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丙型肝炎病毒RNA聚合酶在HepG-2细胞的稳定表达及活性分析
被引量：
2
1
作者
熊舒珺
吴晓玉
孔令保
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2010年第3期355-357,共3页
目的:探讨丙型肝炎病毒RNA聚合酶(NS5B)在肝癌细胞株HepG-2的稳定表达与活性。方法:ScaⅠ酶切含有丙型肝炎病毒NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,线性化的pcDNA-5B通过脂质体介导转染HepG-2细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、...
目的:探讨丙型肝炎病毒RNA聚合酶(NS5B)在肝癌细胞株HepG-2的稳定表达与活性。方法:ScaⅠ酶切含有丙型肝炎病毒NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,线性化的pcDNA-5B通过脂质体介导转染HepG-2细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验鉴定稳定表达NS5B蛋白的RNA聚合酶活性。结果:NS5B基因可整合到转染的HepG-2细胞的染色体上,并能有效转录和表达。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验表明稳定表达的NS5B在体外和细胞内均具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论:肝细胞HepG-2可以稳定表达丙型肝炎病毒NS5B,且具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。
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关键词
肝炎病毒属
RNA聚合酶
HEPG-2细胞
表达
活性
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职称材料
持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定
被引量：
2
2
作者
孔令保
吴晓玉
+3 位作者
李昆太
徐波
刘好桔
熊舒珺
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期717-722,共6页
HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂...
HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂质体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定,证实获得持续表达NS5B的Bel-7402细胞系。体外复制试验和荧光素酶试验表明:Bel-7402细胞表达的NS5B蛋白有体外和细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。持续表达有聚合酶活性的HCV NS5B的Bel-7402细胞系的建立为进一步研究NS5B催化的HCV复制机制和NS5B抑制剂的筛选奠定基础。
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关键词
HCV
NS5B
BEL-7402
持续表达
活性
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职称材料
题名
丙型肝炎病毒RNA聚合酶在HepG-2细胞的稳定表达及活性分析
被引量：
2
1
作者
熊舒珺
吴晓玉
孔令保
机构
江西农业大学生物科学与工程学院发酵应用技术南昌市重点实验室
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2010年第3期355-357,共3页
基金
江西农业大学博士基金资助项目(编号:2727)
文摘
目的:探讨丙型肝炎病毒RNA聚合酶(NS5B)在肝癌细胞株HepG-2的稳定表达与活性。方法:ScaⅠ酶切含有丙型肝炎病毒NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,线性化的pcDNA-5B通过脂质体介导转染HepG-2细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验鉴定稳定表达NS5B蛋白的RNA聚合酶活性。结果:NS5B基因可整合到转染的HepG-2细胞的染色体上,并能有效转录和表达。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验表明稳定表达的NS5B在体外和细胞内均具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论:肝细胞HepG-2可以稳定表达丙型肝炎病毒NS5B,且具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。
关键词
肝炎病毒属
RNA聚合酶
HEPG-2细胞
表达
活性
Keywords
Hepacivims
RNA polymerase
HepG-2 cells
Expression
Activity
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定
被引量：
2
2
作者
孔令保
吴晓玉
李昆太
徐波
刘好桔
熊舒珺
机构
江西农业大学生物科学与工程学院
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期717-722,共6页
基金
江西农业大学博士基金项目(2727)
文摘
HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂质体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定,证实获得持续表达NS5B的Bel-7402细胞系。体外复制试验和荧光素酶试验表明:Bel-7402细胞表达的NS5B蛋白有体外和细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。持续表达有聚合酶活性的HCV NS5B的Bel-7402细胞系的建立为进一步研究NS5B催化的HCV复制机制和NS5B抑制剂的筛选奠定基础。
关键词
HCV
NS5B
BEL-7402
持续表达
活性
Keywords
HCV
NS5B
Bel - 7402 cells
constitutively expressing
activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
R512.63 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丙型肝炎病毒RNA聚合酶在HepG-2细胞的稳定表达及活性分析
熊舒珺
吴晓玉
孔令保
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定
孔令保
吴晓玉
李昆太
徐波
刘好桔
熊舒珺
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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