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鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达 被引量：5
1
作者 王君伟 李勐 +3 位作者 马波 布日额 刘宝全 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1... 本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1株 NS1基因全长 1884 bp,编码 6 2 7个氨基酸 ,与国外已发表的 B株核苷酸序列同源性为 98.15 %。同时将该目的基因正向插入到 GST融合蛋白原核表达载体 PGEX- 6 P- 1的 Bam H 多克隆位点 ,构建了 GPV NS1的原核表达载体 ,成功的表达了约 97KD的 NS1融合蛋白。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 NS1基因 基因克隆 基因表达 原核表达 小鹅瘟
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吴茱萸中吴茱萸次碱提取工艺及响应面分析法的优化 被引量：5
2
作者 王君伟 李小定 +1 位作者 吴媛瑾 刘元华 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第1期175-178,共4页
通过响应面分析法对吴茱萸中吴茱萸次碱的提取工艺进行优化,利用响应面试验设计乙醇体积分数、提取时间、原料目数、溶剂倍数4因素对吴茱萸次碱提取率的影响。结果表明,乙醇体积分数是主要的影响因子。吴茱萸次碱的最佳提取条件是原料... 通过响应面分析法对吴茱萸中吴茱萸次碱的提取工艺进行优化,利用响应面试验设计乙醇体积分数、提取时间、原料目数、溶剂倍数4因素对吴茱萸次碱提取率的影响。结果表明,乙醇体积分数是主要的影响因子。吴茱萸次碱的最佳提取条件是原料目数为40、提取时间为3.0 h、溶剂倍数为31、乙醇体积分数为72%,吴茱萸次碱的最大提取率为8.90 mg·g-1。 展开更多
关键词 吴茱萸 吴茱萸次碱 响应面分析法
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外源重组蛋白制备鹅免疫球蛋白轻链特异性多克隆抗体 被引量：2
3
作者 王君伟 郭永丽 高明春 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期60-63,共4页
采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定... 采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定分析。结果表明,rGoCL在大肠杆菌中获得可溶性表达,可代替天然分离的轻链作为免疫原制备轻链特异性抗体,多抗效价为1 204 800。研究为鹅免疫球蛋白的蛋白结构、功能分析以及鹅免疫诊断试剂研发奠定基础。 展开更多
关键词 鹅 免疫球蛋白 轻链恒定区 重组蛋白 多克隆抗体
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鸡法氏囊病病毒在人工感染雏鸡体内的分布和带毒期 被引量：4
4
作者 王君伟 《中国畜禽传染病》 CSCD 1989年第1期5-7,共3页
我们从免疫鸡卵卵黄提取免疫球蛋白制备 IBD荧光抗体,得到了特异性强、灵敏性高、基本上无非特异性反应的诊断制剂。用 CEF 细胞培养可直接(?)以 PBG98株1BDV 弱毒人工感染3日龄雏鸡的器官组织中分离到了病毒。本试验应用荧光抗体试验和... 我们从免疫鸡卵卵黄提取免疫球蛋白制备 IBD荧光抗体,得到了特异性强、灵敏性高、基本上无非特异性反应的诊断制剂。用 CEF 细胞培养可直接(?)以 PBG98株1BDV 弱毒人工感染3日龄雏鸡的器官组织中分离到了病毒。本试验应用荧光抗体试验和 CEF 细胞培养检查和分离病毒的方法证明病毒在感染后的雏鸡体内分布和持续时间如下:强毒在被感染的3日龄雏鸡体内分布于法氏囊、胸腺、肾、直肠、肺、肝等器官。以法氏囊中的病毒浓度最高,扮续时间为8日。在感染有9周龄雏鸡体内分布于法氏囊、盲肠、盲肠扁桃体、十二指肠、胸腺、哈德氏腺、脾、肾、肝等器官;肺、心脏、脑、胰脏中未检出病毒。病毒浓度以法氏囊中最高,持续时间长达9日。弱毒在被感染的3日龄雏鸡体内分布于直肠、法氏囊、胸腺、肝、脾、肺。病毒在直肠中的浓度略高于法氏囊,持续时间亦较长,亦为8日。 展开更多
关键词 鸡法氏囊病 病毒 人工感染 雏鸡 鸡
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抗牛轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
5
作者 王君伟 宣世纬 +4 位作者 刘宝全 李昌仁 李一经 李海滨 王红 《东北农学院学报》 CSCD 1992年第3期261-264,共4页
以从黑龙江省腹泻犊牛粪便中分离的牛轮状病毒(bovine rotavirus)为抗原,免疫6～8周龄BALB/_c小鼠,取血清抗体阳性小鼠的脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。用ELISA间接法检测抗体,通过有限稀释法,克隆出一株分泌抗牛轮状病毒单克隆抗体... 以从黑龙江省腹泻犊牛粪便中分离的牛轮状病毒(bovine rotavirus)为抗原,免疫6～8周龄BALB/_c小鼠,取血清抗体阳性小鼠的脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。用ELISA间接法检测抗体,通过有限稀释法,克隆出一株分泌抗牛轮状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,此杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为IgM,轻链为K链。通过连续传代证明,此杂交瘤细胞株具有稳定分泌单克隆抗体的性质。杂交瘤细胞诱生BALB/_c小鼠腹水的单克隆抗体滴度可达1:10000以上。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定 被引量：17
