猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达 被引量：1

1

作者 殷学梅 夏日炜 +3 位作者 孙丽 朱国强 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期847-851,共5页

试验旨在构建猪BPI真核表达载体,获得猪源BPI重组蛋白。根据GenScript’s CloneEZ?PCR Cloning Kit试剂盒,将BPI编码序列克隆至pUC57载体上,酶切与测序鉴定无误后,将重组质粒pUC57-BPI转染293-6E细胞,并利用SDS-PAGE和Western blotting... 试验旨在构建猪BPI真核表达载体,获得猪源BPI重组蛋白。根据GenScript’s CloneEZ?PCR Cloning Kit试剂盒,将BPI编码序列克隆至pUC57载体上,酶切与测序鉴定无误后,将重组质粒pUC57-BPI转染293-6E细胞,并利用SDS-PAGE和Western blotting方法检测其表达水平。结果显示,本试验成功构建了猪源BPI蛋白真核表达载体pUC57-BPI,并在293-6E细胞培养上清中检测到猪源BPI重组蛋白的表达。该猪源BPI重组蛋白体外表达系统的建立为今后深入研究猪BPI的生物学功能以及猪抗菌蛋白的制备提供了试验基础。 展开更多

关键词 猪 BPI蛋白 真核表达

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LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析 被引量：17

2

作者 孙丽 夏日炜 +4 位作者 殷学梅 喻礼怀 朱国强 吴圣龙 包文斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1095-1101,共7页

本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞... 本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞受到产肠毒素大肠杆菌侵扰发生炎症反应的相关分子反应机理。结果发现,两种浓度的LPS均使得所检测的TLR4及其信号通路相关基因表达量上调,诱导后4~6h的表达量急速上升,且高浓度的LPS诱导处理后各基因表达量上调倍数明显高于低浓度LPS诱导时各基因表达量上调倍数,高浓度的LPS对机体肠道的刺激引起了更为强烈的免疫反应,使正常机体更快地产生炎症反应。由此推测,大肠杆菌侵染猪肠道后将释放LPS,TLR4作为LPS的受体,受LPS诱导其表达量上调,进而引起TLR4信号途径的信号传递,传递过程中由于MyD88的依赖机制,MyD88表达量上调相对稳定,再经过级联免疫放大效应,大量的促炎细胞因子释放,导致炎症及腹泻水肿病的产生。 展开更多

关键词 猪 TLR4基因 信号通路 细胞因子

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胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响 被引量：42

3

作者 朱世平 孙丽 +3 位作者 殷学梅 侯小亮 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期197-200,共4页

为了研究胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响,根据江苏省某国家级生猪核心育种场2009—2011年出生的繁殖母猪资料,分别选取128头杜洛克、681头长白和610头大白母猪共7280窝生产数据,统计分析不同胎次母猪的总产仔数、产活仔数... 为了研究胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响,根据江苏省某国家级生猪核心育种场2009—2011年出生的繁殖母猪资料,分别选取128头杜洛克、681头长白和610头大白母猪共7280窝生产数据,统计分析不同胎次母猪的总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重及校正21日龄窝重。此外,依据胎次将母猪分为3个繁殖阶段（1-2胎、3-6胎及7-8胎）来探究品种差异对母猪繁殖性能的影响。结果表明：胎次对母猪繁殖性能有显著影响（P〈0.05）,母猪1-4胎的总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数及初生窝重随胎次呈增加趋势,第4胎达到高峰,且显著高于其他胎次（P〈0.05）;3-6胎繁殖性能较好,7胎之后出现迅速下降趋势;除在第4胎略有下降外,其他胎次的校正21日龄窝重随胎次递增。品种对母猪繁殖性能的影响显著（P〈0.05）,长白和大白母猪的繁殖性能均极显著高于杜洛克母猪（P〈0.01）;长白母猪的产活仔数和校正21日龄窝重显著高于大白母猪（P〈0.05）,2个品种其他繁殖性能无显著差异（P〉0.05）。综上所述,杜洛克、长白和大白母猪的最佳繁殖胎次为3-6胎,长白猪的繁殖性能总体上优于大白猪,就本试验所在的育种场而言,长白猪可能更适合作为二元母猪生产中的母本。 展开更多

关键词 胎次 母猪 繁殖性能

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心脏介入诊疗术中并发急性心血管事件患者行呼吸阶梯化管理的护理 被引量：10

