猪瘟单抗诊断试剂的生产与推广应用 被引量：6

1

作者 王在时 丘惠深 廖国安 《中国兽药杂志》 北大核心 1995年第4期22-26,共5页

猪瘟单抗诊断试剂的生产与推广应用王在时，丘惠深，廖国安（中国兽药监察所北京，１０００８１）猪瘟是由瘟病毒属中猪瘟病毒引起的猪的一种烈性传染病，在世界许多国家时有爆发和流行，对养猪业造成巨大的经济损失。由于瘟病毒属存在... 猪瘟单抗诊断试剂的生产与推广应用王在时，丘惠深，廖国安（中国兽药监察所北京，１０００８１）猪瘟是由瘟病毒属中猪瘟病毒引起的猪的一种烈性传染病，在世界许多国家时有爆发和流行，对养猪业造成巨大的经济损失。由于瘟病毒属存在共同的抗原性，使传统的血清学诊断方... 展开更多

关键词 猪病 猪瘟 单抗诊断试剂 推广

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猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究 被引量：2

2

作者 王在时 丘惠深 +3 位作者 郎洪武 李博 王琴 赵耘 《中国兽药杂志》 2001年第1期1-3,共3页

从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1～ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2～ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察... 从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1～ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2～ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察均可清晰地见到直径为 2 5～ 70 nm,略呈圆形的病毒颗粒 ,具有较完整的囊膜和纤突结构。从 9株野毒中选取 5株经猪瘟阴性猪各传 3～ 4代 ,测其毒力、病原性、致死性 ,结果表明 :各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这 5株野毒做免疫保护相关性试验 ,结果证明 :攻毒后的疫苗接种猪 1 0 0 %保护 ,而攻毒对照猪 1 0 0 %死亡 ,且对照猪在攻毒 1周后便出现猪瘟野毒感染 ,而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒细胞活疫苗分别接种不同妊娠期的怀孕母猪 ,从母猪所产 0～ 1 4日仔猪体内均未分离到猪瘟兔化弱毒 ,表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及 1 982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究 ,结果表明 :猪瘟病毒可分为 2个基因组 6个基因亚组 ,HCV- 0 2、0 3、0 6、0 7等 4个野毒株与国内的 C株、石门强毒株、国外的 C株、日本 GPE株、ALD株、意? 展开更多

关键词 猪瘟病毒 野外分离株野毒 兔化弱毒 基因差异 疫苗株

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畜禽疾病防治中免疫失败的原因及预防措施探讨 被引量：10

3

作者 王在时 《中国兽药杂志》 2002年第4期51-54,共4页

为了解决畜禽疾病免疫防治中的关键问题,提高畜禽疾病防治水平,分析了畜禽疾病防治中造成免疫失败的原因,介绍了主要畜禽疾病的研究进展,探讨了预防免疫失败的主要措施。

关键词 疾病防治 免疫失败 原因 预防措施 畜禽疾病 免疫 防治 防疫

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菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验 被引量：2

4

作者 王在时 《中国兽药杂志》 北大核心 1996年第1期27-29,共3页

菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验王在时（中国兽药监察所北京，１０００８１）受山东曲阜圣亚兽药有限公司和北京中龙生物科技总公司的委托，为检验两公司联合出品的菌毒王消毒剂对猪细小病毒（简称ＰＰＶ）和猪瘟病毒（... 菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验王在时（中国兽药监察所北京，１０００８１）受山东曲阜圣亚兽药有限公司和北京中龙生物科技总公司的委托，为检验两公司联合出品的菌毒王消毒剂对猪细小病毒（简称ＰＰＶ）和猪瘟病毒（简称ＨＣＶ）的灭活效果，根据农业部... 展开更多

关键词 猪病 猪瘟 细小病毒 菌毒王消毒剂 消毒剂

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猪瘟病毒持续感染对母猪繁殖性能及仔猪猪瘟疫苗免疫效力的影响 被引量：27

5

作者 宁宜宝 王琴 +5 位作者 丘惠深 张广川 宋立 赵耘 王在时 沈青春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期449-453,共5页