6
作者 胡森 郑孝辉 +8 位作者 王加兰 张倩 刘文兴 王喜军 乔祖建 刘林涛 高红霞 王君伟 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期583-586,共4页
为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和west... 为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达。M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。 展开更多
关键词 重组布氏杆菌 M5—90 bp26基因 突变株
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H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究 被引量：16
7
作者 田国彬 曾显营 +7 位作者 钟功勋 姜永萍 李雁冰 施建忠 毛胜刚 冯菊艳 王君伟 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期717-720,共4页
本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血... 本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。 展开更多
关键词 禽流感 H5N1 变异株 灭活疫苗
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鹅细小病毒非结构蛋白和结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定 被引量：15
8
作者 于天飞 仇铮 +3 位作者 马波 袁率珍 李俚 王君伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期757-763,共7页
鹅细小病毒是小鹅瘟的病原体,其基因组含有2个主要开放阅读框（ORF）,分别编码非结构蛋白（NS）和结构蛋白（VP）。为了对这2种蛋白进行抗原表位作图,设计了34个覆盖非结构蛋白NS和结构蛋白VP的50-60个氨基酸残基的重叠短肽,并进行了融... 鹅细小病毒是小鹅瘟的病原体,其基因组含有2个主要开放阅读框（ORF）,分别编码非结构蛋白（NS）和结构蛋白（VP）。为了对这2种蛋白进行抗原表位作图,设计了34个覆盖非结构蛋白NS和结构蛋白VP的50-60个氨基酸残基的重叠短肽,并进行了融合表达。用攻毒10周龄鹅血清对这34个融合蛋白进行蛋白质印迹分析,结果鉴定出NS蛋白线性抗原表位位于C末端的453-627氨基酸区域;VP蛋白线性抗原表位位于35—198、423—491、531—595、616—669和678—732氨基酸区域。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 非结构蛋白 结构蛋白 线性抗原表位
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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量：16
9
作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物 间接-ELISA Dot—ELISA
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牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立 被引量：12
10
作者 贾莹 李岩 +4 位作者 尹鑫 温凯 刘华 张文龙 王君伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1120-1125,共6页
为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的... 为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白(r-BVDV-EX6N)作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好,与2种商品化试剂盒的符合率分别为96.05%和78.95%。试验结果表明建立的ELISA方法可用于BVDV NS3蛋白抗体的检测。 展开更多
关键词 BVDV NS3蛋白 表位串联 间接ELISA
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鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析 被引量：19
11
作者 秘晶玮 王君伟 +1 位作者 许丽娜 李洪涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期359-362,共4页
从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_... 从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN_α93.72%I、FN_γ93.29%。这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅 干扰素(IFN) 基因-克隆 序列分析
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牛腐蹄病坏死梭杆菌H05菌株白细胞毒素基因的原核表达及其免疫活性分析 被引量：10
12