4

作者 王玉如 何英 +5 位作者 周丽华 胡玉芳 陈桂花 殷学梅 周燕 孙国珍 《解放军护理杂志》 CSCD 2015年第4期52-54,共3页

目的探讨心脏介入诊疗术中并发急性心血管事件患者采用呼吸阶梯化管理的护理效果。方法 2012年1月至2013年12月,南京医科大学第一附属医院心导管室对254例心脏介入诊疗术中发生急性心血管事件患者采用呼吸阶梯化管理,并给予相应的护理... 目的探讨心脏介入诊疗术中并发急性心血管事件患者采用呼吸阶梯化管理的护理效果。方法 2012年1月至2013年12月,南京医科大学第一附属医院心导管室对254例心脏介入诊疗术中发生急性心血管事件患者采用呼吸阶梯化管理,并给予相应的护理措施。结果 237例(93.31%)患者顺利完成手术,安全转至病房;9例(3.54%)患者行气管插管和呼吸机辅助呼吸后转入ICU或CCU进一步治疗;8例(3.15%)患者因原发病危重而死亡。结论心脏介入诊疗术中并发急性心血管事件者经呼吸阶梯化管理及相应的护理,可提高呼吸管理效果,保证手术的顺利完成和提高抢救成功率。 展开更多

关键词 心脏介入诊疗术 急性心血管事件 呼吸阶梯化管理 护理

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猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价 被引量：3

5

作者 吴正常 殷学梅 +4 位作者 夏日炜 孙寿永 朱国强 吴圣龙 包文斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期491-496,共6页

本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体,为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因(GenBank登录号:EF436278)全长编码区序列,设计其特异性发夹siRNA干扰片段,并将其克隆插入pcDNA 6... 本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体,为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因(GenBank登录号:EF436278)全长编码区序列,设计其特异性发夹siRNA干扰片段,并将其克隆插入pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR干扰载体中,构建猪BPI基因4个干扰siRNA表达载体RB1、RB2、RB3和RB4,1个阴性对照NC,并通过PCR和测序进行验证,构建成功后转染猪小肠上皮细胞IPEC-J2并检测其干扰效率。结果发现,所构建的4个特异性siRNA载体均可显著降低猪BPI基因mRNA表达(P<0.05),其中RB4载体干扰效果最好,其干扰效率达到69%。本研究成功筛选可靶向干扰猪BPI基因的高效siRNA,为今后在细胞水平进一步研究BPI基因对猪肠道革兰阴性菌感染抗性的作用及其机制奠定了试验基础。 展开更多

关键词 猪 BPI基因 siRNA载体 RNA干扰

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猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价 被引量：2

6

作者 訾臣 夏日炜 +4 位作者 殷学梅 喻礼怀 朱国强 吴圣龙 包文斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期657-664,共8页

髓性分化因子88(MyD88)作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白,在免疫应答和疾病防御中起重要作用,作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞,为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪... 髓性分化因子88(MyD88)作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白,在免疫应答和疾病防御中起重要作用,作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞,为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体,通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平,筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体,将其包装成慢病毒载体,用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞,达到基因功能分析的要求。MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得,为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。 展开更多

关键词 猪 MyD88基因 基因沉默 慢病毒载体

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互动与手指操干预对老年糖尿病患者认知功能的影响 被引量：11

7

作者 王晓翠 房芳 +2 位作者 倪洁 殷学梅 曹丽娟 《护理学杂志》 2012年第19期25-26,共2页

目的探讨互动与手指操干预对老年糖尿病患者认知功能的改善作用。方法将60例老年糖尿病并存轻度认知功能障碍患者随机分为两组各30例。对照组采用常规护理方法,观察组在常规方法上增加互动与手指操干预,拓展延伸服务,持续6个月后用MMSE... 目的探讨互动与手指操干预对老年糖尿病患者认知功能的改善作用。方法将60例老年糖尿病并存轻度认知功能障碍患者随机分为两组各30例。对照组采用常规护理方法,观察组在常规方法上增加互动与手指操干预,拓展延伸服务,持续6个月后用MMSE、ADL评价效果。结果观察组干预后MMSE评分高于对照组干预后及本组干预前,ADL评分低于对照组干预后及本组干预前(P<0.05,P<0.01)。结论老年糖尿病患者的认知水平随时间的推移呈下降趋势,互动与手指操干预可以有效地延缓认知障碍的发展。 展开更多

关键词 糖尿病 轻度认知功能障碍 手指操 互动训练 益智训练 综合护理干预

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冠状动脉无保护左主干病变介入治疗的护理 被引量：3

8

作者 史冬梅 周丽华 +2 位作者 殷学梅 陈牧 许艳玲 《护士进修杂志》 2012年第2期152-153,共2页

左冠状动脉主干狭窄是指冠状动脉粥样硬化病变累及左冠状动脉主干使其管腔狭窄。左主干病变约占冠心病患者的4％～6％，由于左主干血管支配整个左心系统，一旦血流被阻断，易出现严重的心肌缺血并发症，如心室颤动、心跳骤停或心源性休克，

关键词 冠状动脉 无保护左主干 介入治疗 护理

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猪LTβR基因克隆、结构功能预测、组织表达谱分析及真核表达载体构建

9

作者 吴正常 戴超辉 +3 位作者 殷学梅 孙寿永 包文斌 吴圣龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2135-2145,共11页

