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环糊精葡萄糖基转移酶my20结构域删除突变体的表达和酶学性能
1
作者
孙腾腾
王伟
+2 位作者
孙晶晶
江承程
郝建华
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2024年第20期154-160,共7页
本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶。以my2...
本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶。以my20环化比活力为100%计,my20ΔD、my20ΔE、my20ΔDE相对环化活力分别约为197%、22%、17%,表明E结构域是CGTase催化环化反应的重要结构域,D结构域的存在可能降低了底物分子进入催化结构域的能力。my20为耐热酶,3种截短突变酶相较之下耐热性均有不同程度的降低,说明D、E结构域在CGTase耐热性方面具有重要的作用。my20在缺失了DE结构域后,催化产物中α-环糊精占比相较其他截短酶提升约8%,表明缺失DE结构域影响其产物的特异性。本实验结果可为CGTase通过结构域改造在工业生产方面发挥作用提供一定的理论基础。
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关键词
环糊精葡萄糖基转移酶
结构域
环化活力
酶学性质
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职称材料
α-琼胶酶OUC-GaJJ96的异源表达及酶学性质
被引量：
5
2
作者
金佳
江承程
毛相朝
《食品科学技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期47-54,共8页
α-琼胶酶在功能性琼胶寡糖的酶法制备中发挥着重要作用,目前有关α-琼胶酶的研究较少。克隆表达了来自溶藻性吉尔维菌(Gilvimarinus agarilyticus)的α-琼胶酶,命名为OUC-GaJJ96,并对其酶学性质及水解产物进行研究。该酶属于糖苷水解...
α-琼胶酶在功能性琼胶寡糖的酶法制备中发挥着重要作用,目前有关α-琼胶酶的研究较少。克隆表达了来自溶藻性吉尔维菌(Gilvimarinus agarilyticus)的α-琼胶酶,命名为OUC-GaJJ96,并对其酶学性质及水解产物进行研究。该酶属于糖苷水解酶96家族,基因全长为3759 bp,编码1252个氨基酸,N端含有26个氨基酸编码的信号肽,蛋白分子质量约为180 kDa。酶学性质研究显示:OUC-GaJJ96最适反应温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0(Tris-HCl缓冲液),比酶活力为2.68 U/mg。通过高效液相色谱和电喷雾离子源质谱对OUC-GaJJ96的水解产物进行分析,结果表明:该酶水解产物是琼二糖、琼四糖和琼六糖,其中琼四糖是主要产物,OUC-GaJJ96可用于制备具有生物活性的琼胶寡糖。
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关键词
α-琼胶酶
琼胶寡糖
异源表达
酶学性质
水解分析
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职称材料
题名
环糊精葡萄糖基转移酶my20结构域删除突变体的表达和酶学性能
1
作者
孙腾腾
王伟
孙晶晶
江承程
郝建华
机构
江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室
农业农村部极地渔业可持续利用重点实验室
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2024年第20期154-160,共7页
基金
江苏省海洋生物资源与环境重点实验室开放课题基金项目(SH20211201)
中国水产科学研究院基本科研业务费项目(2023TD71)。
文摘
本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶。以my20环化比活力为100%计,my20ΔD、my20ΔE、my20ΔDE相对环化活力分别约为197%、22%、17%,表明E结构域是CGTase催化环化反应的重要结构域,D结构域的存在可能降低了底物分子进入催化结构域的能力。my20为耐热酶,3种截短突变酶相较之下耐热性均有不同程度的降低,说明D、E结构域在CGTase耐热性方面具有重要的作用。my20在缺失了DE结构域后,催化产物中α-环糊精占比相较其他截短酶提升约8%,表明缺失DE结构域影响其产物的特异性。本实验结果可为CGTase通过结构域改造在工业生产方面发挥作用提供一定的理论基础。
关键词
环糊精葡萄糖基转移酶
结构域
环化活力
酶学性质
Keywords
cyclodextrin glucosyltransferase
domain
cyclization activity
enzymatic properties
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
α-琼胶酶OUC-GaJJ96的异源表达及酶学性质
被引量：
5
2
作者
金佳
江承程
毛相朝
机构
中国海洋大学食品科学与工程学院
青岛海洋科学与技术国家试点实验室/海洋药物与生物制品功能实验室
出处
《食品科学技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期47-54,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(31922072)。
文摘
α-琼胶酶在功能性琼胶寡糖的酶法制备中发挥着重要作用,目前有关α-琼胶酶的研究较少。克隆表达了来自溶藻性吉尔维菌(Gilvimarinus agarilyticus)的α-琼胶酶,命名为OUC-GaJJ96,并对其酶学性质及水解产物进行研究。该酶属于糖苷水解酶96家族,基因全长为3759 bp,编码1252个氨基酸,N端含有26个氨基酸编码的信号肽,蛋白分子质量约为180 kDa。酶学性质研究显示:OUC-GaJJ96最适反应温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0(Tris-HCl缓冲液),比酶活力为2.68 U/mg。通过高效液相色谱和电喷雾离子源质谱对OUC-GaJJ96的水解产物进行分析,结果表明:该酶水解产物是琼二糖、琼四糖和琼六糖,其中琼四糖是主要产物,OUC-GaJJ96可用于制备具有生物活性的琼胶寡糖。
关键词
α-琼胶酶
琼胶寡糖
异源表达
酶学性质
水解分析
Keywords
α-agarase
agaro-oligosaccharides
heterologous expression
enzymatic properties
hydrolysis analysis
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
Q814.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
环糊精葡萄糖基转移酶my20结构域删除突变体的表达和酶学性能
孙腾腾
王伟
孙晶晶
江承程
郝建华
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
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职称材料
2
α-琼胶酶OUC-GaJJ96的异源表达及酶学性质
金佳
江承程
毛相朝
《食品科学技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
5
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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