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猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用
被引量：
5
1
作者
赵玲
朱玲
+3 位作者
郭万柱
徐志文
漆信桥
李凤勤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期808-814,共7页
本研究旨在建立以PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0mmol.L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫...
本研究旨在建立以PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0mmol.L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫反应活性,以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg.mL-1;血清最佳稀释度为1∶40;抗原最佳包被条件为4℃过夜;最佳封闭条件为1%BSA 37℃1h;血清反应时间为37℃30min;酶标二抗最适作用时间为37℃45min;底物最佳反应条件为37℃显色15min。用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测,总阳性率为80.98%(149/184),与商品化的PCV2ELISA试剂盒得到的结果基本一致。本试验成功建立了PCV2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测。
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关键词
圆环病毒2型
CAP蛋白
间接ELISA
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用
被引量：
5
1
作者
赵玲
朱玲
郭万柱
徐志文
漆信桥
李凤勤
机构
四川农业大学动物生物技术中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期808-814,共7页
基金
四川省科技厅应用基础项目(2006J13-047)
"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目(IRT0848)
文摘
本研究旨在建立以PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0mmol.L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫反应活性,以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg.mL-1;血清最佳稀释度为1∶40;抗原最佳包被条件为4℃过夜;最佳封闭条件为1%BSA 37℃1h;血清反应时间为37℃30min;酶标二抗最适作用时间为37℃45min;底物最佳反应条件为37℃显色15min。用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测,总阳性率为80.98%(149/184),与商品化的PCV2ELISA试剂盒得到的结果基本一致。本试验成功建立了PCV2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测。
关键词
圆环病毒2型
CAP蛋白
间接ELISA
Keywords
porcine circovirus type 2
Cap protein
indirect ELISA
分类号
S859.659.2 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用
赵玲
朱玲
郭万柱
徐志文
漆信桥
李凤勤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
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