为了进一步探究猪LTβR基因的生物学功能,本研究以猪淋巴组织cDNA为模板扩增LTβR基因CDS区,进一步利用生物信息学对猪LTβR蛋白结构与功能以及参与的GO和Pathway通路进行分析,利用Real-time PCR检测LTβR基因在大白猪不同组织中的表达... 为了进一步探究猪LTβR基因的生物学功能,本研究以猪淋巴组织cDNA为模板扩增LTβR基因CDS区,进一步利用生物信息学对猪LTβR蛋白结构与功能以及参与的GO和Pathway通路进行分析,利用Real-time PCR检测LTβR基因在大白猪不同组织中的表达水平,同时将LTβR基因扩增产物克隆至真核表达载体pEGFPC1中,并分别转染猪HEK293和IPEC-J2小肠上皮细胞系,通过显微镜观察其表达情况。结果表明,克隆获得猪LTβR基因CDS区全长为1 209bp,编码402个氨基酸,发现LTβR为脂溶亲水性的不稳定蛋白,存在1个跨膜结构(205~227aa),不存在信号肽,亚细胞定位表明LTβR为非分泌型蛋白。LTβR蛋白具有2个糖基化位点,18个潜在的磷酸化位点,其中包括PKC、CKI、CDC2、GSK3、CDK5、INSR等10种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点。该蛋白保守区域为2个TNFR superfamily,分别位于32~125和128~192位氨基酸,并发现C422T>A141V突变位于该区域内。KEGG和GO分析发现,LTβR基因共参与12项GO功能分类,同时还参与NF-kappa B信号通路、IgA合成的肠道免疫网络等5项调控通路。定量检测发现,LTβR基因在大白猪肺中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01),在肾和脾等免疫器官,十二指肠和空肠等肠道组织中也均有较高的表达水平。细胞水平转染试验及显微镜观察发现其在猪HEK293和IPEC-J2两种细胞中均表达。本研究为猪LTβR基因及其介导的信号通路的功能分析提供了材料和依据,今后有必要在细胞水平上进一步验证分析猪LTβR基因及其介导的信号通路在猪抵抗细菌感染过程中发挥的重要作用,同时将C422T突变作为猪抗病育种的一个潜在遗传标记进行系统分析。 展开更多

关键词 猪 LTβR基因 克隆 真核表达载体 蛋白结构与功能

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经皮冷冻球囊导管消融治疗阵发性心房颤动患者的术中护理 被引量：10

10

作者 王玉如 周燕 +4 位作者 胡玉芳 陈桂花 何英 殷学梅 田金萍 《护理学杂志》 CSCD 2014年第21期27-29,共3页

对6例阵发性心房颤动患者行经皮冷冻球囊导管消融术,均顺利完成手术,术中及术后未发生膈神经麻痹等手术相关并发症。全面了解冷冻球囊导管消融手术过程,做好术前准备,熟悉各种物品及设备的使用方法和注意事项;术中给予患者心理支持,了... 对6例阵发性心房颤动患者行经皮冷冻球囊导管消融术,均顺利完成手术,术中及术后未发生膈神经麻痹等手术相关并发症。全面了解冷冻球囊导管消融手术过程,做好术前准备,熟悉各种物品及设备的使用方法和注意事项;术中给予患者心理支持,了解不良症状发生情况,严密观察生命体征,监测活化凝血酶原时间,加强气胸、急性心脏压塞、膈神经麻痹、血管迷走神经反射、疼痛、咳嗽等症状的监护,是确保手术顺利完成的重点措施。 展开更多

关键词 阵发性心房颤动 冷冻球囊导管消融 术中护理

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基于主成分分析构建大白猪一般抗病力的评估模型 被引量：1

11

作者 夏日炜 孙丽 +3 位作者 殷学梅 程洪青 吴圣龙 包文斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期986-990,共5页

为构建大白猪一般抗病力的评估模型,本研究分别检测了30日龄大白猪血清中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β、TNF-α和IFN-γ8个重要细胞因子的浓度,并对这8个指标进行了主成分分析。结果显示,选取前5个特征值作为5个主成分(累... 为构建大白猪一般抗病力的评估模型,本研究分别检测了30日龄大白猪血清中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β、TNF-α和IFN-γ8个重要细胞因子的浓度,并对这8个指标进行了主成分分析。结果显示,选取前5个特征值作为5个主成分(累计贡献率达到87.721%),基本上反映了原先免疫指标的全部信息;通过建立主成分综合评价模型,比较30日龄腹泻及健康大白猪断奶仔猪的主成分综合得分,健康组断奶仔猪综合得分为0.080,而腹泻组断奶仔猪综合得分为-0.009。本研究初步确定了影响大白猪一般抗病力的主成分,并且对其进行了初步验证,为今后大白猪一般抗病力的早期选育提供了一定的指导和依据。 展开更多

关键词 猪 一般抗病力 主成分分析

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