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Smad真核表达质粒构建及其在小鼠T淋巴瘤细胞中的表达
1
作者
王婧帆
季然
+1 位作者
李鑫宇
陈金铃
《山东医药》
CAS
2018年第21期9-12,共4页
目的构建并鉴定pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3及pc DNA3.1-Smad4真核表达质粒,探讨Smad在小鼠T淋巴瘤细胞(EL4)中能否稳定表达。方法以EL4细胞c DNA为模板,PCR法获取转录因子Smad2、Smad3、Smad4 mRNA CDS区即目的基因片段;构建含...
目的构建并鉴定pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3及pc DNA3.1-Smad4真核表达质粒,探讨Smad在小鼠T淋巴瘤细胞(EL4)中能否稳定表达。方法以EL4细胞c DNA为模板,PCR法获取转录因子Smad2、Smad3、Smad4 mRNA CDS区即目的基因片段;构建含有目的基因的T载体p MD19-T-Smad2、p MD19-T-Smad3、p MD19-TSmad4;用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pc DNA3.1载体、p MD19-T-Smad2,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切pc DNA3.1载体、p MD19-T-Smad3及p MD19-T-Smad4,T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;通过PCR、双酶切及DNA测序等方法鉴定重组质粒。将构建好的pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA 3.1-Smad4电转入EL4细胞,72 h后用Western blotting法检测EL4细胞中目的蛋白的表达。结果 PCR和双酶切结果均提示重组质粒pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA3.1-Smad4构建成功;测序结果确定插入片段无突变,序列完全正确。重组质粒pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA3.1-Smad4转入EL4细胞后上调目的蛋白Smad2、Smad3、Smad4蛋白的表达。结论成功构建pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3和pc DNA3.1-Smad4真核表达质粒;将Smad真核表达质粒成功转染入EL4细胞,诱导细胞内目的蛋白高表达。
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关键词
T淋巴瘤细胞
SMAD蛋白
真核表达质粒
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职称材料
题名
Smad真核表达质粒构建及其在小鼠T淋巴瘤细胞中的表达
1
作者
王婧帆
季然
李鑫宇
陈金铃
机构
南通大学医学院病原生物学系
出处
《山东医药》
CAS
2018年第21期9-12,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81401683)
南通大学高等教育研究课题(2017GJ015)
南通大学医学院大学生创新训练计划项目(yxy201610)
文摘
目的构建并鉴定pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3及pc DNA3.1-Smad4真核表达质粒,探讨Smad在小鼠T淋巴瘤细胞(EL4)中能否稳定表达。方法以EL4细胞c DNA为模板,PCR法获取转录因子Smad2、Smad3、Smad4 mRNA CDS区即目的基因片段;构建含有目的基因的T载体p MD19-T-Smad2、p MD19-T-Smad3、p MD19-TSmad4;用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pc DNA3.1载体、p MD19-T-Smad2,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切pc DNA3.1载体、p MD19-T-Smad3及p MD19-T-Smad4,T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;通过PCR、双酶切及DNA测序等方法鉴定重组质粒。将构建好的pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA 3.1-Smad4电转入EL4细胞,72 h后用Western blotting法检测EL4细胞中目的蛋白的表达。结果 PCR和双酶切结果均提示重组质粒pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA3.1-Smad4构建成功;测序结果确定插入片段无突变,序列完全正确。重组质粒pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3、pc DNA3.1-Smad4转入EL4细胞后上调目的蛋白Smad2、Smad3、Smad4蛋白的表达。结论成功构建pc DNA3.1-Smad2、pc DNA3.1-Smad3和pc DNA3.1-Smad4真核表达质粒;将Smad真核表达质粒成功转染入EL4细胞,诱导细胞内目的蛋白高表达。
关键词
T淋巴瘤细胞
SMAD蛋白
真核表达质粒
Keywords
T-lymphoma cells
Smad protein
eukaryotic expression plasmid
分类号
R733.4 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
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1
Smad真核表达质粒构建及其在小鼠T淋巴瘤细胞中的表达
王婧帆
季然
李鑫宇
陈金铃
《山东医药》
CAS
2018
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