鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立

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作者 谢晶 于吉锋 +12 位作者 肖璐 吴学婧 叶勇刚 魏勇 李兴玉 曹冶 潘梦 毛从剑 杨竣雁 叶健强 曾子轩 康玮笠 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第6期99-105,127,共8页

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了性能评估。结果显示:捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000;临界值为0.295 6,当待测样品OD_(450 nm)值大于0.295 6且P/N值大于2时,判为阳性;建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原,而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性;最低检测限为49.4 ELD_(50)/0.1 mL,批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示,该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明,本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。 展开更多

关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA

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15株四川地区猪圆环病毒3型全基因序列的克隆与分析

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作者 肖璐 周泷 +11 位作者 吴学婧 于吉锋 谢晶 李兴玉 叶勇刚 魏勇 林毅 曹冶 潘梦 叶健强 毛从剑 康润敏 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期171-180,共10页

为了解四川省地区猪圆环病毒3型(PCV3)流行毒株的分子及遗传变异规律,试验采用生物学软件,设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明:PCR分段扩增分别得到... 为了解四川省地区猪圆环病毒3型(PCV3)流行毒株的分子及遗传变异规律,试验采用生物学软件,设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明:PCR分段扩增分别得到大小为623、803和753 bp的条带,阳性克隆菌测序结果与GenBank中PCV3的同源性均大于98.6%;15株样品毒株的全基因核苷酸序列的同源性为98.1%~99.8%,推导氨基酸序列的同源性为95.8%~99.2%,由Cap基因的遗传进化分析发现从四川地区获取的15株PCV3毒株属于3a和3b两个亚群。说明四川地区流行的PCV3毒株至少存在3a和3b 2个亚群,该亚群的变异程度低、较为保守。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 序列分析 遗传变异 流行病学

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重组酶介导等温扩增技术在动物疫病检测中的应用 被引量：1

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作者 叶健强 吴学婧 +5 位作者 毛从剑 于吉锋 肖璐 谢晶 曾子轩 康润敏 《养殖与饲料》 2024年第8期101-105,共5页

重组酶介导等温扩增技术(RAA)是一种新型核酸扩增技术,能在简单设备甚至低资源环境下实现等温快速扩增;具有特异性强、灵敏度高、操作简便、耗时短等优点,适用于动物疫病快速检测。本文介绍了RAA技术的技术原理和技术特点,总结了该技术... 重组酶介导等温扩增技术(RAA)是一种新型核酸扩增技术,能在简单设备甚至低资源环境下实现等温快速扩增;具有特异性强、灵敏度高、操作简便、耗时短等优点,适用于动物疫病快速检测。本文介绍了RAA技术的技术原理和技术特点,总结了该技术在动物病毒、细菌、寄生虫、动物源性产品和其他病原微生物等多个领域中研究现状。同时,提出了该技术存在的不足和展望了未来的发展方向和热点。 展开更多

关键词 重组酶介导扩增 疫病检测 应用 动物源性产品 病原微生物

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猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析

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作者 吴学婧 于吉锋 +4 位作者 叶勇刚 肖璐 毛从剑 曹冶 康润敏 《畜禽业》 2024年第2期1-8,共8页

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronav... 2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。 展开更多

关键词 猪δ冠状病毒 诊断 N基因 遗传进化分析

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一株山羊源戊糖片球菌的益生作用研究 被引量：3

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作者 徐凤 张焕容 +4 位作者 汤承 诸明欣 梁华 张兴民 毛从剑 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期586-591,共6页

为评价一株戊糖片球菌BL-1对小鼠生长性能及免疫功能的影响,本研究选用体质量20 g左右的断奶雌性昆明小鼠灌服戊糖片球菌BL-1菌液,通过测定实验小鼠日均增重、料重比、淋巴细胞转化、脾脏及胸腺指数、十二指肠及空肠形态发育、肠道内SI... 为评价一株戊糖片球菌BL-1对小鼠生长性能及免疫功能的影响,本研究选用体质量20 g左右的断奶雌性昆明小鼠灌服戊糖片球菌BL-1菌液,通过测定实验小鼠日均增重、料重比、淋巴细胞转化、脾脏及胸腺指数、十二指肠及空肠形态发育、肠道内SIg A和腹腔巨噬细胞吞噬功能等指标,评价该乳酸菌对小鼠生长性能及免疫功能的影响。结果显示:戊糖片球菌BL-1能显著提高小鼠的生长性能、脾脏指数及胸腺指数(p<0.05)、增强外周血T淋巴细胞的增殖反应、促进十二指肠形态发育和肠道内SIg A的分泌;对空肠形态发育和腹腔巨噬细胞吞噬无显著影响(p>0.05)。本研究结果表明山羊源戊糖片球菌BL-1能有效提高实验小鼠的生长性能和免疫功能,是一株优良的益生菌候选菌株。 展开更多

关键词 山羊 戊糖片球菌 生长性能 免疫功能

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四川省部分规模养殖场猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒2型感染情况调查 被引量：3

