龙胆泻肝汤抑制葡萄膜炎大鼠Notch信号通路活化的作用 被引量：11

1

作者 殷学伟 刘滨 +3 位作者 魏慧霞 唐凯 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第7期615-619,共5页

目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan Decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠Notch信号通路活化的抑制作用及其对辅助性T细胞17(T helper 17,Th17)和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)... 目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan Decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠Notch信号通路活化的抑制作用及其对辅助性T细胞17(T helper 17,Th17)和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)表达水平的影响。方法随机将雌性Lewis大鼠分为正常对照(NC)组、EAU模型组、LXD干预组。EAU模型组和LXD干预组大鼠诱导EAU,免疫后LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理,EAU模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃。免疫后12 d观察大鼠眼部炎症表现,取三组大鼠眼球进行病理切片,观察病理学变化;实时荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,QT-PCR)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1、DLL4、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)和IL-17 mRNA及蛋白的表达;流式细胞仪检测三组大鼠各组织中Th17、Treg细胞的表达。结果病理检查结果表明,LXD对EAU大鼠眼部组织结构有明显的保护作用。QT-PCR和ELISA检测结果发现,与NC组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1、DLL4、IL-10、IL-17 mRNA和蛋白表达水平均升高,但除IL-10外,其他明显低于EAU模型组(均为P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,EAU模型组大鼠的各组织中Th17/Treg比例均高于NC组,经LXD干预后,Th17细胞表达水平下降,Treg表达水平升高,两者比例趋向平衡。结论 LXD可有效降低EAU大鼠脾脏、淋巴结、眼组织中Notch1、DLL4、IL-10和IL-17 mRNA和蛋白的表达水平,改善Th17/Treg细胞比例的平衡,从而有效减轻EAU大鼠的眼部炎症,保护眼部组织结构,调节全身及眼部的免疫状态。 展开更多

关键词 龙胆泻肝汤 实验性自身免疫性葡萄膜炎 辅助性T细胞 调节性T细胞 NOTCH1 DLL4

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龙胆泻肝汤对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的干预作用 被引量：10

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作者 刘滨 荣立洋 +4 位作者 孙园园 殷学伟 唐凯 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第2期106-110,共5页

目的探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠Notch信号通路相关基因表达的影响。方法 Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和龙胆泻肝汤干预组,后两组诱导EAU模型,龙胆泻肝... 目的探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠Notch信号通路相关基因表达的影响。方法 Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和龙胆泻肝汤干预组,后两组诱导EAU模型,龙胆泻肝汤干预组造模后用龙胆泻肝汤灌胃。免疫后12 d分别分离三组大鼠的脾脏和淋巴结收集CD4+T细胞,流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的表达水平;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测Notch1、Notch2、Notch3、Notch4基因的表达情况;ELISA检测Notch信号通路相关蛋白的表达水平。结果流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞水平明显升高,Treg细胞水平降低;与EAU模型组相比,龙胆泻肝汤干预组大鼠的Th17细胞水平明显下降,Treg细胞水平升高,两者比例逐渐恢复均衡;q RT-PCR检测发现龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4基因的表达在免疫后12 d高于正常对照组(均为P<0.01),但显著低于EAU模型组(均为P<0.01),Notch3基因在大鼠脾脏和淋巴结未检测到表达;ELISA检测结果发现,龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4蛋白表达水平在免疫后12 d虽然高于正常对照组(均为P<0.01),但显著低于EAU模型组大鼠(均为P<0.01)。结论龙胆泻肝汤可有效缓解EAU大鼠中Th17/Treg比例失衡状态,其作用机制可能涉及到Notch信号通路调节的na6ve CD4+T细胞向Th17和Treg细胞的分化。 展开更多

关键词 龙胆泻肝汤 葡萄膜炎 NOTCH基因 TH17/TREG细胞

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rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用 被引量：2

3

作者 刘滨 孙园园 +4 位作者 殷学伟 唐凯 王慧 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第4期301-305,共5页

目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-A眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达(均为P<0.01);Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠(均为P<0.05)。结论 rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。 展开更多

关键词 rno-miR-30b-5p Atg5 Atg12 Becn1 葡萄膜炎

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rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用 被引量：3

4

作者 殷学伟 刘滨 +3 位作者 魏慧霞 唐凯 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期12-16,共5页

目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组(1. 00),免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0. 41±0. 12、0. 37±0. 09和0. 25±0. 07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组(均为P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论 rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。 展开更多

关键词 rno-miR-30b-5p NOTCH1 DLL4 实验性自身免疫性葡萄膜炎

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龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用 被引量：5

5

作者 殷学伟 郭励劼 +3 位作者 周梦贤 邱岩 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第5期408-412,共5页

目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导... 目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导并建立EAU模型,LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理12 d,EAU组大鼠给予相同体积的PBS缓冲液灌胃处理12 d。实时荧光定量PCR(Q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中iNOS和Arg1 mRNA及蛋白的表达;此外,采用流式细胞仪检测以上各组织中M1型、M2型巨噬细胞极化水平,分析LXD对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。结果免疫后12 d,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠各组织中iNOS mRNA和蛋白表达均升高,而Arg1 mRNA和蛋白表达均降低(均为P<0.05);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中iNOS表达均降低,而Arg1表达均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低(均为P<0.05),呈现不均衡表达;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平下降,而M2型巨噬细胞极化水平升高,两者比例逐渐恢复均衡。结论在EAU大鼠中,M1/M2巨噬细胞极化比例紊乱,LXD可明显降低M1型巨噬细胞极化水平以及相关因子iNOS表达,提高M2型巨噬细胞极化水平以及相关因子Arg1表达,从而发挥对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。 展开更多