作者 郭东华 王君伟 +4 位作者 孙玉国 吕占军 张建涛 李林 王洪斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期435-438,共4页
参考羊腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素蛋白的抗原表位基因序列,利用DNAStar软件预测了牛腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素蛋白的5个抗原表位区,设计5对在上游和下游含有特异性限制性内切酶的引物,以牛腐蹄病坏死梭杆菌H05菌株白细胞毒素基因阳... 参考羊腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素蛋白的抗原表位基因序列,利用DNAStar软件预测了牛腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素蛋白的5个抗原表位区,设计5对在上游和下游含有特异性限制性内切酶的引物,以牛腐蹄病坏死梭杆菌H05菌株白细胞毒素基因阳性质粒pMD18-T-lkrA为模板,PCR扩增了预测的5个抗原表位区基因,分别命名为PL1、PL2、PL3、PL4和PL5,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1和pPROEX HTa后转化E.coli BL21(DE3),37℃条件下,用IPTG诱导表达,结果PL1、PL2、PL4和PL5在pGEX-6p-1中获得了表达,而PL3在pPROEX HTa中获得了表达。Westem blot试验结果表明,牛腐蹄病坏死梭杆菌H05菌株白细胞毒素蛋白5个抗原表位区的重组蛋白PL1、PL2、PL3、PL4和PL5均与坏死梭杆菌多克隆血清反应。 展开更多
关键词 牛腐蹄病 坏死梭杆菌 白细胞毒素基因 原核表达
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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量：9
13
作者 布日额 王君伟 +3 位作者 吴金花 李勐 马广鹏 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第10期3-6,共4页
根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并... 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 展开更多
关键词 鹅 细小病毒 VP1 VP3 非重叠序列 克隆 原核表达 基因组 核苷酸 结构蛋白 大肠杆菌
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猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达 被引量：6
14
作者 唐丽杰 李一经 +2 位作者 贾永清 王君伟 刘宝全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期611-614,共4页
以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 ... 以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。 展开更多
关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 核衣壳 克隆 蛋白基因 基因表达
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鹅细小病毒主要结构蛋白VP3基因的克隆与序列分析 被引量：10
15
作者 田丽红 贾永清 +1 位作者 王君伟 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期418-420,415,共4页
将GPVH1分离株接种于 13日龄非免疫鸭胚 ,收集接毒后 3～ 7日死亡鸭胚的尿囊液。纯化病毒 ,通过PCR技术 ,从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段 ,经酶切鉴定后直接与pMD 18_T质粒载体连接 ,转化感受态大肠杆菌TG1。提取... 将GPVH1分离株接种于 13日龄非免疫鸭胚 ,收集接毒后 3～ 7日死亡鸭胚的尿囊液。纯化病毒 ,通过PCR技术 ,从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段 ,经酶切鉴定后直接与pMD 18_T质粒载体连接 ,转化感受态大肠杆菌TG1。提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后 ,对插入片段进行序列测定及分析。结果表明 :鹅细小病毒H1分离株VP3基因全长 16 0 5bp ,编码 5 34个氨基酸 ,与国外已发表的鹅细小病毒B株核苷酸序列同源性为 98.5 % ,氨基酸序列同源性为98.3% ,表明这二个毒株亲缘关系相近。 展开更多
关键词 结构蛋白 鹅细小病毒 VP3基因 序列分析 基因克隆 小鹅瘟
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奶牛子宫内膜炎治疗方法 被引量：16
16
作者 赵树臣 侯振中 +1 位作者 李培锋 王君伟 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第3期21-24,共4页
关键词 奶牛子宫内膜炎 治疗 屡配不孕 兽医产科 胎衣不下 子宫脱出 发情周期 常见病 膜损伤 分泌物
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空肠弯曲菌的致病性及致病机制研究进展 被引量：17
17
作者 翟海华 王娟 +3 位作者 王君伟 盖文燕 黄秀梅 曲志娜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期164-169,共6页
