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固定化细胞酶法拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸 被引量:6
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作者 熊吉滨 刘均忠 +1 位作者 刘茜 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1560-1563,共4页
利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸.考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响.确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50... 利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸.考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响.确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50℃及底物浓度500mmol/L.10-4mol/L的Co2+和Mg2+对氨基酰化酶有显著激活作用,Cu2+和Zn2+对酶促反应有明显抑制作用.在最佳条件下,氨基酰化酶固定化细胞对N-乙酰-L-3-甲氧基丙氨酸的摩尔转化率达96%. 展开更多
关键词 氨基酰化酶 D L-3-甲氧基丙氨酸 固定化细胞 手性拆分
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乙酰鸟氨酸脱乙酰酶固定化细胞拆分D,L-缬氨酸 被引量:7
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作者 张飞 熊吉滨 +2 位作者 刘均忠 刘鹏刚 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1577-1580,共4页
报道了一种利用具有乙酰鸟氨酸脱乙酰酶活性的固定化细胞拆分D,L-缬氨酸的新方法. 该酶促反应最适条件: pH=6, 反应温度50 ℃, 底物N-乙酰-D,L-缬氨酸浓度200 mmol/L, 固定化细胞用量0.2 g/mL(或100 U/mL). 0.1 mmol/L CoCl2条件对... 报道了一种利用具有乙酰鸟氨酸脱乙酰酶活性的固定化细胞拆分D,L-缬氨酸的新方法. 该酶促反应最适条件: pH=6, 反应温度50 ℃, 底物N-乙酰-D,L-缬氨酸浓度200 mmol/L, 固定化细胞用量0.2 g/mL(或100 U/mL). 0.1 mmol/L CoCl2条件对该酶促反应有显著的激活作用. 在以上条件下反应2~3 h, 测得产物L-缬氨酸浓度95 mmol/L. 该固定化细胞连续10次使用, 平均转化率为90.8%(以N-乙酰-L-缬氨酸计), 显示出了良好的工业化应用前景. 展开更多
关键词 乙酰鸟氨酸脱乙酰酶 拆分 固定化细胞 D L-缬氨酸
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酶法合成L-4-甲砜基苯丙氨酸 被引量:4
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作者 刘均忠 熊吉滨 +2 位作者 赵根海 刘茜 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2234-2238,共5页
以4-甲砜基苯丙酮酸和L-天冬氨酸为底物,利用重组大肠杆菌DM204(pGEX-KG-aspC/BL21)表达的天冬氨酸转氨酶酶法转化得到了L-4-甲砜基苯丙氨酸,优化得到的酶法最佳转化条件为:转化温度37℃,反应体系pH=8,底物4-甲砜基苯丙酮酸质量分数8%,... 以4-甲砜基苯丙酮酸和L-天冬氨酸为底物,利用重组大肠杆菌DM204(pGEX-KG-aspC/BL21)表达的天冬氨酸转氨酶酶法转化得到了L-4-甲砜基苯丙氨酸,优化得到的酶法最佳转化条件为:转化温度37℃,反应体系pH=8,底物4-甲砜基苯丙酮酸质量分数8%,质量分数0.6%的吐温80和10-4mol/L Mg2+对酶活有促进作用.在最佳工艺条件下经过12 h酶促反应,4-甲砜基苯丙酮酸摩尔转化率达95%.本研究利用化学生物法制备了L-4-甲砜基苯丙氨酸,为制备其它天然氨基酸衍生物提供了新思路. 展开更多
关键词 基因工程 天冬氨酸转氨酶 酶法合成 氨基酸衍生物
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基质辅助激光解析飞行质谱法检测空肠弯曲菌及李斯特菌 被引量:8
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作者 屠博文 吉俊敏 +4 位作者 杜强 黎俊宏 唐宏兵 熊吉滨 韩晓冬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期262-267,共6页
目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液... 目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液处理后进行质谱鉴定。通过分析检出菌特征峰及相对丰度差异来评价不同配比基质液对两种致病菌检测的影响。结果:空肠弯曲菌和李斯特菌对基质液配比要求具有明显差异,前者不需要经过甲酸裂解,而对三氟乙酸含量敏感,后者鉴定结果受到甲酸裂解制约。基质液含水量控制在体积分数30%可以有效避免特征峰缺失并提高检出率。结论:控制基质液的含水量、基质浓度和三氟乙酸含量可以增加空肠弯曲菌和李斯特菌的特征峰数量,增强相对丰度,提高致病菌检出率。基质液配比优化研究有助于增强食源性致病菌快速鉴定能力,有助于提高疾病预防和食源性风险监测的时效性。 展开更多
关键词 VITEKMS微生物检测系统 空肠弯曲菌 单核细胞性李斯特菌 基质液配比 微生物质谱检测方法
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Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度分析 被引量:3
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作者 邱文娜 吴宏斌 +2 位作者 方朝东 王永智 熊吉滨 《中国医药科学》 2018年第11期48-51,共4页
目的对Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度进行分析和评价。方法建立Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估。结果计算出了各变量的不确定度,取包含因子K=2,置信... 目的对Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度进行分析和评价。方法建立Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估。结果计算出了各变量的不确定度,取包含因子K=2,置信概率为95%,Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的扩展不确定度为0.0364。结论此评价方法适用于Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度评估。 展开更多
关键词 Lowry法 重组艾塞那肽 蛋白含量 不确定度评定
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重组艾塞那肽RP-HPLC法肽图分析
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作者 吴宏斌 邱文娜 +1 位作者 李磊 熊吉滨 《中国医药科学》 2016年第7期59-62,共4页
目的建立并验证胰蛋白酶裂解-反向高效液相色谱法进行重组艾塞那肽肽图分析研究。方法将重组艾塞那肽样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C_8色谱柱,以0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液为流动相A,以0.1%TF... 目的建立并验证胰蛋白酶裂解-反向高效液相色谱法进行重组艾塞那肽肽图分析研究。方法将重组艾塞那肽样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C_8色谱柱,以0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液为流动相A,以0.1%TFA的乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱70min,得到重组艾塞那肽肽图,以此进行方法的专属性、重现性、定量限、批间同一性研究。结果本实验室制备的重组艾塞那肽可以通过胰蛋白酶裂解-RP-HPLC法进行肽图分析,专属性、重现性均满足要求,定量限为0.125mg/m L,三个批次间的肽图谱也完全一致。结论表明此方法简便可靠、准确度高、重复性好,验证研究可行,可用于重组艾塞那肽的质量控制。 展开更多
关键词 重组艾塞那肽 肽图 胰蛋白酶裂解 高效液相色谱 方法研究 质量控制
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