利用来源于同一猪场的2头猪瘟病毒(HCV)持续感染的带毒母猪及所产35头仔猪(包括13头死胎)和6头阴性对照猪,观察母猪的胎儿发育成活状况、仔猪HCV带毒率及HCV垂直传播对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)免疫效力的干扰作用,同时进行水平传播... 利用来源于同一猪场的2头猪瘟病毒(HCV)持续感染的带毒母猪及所产35头仔猪(包括13头死胎)和6头阴性对照猪,观察母猪的胎儿发育成活状况、仔猪HCV带毒率及HCV垂直传播对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)免疫效力的干扰作用,同时进行水平传播试验和观察HCV持续感染对母猪繁殖功能的影响。结果表明:HCV持续感染对其中1头母猪的胎儿发育和成活有明显影响,而对另1头母猪的胎儿发育没有明显影响;HCV持续感染母猪可经过胎盘垂直传播病毒给仔猪,传播率达45%～86%;吃初乳和接种HCLV不能阻止带毒仔猪的死亡,9头带毒仔猪在45d内死亡4头;免疫HCLV不能使带毒仔猪产生免疫保护力,5头猪在强毒攻击后死亡4头;HCV垂直传播的带毒猪可发生水平传播,并引起3/4感染猪死亡;HCV持续感染可引起母猪生殖系统病理变化,导致繁殖障碍。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 持续感染 母猪 繁殖性能 仔猪成活率 疫苗 免疫效力

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畜禽疾病防治中免疫失败的原因及预防措施探讨(续)

6

作者 王在时 《中国兽药杂志》 2002年第5期46-48,45,共4页

为了解决畜禽疾病免疫防治中的关键问题,提高畜禽疾病防治水平,本文分析了畜禽疾病防治中免疫失败的原因,介绍了主要畜禽疾病的研究进展,探讨了预防免疫失败的主要措施。

关键词 畜禽疾病 免疫 预防措施 失败原因

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猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列的遗传进化关系的研究 被引量：6

7

作者 赵耘 王在时 +2 位作者 王琴 李博 丘惠深 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期157-164,共8页

本研究利用RT-PCR及测序获得了16株猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列。利用DNAStar软件对其6株已发表的猪瘟病毒毒株序列进行了比较和分析,构建了猪瘟病毒遗传发生树。结果可以看出所绘制的遗传发生树分为2个组群,每个组群分为3个亚组群。1... 本研究利用RT-PCR及测序获得了16株猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列。利用DNAStar软件对其6株已发表的猪瘟病毒毒株序列进行了比较和分析,构建了猪瘟病毒遗传发生树。结果可以看出所绘制的遗传发生树分为2个组群,每个组群分为3个亚组群。13株猪瘟流行毒在2个组群中均有分布,猪瘟石门系强毒和C株属于同一组群、同一亚组群。70～80年代分离的4株猪瘟病毒75％和Alfort株（法国）在同一组群,25％和Brescia株（意大利）是同一组群,90年代分离的9株猪瘟病毒33.3％和Alfort株（法国）在同一组群,66.7％和Brescia株（意大利）是同一组群。13株猪瘟流行毒株中7株和C株在同一组群,其中70～80年代的1株,90年代的6株。其余的6株猪瘟流行毒株均在另一组群。不同地区及不同材料C-株疫苗的E2基因的核苷酸序列有一定的差异,GPE株与中国的C株有较近的遗传进化关系,而法国的Thiverval株则与中国C株的遗传进化关系较远。本研究的结果对了解我国猪瘟分子流行病学的特点具有重要的意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 遗传发生树 基因组群 E2基因 核苷酸序列 遗传进化关系

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猪瘟病毒低毒力毒株FJFQ株的分离鉴定 被引量：4

8

作者 赵耘 宁宜宝 +5 位作者 王在时 王琴 宋立 张广川 沈青春 秦玉明 《动物医学进展》 CSCD 2005年第3期67-71,共5页

从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同... 从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.9%~87.9%,77.7%~86.6%,与Alfort 株同属于基因二群。经本动物传3代均不表现明显的临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后以此分离毒作强攻进行免疫保护相关实验,结果免疫组猪在攻毒前及攻毒后扁桃体 HCFA检测均为阴性,对照组猪扁桃体HCFA于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到试验结束。用分离株免疫本动物后再攻石门毒, 2 头试验猪中 1 头死亡,1头出现临床症状。初步说明,所分离的病毒为猪瘟病毒(命名为CSFV- FJFQ株),可能是一株低毒力毒株,且其免疫原性不好。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 毒株 毒力 分离鉴定 CSFV 毒价 抗原编码区 扁桃体 免疫后 对照组

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猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验 被引量：22

9

作者 丘惠深 郎洪武 王在时 《中国兽药杂志》 北大核心 1997年第3期1-3,共3页

２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体... ２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查，各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒，而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒，据此。 展开更多

