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2型猪链球菌鼠李糖基转移酶Cps2F生物信息学分析及重组蛋白制备
1
作者
林苗
陆冰冰
+4 位作者
汪雨荷
唐成亮
郑峰
潘秀珍
倪华
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2024年第12期1283-1291,共9页
目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)鼠李糖基转移酶Cps2F蛋白进行生物信息学分析,并利用原核表达技术纯化制备重组Cps2F蛋白,鉴定鼠李糖基转移酶活性,为进一步探究其生物学功能奠定基础。方法采用DNAstar、NCB...
目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)鼠李糖基转移酶Cps2F蛋白进行生物信息学分析,并利用原核表达技术纯化制备重组Cps2F蛋白,鉴定鼠李糖基转移酶活性,为进一步探究其生物学功能奠定基础。方法采用DNAstar、NCBI等生物信息学软件与数据库,系统分析Cps2F蛋白的理化性质、蛋白结构域、三维结构及相互作用网络等生物学基本特征。以S.suis 205ZYH33菌株为模板,PCR扩增cps2F基因,构建Cps2F蛋白重组表达质粒,将重组质粒转入E.coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并用透析法复性,获得可溶性的重组Cps2F蛋白,考马斯亮蓝染色和蛋白免疫印迹对Cps2F蛋白的纯度进行鉴定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行酶活性检测。结果在线网站预测分析表明,Cps2F蛋白由389个氨基酸残基组成,属亲水性稳定蛋白,理论相对分子质量为45000,等电点pI为8.52,基因功能注释为鼠李糖基转移酶。Cps2F蛋白二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主,三级结构与3c4q.1.A蛋白模型相似,能够与多种荚膜合成蛋白相互作用。双酶切结果显示,成功构建pET32a::cps2F重组质粒,并获得E.coli BL21 Cps2F重组蛋白表达菌株。SDS-PAGE电泳结果显示,Cps2F蛋白主要以包涵体形式表达,理论分子质量与预期大小相符;使用透析法成功将Cps2F包涵体蛋白复性,蛋白免疫印迹检测表明,Cps2F蛋白条带单一,纯度较高,可用于后续进一步研究。对纯化的复性Cps2F蛋白的鼠李糖基转移酶酶活力检测,其酶活力为(69.95±1.70)U/L。结论经透析复性后纯化的重组Cps2F蛋白具备鼠李糖基转移酶酶活性,为猪链球菌荚膜合成调控机制研究奠定基础。
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关键词
2型猪链球菌
荚膜多糖
糖基转移酶
原核表达
蛋白纯化
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职称材料
题名
2型猪链球菌鼠李糖基转移酶Cps2F生物信息学分析及重组蛋白制备
1
作者
林苗
陆冰冰
汪雨荷
唐成亮
郑峰
潘秀珍
倪华
机构
东部战区疾病预防控制中心
新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室
出处
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2024年第12期1283-1291,共9页
基金
国家自然科学基金(82072256)
江苏省自然科学基金(BK20201129)。
文摘
目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)鼠李糖基转移酶Cps2F蛋白进行生物信息学分析,并利用原核表达技术纯化制备重组Cps2F蛋白,鉴定鼠李糖基转移酶活性,为进一步探究其生物学功能奠定基础。方法采用DNAstar、NCBI等生物信息学软件与数据库,系统分析Cps2F蛋白的理化性质、蛋白结构域、三维结构及相互作用网络等生物学基本特征。以S.suis 205ZYH33菌株为模板,PCR扩增cps2F基因,构建Cps2F蛋白重组表达质粒,将重组质粒转入E.coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并用透析法复性,获得可溶性的重组Cps2F蛋白,考马斯亮蓝染色和蛋白免疫印迹对Cps2F蛋白的纯度进行鉴定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行酶活性检测。结果在线网站预测分析表明,Cps2F蛋白由389个氨基酸残基组成,属亲水性稳定蛋白,理论相对分子质量为45000,等电点pI为8.52,基因功能注释为鼠李糖基转移酶。Cps2F蛋白二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主,三级结构与3c4q.1.A蛋白模型相似,能够与多种荚膜合成蛋白相互作用。双酶切结果显示,成功构建pET32a::cps2F重组质粒,并获得E.coli BL21 Cps2F重组蛋白表达菌株。SDS-PAGE电泳结果显示,Cps2F蛋白主要以包涵体形式表达,理论分子质量与预期大小相符;使用透析法成功将Cps2F包涵体蛋白复性,蛋白免疫印迹检测表明,Cps2F蛋白条带单一,纯度较高,可用于后续进一步研究。对纯化的复性Cps2F蛋白的鼠李糖基转移酶酶活力检测,其酶活力为(69.95±1.70)U/L。结论经透析复性后纯化的重组Cps2F蛋白具备鼠李糖基转移酶酶活性,为猪链球菌荚膜合成调控机制研究奠定基础。
关键词
2型猪链球菌
荚膜多糖
糖基转移酶
原核表达
蛋白纯化
Keywords
Streptococcus suis serotype 2
capsular polysaccharide
glycosyltransferase
prokaryotic expression
protein purifi⁃cation
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
2型猪链球菌鼠李糖基转移酶Cps2F生物信息学分析及重组蛋白制备
林苗
陆冰冰
汪雨荷
唐成亮
郑峰
潘秀珍
倪华
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2024
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