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小鼠T279基因敲除胚胎干细胞的构建 被引量:1
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作者 杨超 王朝亮 +2 位作者 张天标 殷正伟 王瑞 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第4期448-452,共5页
目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型。方法:订购含小鼠T279基因的129BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目的片段的连接,并在EL350大肠杆菌中进行同源重组,构建T279... 目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型。方法:订购含小鼠T279基因的129BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目的片段的连接,并在EL350大肠杆菌中进行同源重组,构建T279打靶载体,将其电转染小鼠胚胎干细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组的阳性克隆。结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定,T279打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到同源重组的敲除T279基因的胚胎干细胞克隆。结论:T279基因敲除打靶载体构建成功并筛选到了同源重组阳性的胚胎干细胞克隆。 展开更多
关键词 T279 基因敲除 打靶载体 同源重组 小鼠
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小鼠TSC21基因敲除打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆的鉴定 被引量:1
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作者 殷正伟 王朝亮 +2 位作者 张天标 杨超 张卫星 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第4期511-515,共5页
目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆。方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Souther... 目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆。方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组阳性ES细胞克隆。结果:构建了TSC21基因敲除打靶载体,经过限制性内切酶鉴定及DNA测序鉴定,TSC21基因敲除打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到打靶序列同源重组阳性ES细胞克隆。结论:TSC21基因敲除打靶载体构建成功并筛选到同源重组阳性ES细胞克隆。 展开更多
关键词 TSC21 基因敲除 打靶载体 同源重组 小鼠
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