关键词 猪病 疫苗 猪瘟野毒 免疫

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我国兽药标准物质供应现状分析与建议 被引量：6

10

作者 张秀英 陆连寿 +5 位作者 李翠 戴志红 王在时 徐肖君 温芳 蒋卉 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第1期57-59,共3页

根据《兽药管理条例》规定明确了兽药标准物质的范畴,全面分析总结了我国兽药行业对兽药标准物质的认识现状、兽药标准物质的供应和合作研制情况,并提出供应品种的缺口是目前存在的主要问题。为全面保证兽药标准物质的供应,建议下一步... 根据《兽药管理条例》规定明确了兽药标准物质的范畴,全面分析总结了我国兽药行业对兽药标准物质的认识现状、兽药标准物质的供应和合作研制情况,并提出供应品种的缺口是目前存在的主要问题。为全面保证兽药标准物质的供应,建议下一步应把好兽药注册的源头关,加强标准物质的研制和行业内的协作。 展开更多

关键词 兽药标准物质 供应 研制 措施

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动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况 被引量：8

11

作者 王晓卉 李翠 +4 位作者 蒋卉 张秀英 温芳 陆连寿 王在时 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第4期60-64,共5页

介绍了动物试验替代方法的含义及其在国内外的发展情况,并从实验动物替代法、血清学替代法和疫苗抗原定量法三方面重点介绍了动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用情况、优势和意义,以期为兽用疫苗检验替代方法研究提供参考。

关键词 动物试验替代方法 兽用疫苗检验

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用间接免疫荧光检测方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力的研究 被引量：8

12

作者 戴志红 蒋卉 +3 位作者 李翠 王晓卉 张秀英 王在时 《中国兽药杂志》 2014年第1期34-37,共4页

为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体(兔源)为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法(IFA)。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测... 为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体(兔源)为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法(IFA)。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测伪狂犬病毒、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻/粘膜病毒接种的RK细胞均为阴性。CSFV兔化弱毒株和活疫苗的兔体感染量(RID)用兔体测定,半数组织感染量(TCID50)用IFA测定,拟合RID与TCID50的线性回归方程,确定1RID/mL=(TCID50/0.1mL+200)/12。 展开更多

关键词 猪瘟疫苗 效力 兔体感染量 间接免疫荧光

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猪瘟病毒E2基因的克隆与鉴定 被引量：1

13

作者 王琴 郎洪武 +2 位作者 王在时 丘惠深 李博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期548-555,共8页

根据猪瘟病毒Brescia株全基因序列设计合成特异性引物对P1/P2对 ,采用异硫氰酸胍一步法 (略加修改 ) ,从PK15细胞培养物中提取石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3株及野毒 0 7株猪瘟病毒的总RNA。应用RT PCR方法成功地扩增出E2全基因组约... 根据猪瘟病毒Brescia株全基因序列设计合成特异性引物对P1/P2对 ,采用异硫氰酸胍一步法 (略加修改 ) ,从PK15细胞培养物中提取石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3株及野毒 0 7株猪瘟病毒的总RNA。应用RT PCR方法成功地扩增出E2全基因组约 12 73bp的cDNA片断 ,经电泳证明其大小与推测相符。分别将石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3株及野毒 0 7株的E2基因片段克隆到 pGEM -T载体质粒 ,通过对这 4个重组质粒的EcoRI酶切鉴定、直接与套式PCR扩增 ,并对E2主要抗原区域进行了 2 2 4bp的序列测定 ,表明E2全基因克隆成功 。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 RT-PCR 克隆

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猪瘟抗体检测技术的研究现状及发展趋势 被引量：6

14

作者 孙海燕 王在时 +4 位作者 戴志红 关孚时 李翠 孟画诗 江波 《中国兽药杂志》 2009年第5期40-43,共4页

简要叙述了FAVN、NPLA、ELISA、兔体中和等猪瘟抗体检测技术的原理及其应用现状,并通过对猪瘟抗体检测技术发展趋势的介绍,显示了猪瘟参考血清等相关标准物质在猪瘟抗体检测技术应用与发展中的价值及其今后的发展前景。

关键词 猪瘟抗体 FAVN ELISA 兔体中和试验 标准物质

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猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验 被引量：3

15

作者 蒋卉 李翠 +1 位作者 戴志红 王在时 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第6期6-8,共3页

目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%... 目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%,在敏感性和特异性上整体优于间接ELISA试剂盒。 展开更多