空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是引起人类腹泻的主要致病菌之一,它也是重要的食源性致病菌,可通过食物链感染给人和动物,主要引起人的发热和急性肠胃炎,进一步还可引发心内膜炎、关节炎、骨髓炎等全身性疾病。自20世纪80年代以来,... 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是引起人类腹泻的主要致病菌之一,它也是重要的食源性致病菌,可通过食物链感染给人和动物,主要引起人的发热和急性肠胃炎,进一步还可引发心内膜炎、关节炎、骨髓炎等全身性疾病。自20世纪80年代以来,空肠弯曲菌就受到国内外的普遍关注,由于该菌感染的高发生率和造成的严重危害,有研究报道称它将是"下一个沙门菌"。空肠弯曲菌的致病机制主要包括侵袭、黏附、定植以及产生毒素,这一过程中多种毒力因子参与其中,像Fla、Peb1、CadF等与吸附和定植有关,CiaB、PldA等与侵入有关,还有细胞致死性膨胀毒素、细胞紧张性毒素等外毒素和内毒素。这些毒力因子在空肠弯曲菌侵袭宿主并引起其发病的过程中相互协调发挥作用。近年来对空肠弯曲菌的毒力因子检测和它们的致病机理已经有了初步研究。论文介绍了空肠弯曲菌对人和动物的致病作用,以及与致病相关的主要毒力因子的致病作用和致病机理,为该类病原菌毒力因子功能的研究,空肠弯曲菌病防治和空肠弯曲菌的免疫机制提供参考。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 致病性 毒力因子
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鹅细小病毒不同毒株VP3基因的序列分析比较 被引量：12
18
作者 李宝臣 齐岩 +1 位作者 马波 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期430-433,共4页
分别将GPV 4个分离株通过PCR技术 ,从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段 ,并与PMD18_T质粒载体连接 ,转化到感受态大肠秆菌TG1中 ,提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后 ,对插入片段进行序列测定及分析。结果表明 :VP3基... 分别将GPV 4个分离株通过PCR技术 ,从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段 ,并与PMD18_T质粒载体连接 ,转化到感受态大肠秆菌TG1中 ,提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后 ,对插入片段进行序列测定及分析。结果表明 :VP3基因全长 16 0 5bp ,编码 5 34个氨基酸。不同毒株主要结构蛋白VP3基因同源性较高(95 .6 4 %～ 99.81% )。但强弱毒株间也存在一定差异。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因 克隆 序列分析
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用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究 被引量：14
19
作者 布日额 王君伟 +2 位作者 吴金花 孙红梅 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-105,共4页
从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交... 从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0 0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测是可行的。 展开更多
关键词 地高辛标记 核酸探针 检测技术 鹅细小病毒 GPV检测
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牛腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察 被引量：13
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作者 郭东华 王君伟 +4 位作者 孙玉国 吕占军 张建涛 李林 王洪斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期398-402,共5页
以大肠杆菌表达系统表达并纯化的牛源坏死杆菌H05菌株5个截短的重组白细胞毒素蛋白PL1(1aa～174aa)、PL2(311aa～644aa)、lktA3(1319aa～2026aa)、PL4(1960aa～2287aa)和PL5(3077aa～3241aa)为抗原分别免疫昆明系小白鼠,同时将灭活的天... 以大肠杆菌表达系统表达并纯化的牛源坏死杆菌H05菌株5个截短的重组白细胞毒素蛋白PL1(1aa～174aa)、PL2(311aa～644aa)、lktA3(1319aa～2026aa)、PL4(1960aa～2287aa)和PL5(3077aa～3241aa)为抗原分别免疫昆明系小白鼠,同时将灭活的天然坏死杆菌白细胞毒素和PBS作为免疫对照。ELISA结果显示,经4次免疫后5个重组蛋白和天然白细胞毒素均能介导小鼠产生抗白细胞毒素蛋白的特异性抗体,抗体效价分别为1∶6400、1∶12800、1∶6400、1∶12800、1∶3200和1∶800。免疫鼠活菌攻击观察结果和免疫鼠肝脏组织学变化结果一致证明,PL1、PL2、lktA3、PL4、PL5重组蛋白和天然白细胞毒素对小鼠均具有保护作用,5个重组蛋白的免疫保护作用均优于天然白细胞毒素,在5个重组蛋白中PL1、lktA3和PL4对鼠的免疫保护效果最好。 展开更多
关键词 腐蹄病 重组亚单位疫苗 免疫保护力
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