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人前列腺癌中己糖激酶-2基因对TH1/TH2细胞的影响
被引量：
1
1
作者
李斌
陶陶
+3 位作者
沈德赟
葛庆宇
夏开国
肖峻
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第10期1530-1534,共5页
目的探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同...
目的探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同时使用无义序列构建慢病毒感染PC3细胞系获得阴性对照细胞(NC),qPCR与Western blot验证敲低结果。培养前列腺癌细胞(NC和sh-HK2)48 h后分离癌细胞获得上清液,提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs)。TH1空白组:PBMCs在TH1诱导条件下使用1640培养基培养48 h;TH1实验组(TH1 sh-HK2组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过稳转株的上清液共培养48 h;TH1阴性对照组(TH1 NC组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过阴性对照细胞的上清液共培养48 h。TH2空白组、TH2实验组(TH2 sh-HK2组)、TH2阴性对照组(TH2 NC组)诱导条件变更为TH2诱导条件,其他不变。48 h后分光光度仪检测各共培养体系中乳酸水平。然后提取各组中PBMCs使用植物血凝素-M(PHA-M)另外培养24 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TH1诱导条件下各组中PBMCs的干扰素-γ(IFN-γ)和TH2诱导条件下各组PBMCs的白介素-4(IL-4)的分泌。结果qPCR与Western blot显示HK2基因敲低结果显著,在TH1诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IFN-γ升高,在TH2诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IL-4降低。实验组与对照组相比乳酸含量均下降。结论HK2基因在前列腺癌PC3中的高表达使肿瘤周围环境乳酸浓度升高,并使周围共培养体系中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,由此导致细胞免疫功能下降,而使针对肿瘤无效的体液免疫增强,促进肿瘤进展。
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关键词
己糖激酶-2
前列腺癌
人外周血单个核细胞
TH1/TH2细胞
共培养
干扰素-Γ
白介素-4
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题名
人前列腺癌中己糖激酶-2基因对TH1/TH2细胞的影响
被引量：
1
1
作者
李斌
陶陶
沈德赟
葛庆宇
夏开国
肖峻
机构
安徽医科大学附属省立医院泌尿外科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第10期1530-1534,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81702540)
安徽省自然科学基金(编号:1708085QH202)。
文摘
目的探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同时使用无义序列构建慢病毒感染PC3细胞系获得阴性对照细胞(NC),qPCR与Western blot验证敲低结果。培养前列腺癌细胞(NC和sh-HK2)48 h后分离癌细胞获得上清液,提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs)。TH1空白组:PBMCs在TH1诱导条件下使用1640培养基培养48 h;TH1实验组(TH1 sh-HK2组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过稳转株的上清液共培养48 h;TH1阴性对照组(TH1 NC组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过阴性对照细胞的上清液共培养48 h。TH2空白组、TH2实验组(TH2 sh-HK2组)、TH2阴性对照组(TH2 NC组)诱导条件变更为TH2诱导条件,其他不变。48 h后分光光度仪检测各共培养体系中乳酸水平。然后提取各组中PBMCs使用植物血凝素-M(PHA-M)另外培养24 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TH1诱导条件下各组中PBMCs的干扰素-γ(IFN-γ)和TH2诱导条件下各组PBMCs的白介素-4(IL-4)的分泌。结果qPCR与Western blot显示HK2基因敲低结果显著,在TH1诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IFN-γ升高,在TH2诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IL-4降低。实验组与对照组相比乳酸含量均下降。结论HK2基因在前列腺癌PC3中的高表达使肿瘤周围环境乳酸浓度升高,并使周围共培养体系中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,由此导致细胞免疫功能下降,而使针对肿瘤无效的体液免疫增强,促进肿瘤进展。
关键词
己糖激酶-2
前列腺癌
人外周血单个核细胞
TH1/TH2细胞
共培养
干扰素-Γ
白介素-4
Keywords
hexokinase-2
prostate cancer
human peripheral blood mononuclear cells
TH1/TH2 cell
co-culture
IFN-γ
IL-4
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人前列腺癌中己糖激酶-2基因对TH1/TH2细胞的影响
李斌
陶陶
沈德赟
葛庆宇
夏开国
肖峻
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020
1
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