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Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用 被引量:6
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作者 潘永露 何淑芳 +5 位作者 韩正怡 窦梦云 杨婉 程洁 陈志武 张野 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1150-1157,共8页
目的评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=3):(1)正常... 目的评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=3):(1)正常对照组:H9c2细胞置于DMEM/F12细胞培养液中培养;(2)H/R组:将H9c2细胞进行5 h缺氧和1 h复氧处理;(3)Fas siRNA组(H/R+Fas-siRNA):H9c2细胞转染Fas siRNA 24 h后进行H/R损伤;(4)siRNA阴性对照组(H/R+siRNA-NC):H9c2细胞转染Fas siRNA-NC 24 h后进行H/R损伤。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活力;微量酶标法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR法检测细胞Fas mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内Fas、caspase-8/3、ERK和GSK-3β蛋白表达。结果与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,Fas mRNA及蛋白水平升高,cleaved caspase-8/3、p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+FassiRNA组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,Fas mRNA及蛋白表达水平降低,cleaved caspase-8/3蛋白表达降低,p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达增高(P<0.05),而H/R+siRNA-NC组上述指标差异无统计学意义。结论 Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞H/R损伤中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 FAS caspase 细胞外信号调节激酶 心肌细胞 缺氧/复氧损伤 凋亡
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甲状旁腺自体移植术患者右美托咪定镇静的熵指数变化 被引量:3
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作者 钟玮 李锐 +6 位作者 李云 翁立军 王家友 常江 蒋维维 潘永露 张野 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第6期665-668,共4页
目的:评价熵指数在监测右美托咪定用于慢性肾衰继发甲旁亢行甲状旁腺自体移植术患者全麻诱导前镇静深度的变化特点。方法:试验组(E组)为择期行甲状旁腺全切除术的慢性肾衰患者20例,ASAⅡ~Ⅲ级,年龄18~65周岁,体质量指数18~25 kg/m2... 目的:评价熵指数在监测右美托咪定用于慢性肾衰继发甲旁亢行甲状旁腺自体移植术患者全麻诱导前镇静深度的变化特点。方法:试验组(E组)为择期行甲状旁腺全切除术的慢性肾衰患者20例,ASAⅡ~Ⅲ级,年龄18~65周岁,体质量指数18~25 kg/m2;对照组(C组)为择期行甲状腺腺瘤切除术的一般患者20例,ASAⅠ~Ⅱ级且无系统性疾病。两组在麻醉诱导前均输注负荷剂量0.9 m L·kg^-1·h^-1的右美托咪定10 min(右美托咪定浓度为4μg/m L),然后开始麻醉诱导。分别于输注前(T0)、输注1 min(T1)、5 min(T2)、7 min(T3)、11 min(T4)时记录反应熵(RE)、状态熵(SE)并计算RE-SE的值。结果:与T0相比,E组在T4时的RE和SE均下降(P〈0.05);与C组相比,E组在T4时的RE和SE较低(P〈0.05),且E组的RE-SE在T3时同样低于C组。结论:在右美托咪定用于全麻诱导前镇静时,甲状旁腺自体移植术患者的熵指数较一般患者明显降低。 展开更多
关键词 熵指数 右美托咪定 慢性肾功能衰竭 镇静深度
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吗啡预处理诱导的大鼠血清外泌体对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响 被引量:6
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作者 刘中 产进中 +4 位作者 潘永露 黄俊 杨婉 张野 何淑芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1600-1605,共6页
目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)诱导的大鼠血清外泌体对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响。方法大鼠进行MPC或对照处理(CON)后,提取血清中的外泌体,标记为MPC-Exo、CON-Exo。利用透射电... 目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)诱导的大鼠血清外泌体对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响。方法大鼠进行MPC或对照处理(CON)后,提取血清中的外泌体,标记为MPC-Exo、CON-Exo。利用透射电镜和Western blot进行外泌体鉴定。H9c2心肌细胞随机分为Control组、H/R组、H/R+CON-Exo组和H/R+MPC-Exo组。除Control组细胞常规培养外,其余各组细胞均给予5 h缺氧和1 h复氧处理,H/R+CON-Exo组和H/R+MPC-Exo组细胞在H/R损伤前,分别与相应外泌体共孵育12 h。分别检测细胞活力、乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase, LDH)活性和细胞凋亡。结果外泌体提取物电镜下呈直径30~100 nm的圆形囊泡,并表达外泌体标志性蛋白。MPC-Exo与H9c2心肌细胞共孵育,可以明显减轻心肌细胞H/R损伤,增强细胞活力,减少LDH释放,并抑制心肌细胞凋亡;相反,CON-Exo与心肌细胞共孵育后,对H/R损伤无明显影响。结论 MPC诱导的大鼠血清外泌体可减轻H9c2心肌细胞H/R损伤,发挥心肌保护作用。 展开更多
关键词 吗啡预处理 外泌体 心肌细胞 缺氧/复氧损伤 心肌保护 凋亡
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慢病毒介导的NGF基因沉默对PC12细胞分化的影响 被引量:2
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作者 窦梦云 何淑芳 +2 位作者 黄成 潘永露 张野 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1153-1158,共6页
目的探讨慢病毒介导的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因沉默后对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)分化的影响及其机制。方法构建NGF shRNA慢病毒载体。培养PC12细胞,随机分为5组(n=3):1正常对照组(NC):PC12... 目的探讨慢病毒介导的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因沉默后对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)分化的影响及其机制。方法构建NGF shRNA慢病毒载体。培养PC12细胞,随机分为5组(n=3):1正常对照组(NC):PC12细胞置于DMEM/HG细胞培养液和促感染试剂polybrene中培养;2空病毒感染组(LV CON):PC12细胞置于空病毒和polybrene中培养;3慢病毒NGF shRNA1感染组(LV sh NGF1):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA1和polybrene中培养;4慢病毒NGF shRNA2感染组(LV sh NGF2):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA2和polybrene中培养;5慢病毒NGF shRNA3感染组(LV sh NGF3):PC12细胞置于慢病毒NGF shRN3和polybrene中培养。处理结束后,荧光显微镜下检测感染效率、荧光定量RT-PCR法检测细胞NGF mRNA表达水平、Western blot法检测慢病毒感染后细胞NGF、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和磷酸化-ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达,细胞增殖检验试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性,显微镜下观察PC12细胞形态,统计细胞突起长度和最大细胞直径。结果慢病毒感染PC12细胞的效率超过90%。与NC组相比,LV sh NGF3组NGF mRNA表达降低(P<0.05),NGF蛋白水平明显降低(P<0.05),ERK1/2蛋白表达和细胞活性无差异,p-ERK1/2蛋白表达有明显下降(P<0.01),细胞形态发生明显变化,细胞突起长度和最大细胞直径均变小(P<0.01),细胞分化被抑制。结论慢病毒介导的NGF基因沉默通过抑制ERK1/2活化,影响PC12细胞分化。 展开更多
关键词 慢病毒 NGF 基因沉默 PC12细胞 分化 ERK1/2
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