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作者 谢晶 肖璐 +10 位作者 于吉锋 吴学婧 叶勇刚 李兴玉 潘梦 曹冶 林毅 魏勇 叶健强 毛从剑 康润敏 《中国动物检疫》 CAS 2023年第12期5-11,共7页

为了解四川省规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)2种猪免疫抑制类病原的感染情况,采用荧光定量RT-PCR/PCR方法,对898份采自四川省12个地区规模化猪场的组织、精液及血液样品进行PRRSV和PCV2检测与分析。... 为了解四川省规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)2种猪免疫抑制类病原的感染情况,采用荧光定量RT-PCR/PCR方法,对898份采自四川省12个地区规模化猪场的组织、精液及血液样品进行PRRSV和PCV2检测与分析。结果显示:至少检出PRRSV和PCV2中一种病原的样品占67.82%,其中组织样品阳性率最高(32.96%),其次为血液(27.17%)、精液(7.68%)。从不同类别样品感染情况看,组织样品中PRRSV+PCV2混合感染率最高,达33.53%;精液样品中PRRSV单感染率最高,达53.00%;血液样品中PCV2单感染率最高,达45.27%。从不同感染类型情况看,PCV2单感染、PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率依次下降,分别为33.18%、20.71%、13.92%;PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率最高的均为组织样品,分别占10.58%、12.80%,PCV2单感染率最高的为血液样品,达22.94%。从不同地区感染情况看,12个地区中PRRSV和PCV2中至少一种病原为阳性的阳性率为52.17%~82.81%,其中绵阳市最高;PRRSV单感染率最高的为绵阳市(37.50%),PCV2单感染率最高的为内江市(44.44%),PCV2+PRRSV混合感染率最高的为乐山市(20.29%)。结果表明:四川省规模化养猪场中普遍存在PRRSV、PCV2单感染和混合感染,其中内江、绵阳、乐山等地的感染情况较为严重;组织样品总阳性率最高并以PRRSV+PCV2混合感染为主,精液和血液样品分别以PRRSV单感染、PCV2单感染为主。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 四川省 流行病学

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诊治山羊口疮病例 被引量：1

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作者 毛从剑 张焕容 张兴民 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第6期63-64,I0001,共3页

羊口疮是由羊口疮病毒引起的以患羊口唇、口角、鼻、乳房等部位皮肤和黏膜形成红斑、丘疹、脓疮、溃疡和结成疣状厚痂为特征的传染病。各年龄段的羊均能感染发病,山羊比绵羊易感,其中羔羊最易感,并常为群发性流行。该病一年四季均可发生... 羊口疮是由羊口疮病毒引起的以患羊口唇、口角、鼻、乳房等部位皮肤和黏膜形成红斑、丘疹、脓疮、溃疡和结成疣状厚痂为特征的传染病。各年龄段的羊均能感染发病,山羊比绵羊易感,其中羔羊最易感,并常为群发性流行。该病一年四季均可发生,无明显的季节性,但多发于初春或春末夏初。截止到2014年,我国有24个省份报道过羊口疮病例的发生,且从2000年起,该病的报道逐年递增（[1]）,说明在我国养羊业中该病的发生及对该病的关注越来越多。 展开更多

关键词 山羊口疮 病例 诊治 一年四季 春末夏初 膜形成 传染病 群发性

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Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定 被引量：3

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作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 罗燕 谢晶 叶勇刚 吴学婧 毛从剑 李兴玉 曹冶 林毅 潘梦 叶健强 魏勇 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3336-3344,共9页

【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP 60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进... 【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP 60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进行重组,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建重组腺病毒穿梭质粒,并利用酶切与测序对重组腺病毒穿梭质粒进行鉴定;采用Ad Max腺病毒包装系统,基于HEK293细胞进行穿梭质粒与腺病毒骨架质粒的定点同源重组,构建重组腺病毒Ad5-RHDV2-VP60并感染HEK293细胞,通过RT-PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)对重组腺病毒进行表达验证;利用Reed-Muench方法测定重组腺病毒的病毒滴度。【结果】重组腺病毒穿梭质粒酶切鉴定结果可见2条大小分别为3895和1752 bp的条带,测序比对结果显示,其与GenBank中公布的相应序列相似性>99%,表明穿梭质粒构建成功。RT-PCR结果可见大小约为515 bp的特异性条带;Western blotting结果显示,大小约为60 ku的VP60蛋白特异性条带;IFA观察结果显示,感染重组腺病毒的HEK293细胞产生了绿色荧光,表明重组病毒能在HEK293细胞中表达VP60蛋白,且该蛋白具有良好的抗原性;病毒滴度测定结果显示,初代重组腺病毒的TCID_(50)为10^(5.5)/0.1 mL。【结论】本试验构建了含RHDV2 VP 60基因的重组腺病毒,并成功表达了RHDV2 VP60蛋白,为进一步研究开发RHDV2疫苗提供了病毒模型。 展开更多