关键词 猪瘟 抗体 ELISA

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高效液相色谱法测定那西肽的纯度 被引量：7

16

作者 张秀英 陆连寿 +4 位作者 温芳 李翠 戴志红 蒋卉 王在时 《中国兽药杂志》 2013年第7期22-24,共3页

采用高效液相色谱法测定那西肽的纯度。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250 mm×4.6 mm,5μm),pH 5.6磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇(54∶43∶3)为流动相;流速为0.7 mL/min;测定波长为330 nm。结果表明,在10.5～94.9μg/mL浓度范围内峰面... 采用高效液相色谱法测定那西肽的纯度。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250 mm×4.6 mm,5μm),pH 5.6磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇(54∶43∶3)为流动相;流速为0.7 mL/min;测定波长为330 nm。结果表明,在10.5～94.9μg/mL浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,定量限和检测限分别为0.25μg/mL和0.12μg/mL。该方法简便、快速、专属性强,适用于那西肽的纯度测定。 展开更多

关键词 那西肽 高效液相色谱 纯度

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猪瘟野毒不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析 被引量：1

17

作者 赵耘 宁宜宝 +4 位作者 王在时 王琴 张广川 宋立 丘惠深 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期56-60,共5页

利用 RT-PCR及序列测定对 5株猪瘟野毒 1 4个不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区序列进行了分析。结果表明每个野毒的不同代次毒株核苷酸及氨基酸序列均呈现较高的保守性 ,核苷酸及氨基酸序列均无变化 ,核苷酸及氨基酸同源性均为 1 0 0 ... 利用 RT-PCR及序列测定对 5株猪瘟野毒 1 4个不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区序列进行了分析。结果表明每个野毒的不同代次毒株核苷酸及氨基酸序列均呈现较高的保守性 ,核苷酸及氨基酸序列均无变化 ,核苷酸及氨基酸同源性均为 1 0 0 %。与 0 2号野毒相比 ,其他 4株野毒核苷酸及氨基酸同源性分别为 82 .0 %～ 99.5%、84.1 %～ 98.6 %。遗传衍化分析结果表明所有毒株被分成 2个基因组 ,每个基因组又分成 2个基因亚组。 0 3、0 5和 2 2号毒株位于第一基因组 ,0 2、0 6号毒株位于第二基因组。每一个毒株的不同代次毒株均位于同一基因组、同一基因亚组。 展开更多

关键词 猪瘟野毒 代次 E2基因 抗原编码区 序列分析 同源性 变异 遗传稳定性

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改进试管凝集试验法检测布鲁氏菌病抗体 被引量：6

18

作者 李翠 关孚时 +4 位作者 戴志红 蒋卉 温芳 陆连寿 王在时 《中国兽药杂志》 2012年第2期2-4,共3页

为证实改进的试管凝集试验(SAT)的使用价值,分别用微量试管凝集试验(MSAT)和SAT以国际标准血清为参比检测6份牛布鲁氏菌病阳性血清的抗体效价。结果表明:MSAT和SAT试验结果一致,而且MSAT具有稀释方法更简便、精确,省时省力,可节约血清... 为证实改进的试管凝集试验(SAT)的使用价值,分别用微量试管凝集试验(MSAT)和SAT以国际标准血清为参比检测6份牛布鲁氏菌病阳性血清的抗体效价。结果表明:MSAT和SAT试验结果一致,而且MSAT具有稀释方法更简便、精确,省时省力,可节约血清、抗原等试验原材料,试验结果容易判定,重现性良好等优越性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 试管凝集试验 微量试管凝集试验

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鸡新城疫高免血清的制备 被引量：9

19

作者 李翠 王在时 +3 位作者 关孚时 李俊平 冯杉 徐璐 《中国兽药杂志》 2008年第2期30-31,共2页

采用鸡新城疫Lasota株病毒(NDV)和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但... 采用鸡新城疫Lasota株病毒(NDV)和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但是NDV两次免疫后只能使抗体水平增长到10 log2,而再以灭活疫苗免疫可使抗体水平达到14 log2。 展开更多

关键词 鸡新城疫 高免血清

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国家那西肽标准品的研制与建立 被引量：5

20

作者 张秀英 陆连寿 +3 位作者 温芳 李翠 蒋卉 王在时 《中国兽药杂志》 2014年第12期50-53,共4页

阐述了首批国家那西肽标准品的研制与建立。那西肽标准品为黄绿色粉末,质谱法测定分子量为1220.15,用两种高效液相色谱法测定平均纯度为94.26%,干燥失重和炽灼残渣的结果为3.97%和2.00%,用质量平衡法定值含量为928 u/mg。

关键词 那西肽标准品 纯度 含量

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