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生物制品中牛病毒性腹泻病毒RT-PCR及套式RT-PCR检测方法的建立及应用
被引量：
6
1
作者
顾蓓蓓
王妍鳕
+2 位作者
李双洁
卢劲晔
苗晋锋
《江苏农业科学》
北大核心
2017年第8期30-32,共3页
为建立生物制品中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的检测方法,根据Gen Bank公布的BVDV序列,分别设计了普通PCR和套式PCR的特异性引物,建立了检测BVDV的普通PCR和套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以快速检测出生物制品中的BVDV污染,为生...
为建立生物制品中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的检测方法,根据Gen Bank公布的BVDV序列,分别设计了普通PCR和套式PCR的特异性引物,建立了检测BVDV的普通PCR和套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以快速检测出生物制品中的BVDV污染,为生物制品中BVDV的快速、低含量检测提供了简单快速的检测方法。
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关键词
牛血清
疫苗
牛病毒性腹泻病毒
套式RT-PCR
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职称材料
利用CRISPR/Cas9系统构建SBNO2基因敲除细胞系及其功能研究
被引量：
3
2
作者
王妍鳕
任亭亭
+1 位作者
孙跃峰
刘磊
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2021年第1期22-28,共7页
【目的】草莓缺口同源物2(Strawberry Notch Homolog 2,SBNO2)是参与炎症反应的重要基因之一,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除BHK-21细胞中SBNO2基因,初步探索SBNO2基因敲除后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响.【方法】首先应用Wester...
【目的】草莓缺口同源物2(Strawberry Notch Homolog 2,SBNO2)是参与炎症反应的重要基因之一,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除BHK-21细胞中SBNO2基因,初步探索SBNO2基因敲除后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响.【方法】首先应用Western Blot方法检测FMDV感染的BHK-21细胞中SBNO2的表达情况.然后根据SBNO2基因设计三组sgRNA,分别插入pSpCas9-puro-2A载体,构建CRISPR/Cas9-SBNO2-sgRNA重组质粒,将重组质粒转染BHK-21细胞.通过扩增基因组SBNO2序列进行测序和Western Blot验证经嘌呤霉素筛选的细胞系中SBNO2基因的敲除情况.最终利用BHK-21-SBNO2基因敲除细胞系检测其对FMDV复制的影响.【结果】sgRNA成功插入pSpCas9-puro-2A载体,Western Blot验证敲除细胞系中SBNO2的蛋白表达下调;扩增SBNO2基因序列的测序结果表明在该基因编辑位点产生移码突变.敲除细胞系感染FMDV后,qRT-PCR结果显示FMDV结构蛋白VP1表达水平显著上调.【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功获得了BHK-21-SBNO2敲除细胞系,并发现SBNO2基因具有抑制FMDV复制的作用,为后续研究SBNO2基因作用于FMDV复制的分子机制奠定了基础.
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关键词
CRISPR/Cas9技术
口蹄疫病毒
SBNO2基因
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职称材料
题名
生物制品中牛病毒性腹泻病毒RT-PCR及套式RT-PCR检测方法的建立及应用
被引量：
6
1
作者
顾蓓蓓
王妍鳕
李双洁
卢劲晔
苗晋锋
机构
泰州出入境检验检疫局
江苏农牧科技职业学院
南京农业大学动物医学院
出处
《江苏农业科学》
北大核心
2017年第8期30-32,共3页
基金
江苏出入境检验检疫局科研计划(编号:2016KJ37)
文摘
为建立生物制品中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的检测方法,根据Gen Bank公布的BVDV序列,分别设计了普通PCR和套式PCR的特异性引物,建立了检测BVDV的普通PCR和套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以快速检测出生物制品中的BVDV污染,为生物制品中BVDV的快速、低含量检测提供了简单快速的检测方法。
关键词
牛血清
疫苗
牛病毒性腹泻病毒
套式RT-PCR
分类号
R914 [医药卫生—药物化学]
S858.235.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
利用CRISPR/Cas9系统构建SBNO2基因敲除细胞系及其功能研究
被引量：
3
2
作者
王妍鳕
任亭亭
孙跃峰
刘磊
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2021年第1期22-28,共7页
基金
中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费项目(1610312016010).
文摘
【目的】草莓缺口同源物2(Strawberry Notch Homolog 2,SBNO2)是参与炎症反应的重要基因之一,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除BHK-21细胞中SBNO2基因,初步探索SBNO2基因敲除后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响.【方法】首先应用Western Blot方法检测FMDV感染的BHK-21细胞中SBNO2的表达情况.然后根据SBNO2基因设计三组sgRNA,分别插入pSpCas9-puro-2A载体,构建CRISPR/Cas9-SBNO2-sgRNA重组质粒,将重组质粒转染BHK-21细胞.通过扩增基因组SBNO2序列进行测序和Western Blot验证经嘌呤霉素筛选的细胞系中SBNO2基因的敲除情况.最终利用BHK-21-SBNO2基因敲除细胞系检测其对FMDV复制的影响.【结果】sgRNA成功插入pSpCas9-puro-2A载体,Western Blot验证敲除细胞系中SBNO2的蛋白表达下调;扩增SBNO2基因序列的测序结果表明在该基因编辑位点产生移码突变.敲除细胞系感染FMDV后,qRT-PCR结果显示FMDV结构蛋白VP1表达水平显著上调.【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功获得了BHK-21-SBNO2敲除细胞系,并发现SBNO2基因具有抑制FMDV复制的作用,为后续研究SBNO2基因作用于FMDV复制的分子机制奠定了基础.
关键词
CRISPR/Cas9技术
口蹄疫病毒
SBNO2基因
Keywords
CRISPR/Cas9
FMDV
SBNO2 gene
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
生物制品中牛病毒性腹泻病毒RT-PCR及套式RT-PCR检测方法的建立及应用
顾蓓蓓
王妍鳕
李双洁
卢劲晔
苗晋锋
《江苏农业科学》
北大核心
2017
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用CRISPR/Cas9系统构建SBNO2基因敲除细胞系及其功能研究
王妍鳕
任亭亭
孙跃峰
刘磊
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2021
3
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