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西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
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作者 王仲发 刘晏辰 +4 位作者 闫炎 李旻娟 何玉楠 关伟军 刘文忠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2519-2530,共12页
【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰... 【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰腺间充质干细胞的生物学特性进行鉴定;利用免疫荧光试验和半定量PCR测定细胞表面标记物(CD34、CD73、CD90、CD166)的表达情况;通过绘制P4、P10、P16代细胞生长曲线及计算群体倍增时间测定细胞增殖能力;通过细胞克隆试验测定细胞克隆形成率,通过划痕试验计算细胞迁移率;对纯化后的细胞分别进行成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导分化,检测胰腺间充质干细胞多向分化能力,并通过染色体核型分析试验检测细胞的遗传稳定性。【结果】采用组织块贴壁法培养可得到胰腺间充质干细胞,且传代到第3代基本纯化。半定量PCR结果显示,表面标记物(CD73、CD90、CD166)呈阳性表达,而与造血细胞相关的表面抗原CD34呈阴性表达。西门塔尔牛胰腺间充质干细胞呈现典型的S型生长曲线,P4、P10、P16代细胞群体倍增时间分别为40.22、43.09和44.50 h,细胞克隆形成率分别为26.25%、19.00%和13.50%。划痕试验测定第3代细胞迁移率为44.44%。在体外诱导分化胰腺间充质干细胞后,结果呈现出清晰的脂滴、软骨团和钙结节。核型分析结果判定,西门塔尔牛胰腺间充质干细胞为正常二倍体核型(2n=60,XY),染色体组未发生变异。【结论】从西门塔尔牛胰腺组织分离培养的胰腺间充质干细胞能够稳定遗传,增殖能力强,且具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。研究结果可为西门塔尔牛组织修复提供新方法,为西门塔尔牛种质资源的保护和保存提供种子细胞。 展开更多
关键词 西门塔尔牛 胰腺间充质干细胞 分离培养 诱导分化
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洛岛红鸡卵黄囊源性间充质干细胞的分离培养及其分化潜能研究
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作者 闫炎 刘晏辰 +4 位作者 王仲发 李旻娟 何玉楠 关伟军 姜运良 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1252-1263,共12页
旨在体外获得并培养洛岛红鸡卵黄囊间充质干细胞(chicken yolk sac mesenchymal stem cell,cYS-MSCs),检测其体外增殖能力和生物学特性。本研究选取已孵化12天的健康洛岛红鸡受精蛋的卵黄囊进行组织贴壁培养,选择第5代cYS-MSCs进行免疫... 旨在体外获得并培养洛岛红鸡卵黄囊间充质干细胞(chicken yolk sac mesenchymal stem cell,cYS-MSCs),检测其体外增殖能力和生物学特性。本研究选取已孵化12天的健康洛岛红鸡受精蛋的卵黄囊进行组织贴壁培养,选择第5代cYS-MSCs进行免疫荧光和RT-PCR检测表面标记基因;选择第3代、第9代和第15代cYS-MSCs,每代次设置3个重复,绘制生长曲线、计算群体倍增时间和克隆形成率;通过核型分析检测遗传稳定性;选择第9代cYS-MSCs进行成脂、成软骨和成骨诱导,通过特异性染色和RT-PCR检测多向分化能力。结果,分离培养的细胞为长梭形,呈漩涡状或平行式生长;免疫荧光结果显示CD29、CD73、CD90和CD166呈阳性表达,而造血干细胞标记基因CD34和泛白细胞标记基因CD45不表达;RT-PCR结果显示CD29、CD44、CD73、CD 90和CD 166表达,而CD 34和CD 45不表达;cYS-MSCs呈“S”型增长,且第3代的群体倍增时间极显著低于第9代(P<0.001),第9代群体倍增时间极显著低于第15代(P<0.001),第3代的克隆形成率极显著高于第9代(P<0.001),第9代极显著高于第15代(P<0.001);染色体核型分析结果显示经过连续传代的cYS-MSCs染色体数量、形态正常(2n=78,zz);诱导分化的cYS-MSCs,特异性染色和RT-PCR结果显示cYS-MSCs可被成功诱导分化为成脂肪细胞、成软骨细胞和成骨细胞。综上,本研究成功从鸡胚卵黄囊中分离获得MSCs,且能在体外培养增殖,并且分离的cYS-MSCs具有MSCs的生物学特性和多向分化潜能,其多向分化潜能预示细胞移植的前景,可为洛岛红鸡种质资源保存提供依据和潜在可利用资源。 展开更多
关键词 卵黄囊 间充质干细胞 洛岛红鸡 生物学特性 分化潜能
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深基坑支护技术初探
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作者 王仲发 《建筑技术开发》 2003年第2期21-22,共2页
建筑物密集的大中城市建造高层建筑,极少采用放坡的方法开挖基坑,而需要设置支护结构.本文列举了几种常用的深基坑支护型式,并通过对其承受外界作用的分析,简介了支护结构的可靠度分析.
关键词 深基坑 支护结构 支护型式 可靠度 建筑物 高层建筑
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水工钢结构防腐蚀技术措施综述 被引量:1
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作者 李东祥 王仲发 《山东水利科技》 1992年第4期25-28,共4页
关键词 钢结构 腐蚀 水工结构 防治
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