯与双甲脒均以2∶1比例混合时 ，增效作用最为显著；但当溴氰菊酯与双甲脒以15∶1混用，氰戊菊酯与双甲脒以1∶1... 利用室内浸渍法测定了双甲脒与溴氰菊酯、氰戊菊酯混用对麦长管蚜( M acrosiphum avenae F.)的增效作用。溴氰菊酯、氰戊菊酯与双甲脒均以2∶1比例混合时 ，增效作用最为显著；但当溴氰菊酯与双甲脒以15∶1混用，氰戊菊酯与双甲脒以1∶10混用 时会产生严重的拮抗作用，与分别使用各单剂时相比效果明显降低。 展开更多

关键词 双甲脒 溴氰菊酯 氰戊菊酯 混用 共毒系数 增效作用 麦长管蚜 麦田害虫

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