关键词 兔瘟 兔出血症病毒2型(RHDV2) 重组腺病毒 HEK293细胞 KOZAK序列

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山羊肺炎病原菌的分离鉴定及药敏试验 被引量：6

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作者 黄忍 张焕容 +2 位作者 毛从剑 彭纯良 孙正楠 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期130-133,共4页

无菌采集死亡羔羊肺脏样品接种于含100mL/L马血清的TSA平板,37℃培养24h^48h分离病原菌,观察分离菌菌落特征、染色特性,分析其溶血性等,采用山羊肺炎常见病原菌的特异性引物,以无菌水稀释菌落,微波炉热处理稀释菌落释放的细菌基因组DNA... 无菌采集死亡羔羊肺脏样品接种于含100mL/L马血清的TSA平板,37℃培养24h^48h分离病原菌,观察分离菌菌落特征、染色特性,分析其溶血性等,采用山羊肺炎常见病原菌的特异性引物,以无菌水稀释菌落,微波炉热处理稀释菌落释放的细菌基因组DNA为模板,PCR扩增病原菌目的基因片段鉴定分离的病原菌,通过药敏试验筛选敏感药物。结果表明,分离鉴定出2种病原菌分别为多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌,其中溶血性曼氏杆菌呈β溶血;分离鉴定的2种病原菌均能分别致死Balb/c小鼠;2株分离菌对头孢噻肟、头孢唑林、头孢拉定、头孢美唑、庆大霉素、丁胺卡那、诺氟沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、四环素和多西环素共11种抗菌药物高度敏感。表明多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌是致该病例山羊羔死亡的重要病原菌,为该羊场山羊细菌性肺炎的防控提供了依据。 展开更多

关键词 山羊 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 药敏试验

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山羊口疮病毒四川分离株F1L基因分子特征分析及抗原表位预测 被引量：4

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作者 孙正楠 毛从剑 张焕容 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期1942-1948,共7页

为明确山羊口疮病毒(ORFV)四川分离株F1L基因分子特征并预测抗原表位,本试验利用生物信息学软件分析四川分离株ORFVF1L基因,并预测其编码蛋白的二、三级结构和B细胞表位。将F1L基因克隆转化后测序,用Mega 7.0软件比对分析该基因与其他... 为明确山羊口疮病毒(ORFV)四川分离株F1L基因分子特征并预测抗原表位,本试验利用生物信息学软件分析四川分离株ORFVF1L基因,并预测其编码蛋白的二、三级结构和B细胞表位。将F1L基因克隆转化后测序,用Mega 7.0软件比对分析该基因与其他地区来源的ORFV F1L基因的变异情况,利用SOPMA服务器预测F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件预测其亲水性、表面可及性、柔韧性及抗原性,以ABCpred方案作为验证并输出B细胞表位,在SWISS-MODEL服务器预测三级结构后,进一步在建模区域再验证抗原表位,最终回归蛋白质序列比对。结果显示,四川分离株ORFVF1L基因大小为1 029bp,编码342个氨基酸,基因及其编码蛋白较其他地区来源毒株有一定变异;F1L蛋白预测分析存在9个可能B细胞表位,综合三级结构预测,其122—137肽段为最优表位;所预测的四川分离株ORFV F1L蛋白优势抗原表位较其他地区具有一定特异性,较多地区在124、131、137位氨基酸出现不同。本研究结果为四川地区ORFV基因工程疫苗及特异性检测方法的研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 山羊口疮病毒(ORFV) F1L基因 蛋白结构 B细胞抗原表位

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一例仔猪蓝耳病毒与猪链球菌9 型混合感染的实验室诊断

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作者 毛从剑 康玮笠 +5 位作者 曾子轩 吴学婧 于吉锋 叶勇刚 肖璐 康润敏 《四川畜牧兽医》 2025年第8期27-29,31,共4页

为确诊四川省简阳某猪场的仔猪出现呼吸困难和急性死亡等症状的病因,采集发病猪肺脏、脾脏等组织进行猪蓝耳病毒、圆环病毒2型、猪瘟病毒的qPCR检测,同时进行细菌分离鉴定和药敏试验。结果如下:qPCR检测结果显示,猪蓝耳病毒为阳性,圆环... 为确诊四川省简阳某猪场的仔猪出现呼吸困难和急性死亡等症状的病因,采集发病猪肺脏、脾脏等组织进行猪蓝耳病毒、圆环病毒2型、猪瘟病毒的qPCR检测,同时进行细菌分离鉴定和药敏试验。结果如下:qPCR检测结果显示,猪蓝耳病毒为阳性,圆环病毒2型、猪瘟病毒为阴性;病原菌的分离鉴定及药敏试验结果显示,在组织中分离得到1株猪链球菌,血清型鉴定为9型,分离菌对阿莫西林、氨苄西林、环丙沙星、恩诺沙星敏感。综上,本次仔猪发病是由猪蓝耳病毒和猪链球菌9型混合感染引起的。 展开更多

关键词 猪蓝耳病毒 猪链球菌9型 qPCR 药敏试验

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