关键词 龙胆泻肝汤 实验性自身免疫性葡萄膜炎 INOS Arg1 M1/M2巨噬细胞极化

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单核苷酸多态性与葡萄膜炎发生的研究进展

6

作者 殷学伟 刘滨 +1 位作者 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第8期790-793,共4页

葡萄膜炎是一类临床常见的致盲性眼病,病因复杂,可造成眼组织不可逆性损害。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)是个体间表型差异的主要原因,可以影响人类疾病的发展。SNPs是由DNA序列上单个碱基变异造成的,具有髙... 葡萄膜炎是一类临床常见的致盲性眼病,病因复杂,可造成眼组织不可逆性损害。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)是个体间表型差异的主要原因,可以影响人类疾病的发展。SNPs是由DNA序列上单个碱基变异造成的,具有髙频、稳定和易分析等特点,是研究疾病易感基因的重要手段。近年来文献报道,基因SNPs与葡萄膜炎发病密切相关,本文就基因SNPs与葡萄膜炎发生的相关性研究进展进行综述,为葡萄膜炎相关性研究提供思路。 展开更多

关键词 单核苷酸多态性 葡萄膜炎 易感基因

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miR-30b-5p抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

7

作者 殷学伟 郭励劼 +3 位作者 周梦贤 屈如意 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第2期99-103,共5页

目的探讨miR-30b-5p对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Notch信号通路活化的调控机制及治疗作用。方法通过Target Scan(http//www.targetscan.org/)对Notch1和Dll4基因与miR-30b的关系进行生物信息学预测。将雌性Lewis大鼠随机分为对... 目的探讨miR-30b-5p对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Notch信号通路活化的调控机制及治疗作用。方法通过Target Scan(http//www.targetscan.org/)对Notch1和Dll4基因与miR-30b的关系进行生物信息学预测。将雌性Lewis大鼠随机分为对照组、EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p空载体(miR-30b-5p-N)组。EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠首先诱导EAU模型,miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠分别采用携带miR-30b-5p和miR-30b-5p-N的慢病毒于EAU大鼠脾脏进行注射干预处理,EAU组大鼠于同一部位注射相同体积的生理盐水。处理后12 d,实时荧光定量PCR检测4组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA的表达;免疫组织化学检测4组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达,分析miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的调控作用。结果生物信息学预测分析结果表明,Notch信号通路上Notch1和Dll4基因均为miR-30b调控的靶基因。免疫后12 d,相比于对照组,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA水平均升高(均为P<0.05);经miR-30b-5p干预治疗后,miR-30b-5p组脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA表达均显著降低(均为P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,免疫后12 d,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白表达均上调(均为P<0.05);miR-30b-5p干预治疗后,脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白表达均显著下调(均为P<0.05)。结论miR-30b-5p可明显下调EAU大鼠各组织中Notch1和Dll4等Notch信号通路相关分子的表达进而抑制Notch信号通路活化,从而达到治疗葡萄膜炎的作用。 展开更多

关键词 实验性自身免疫性葡萄膜炎 miR-30b-5p NOTCH1 DLL4 NOTCH信号通路

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电针对负透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中表皮生长因子及其受体表达的作用 被引量：8

8

作者 吴姗姗 魏慧霞 +4 位作者 郭滨 殷学伟 刘德政 郭大东 毕宏生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第4期318-322,共5页

目的观察表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)经电针干预后在近视豚鼠睫状肌中的表达变化,探讨其在近视发生发展中的作用。方法将90只2周龄健康三色短毛豚鼠随机分为正常对照(no... 目的观察表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)经电针干预后在近视豚鼠睫状肌中的表达变化,探讨其在近视发生发展中的作用。方法将90只2周龄健康三色短毛豚鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组、透镜诱导型近视(lens-induced myopia,LIM)组和透镜诱导型近视电针(lens-induced myopia+electroacupuncture,LIM+EA)组,每组各30只。NC组豚鼠正常饲养,不做任何干预;LIM组和LIM+EA组豚鼠右眼均戴-6 D透镜诱导近视,左眼作为自身对照不做任何处理;LIM+EA组豚鼠在戴镜同时选取双侧太阳穴、合谷穴进行电针干预。各组豚鼠造模后2周、4周进行屈光度和眼轴长度的检测,分别制备组织病理切片观察睫状肌的形态;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组豚鼠睫状肌中EGF mRNA、EGFR mRNA及其蛋白表达水平。结果造模后2周、4周,LIM组和LIM+EA组造模眼分别与自身对照眼及NC组右眼相比,近视屈光度均增加,眼轴均延长,LIM+EA组造模眼较LIM组造模眼近视屈光度减小,眼轴延长减缓,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。病理检测结果显示,NC组睫状肌纤维完整、排列有序;LIM组睫状肌纤维断裂、溶解,排列混乱;LIM+EA组睫状肌纤维相对完整,排列有序。q-PCR及ELISA检测结果表明,LIM组右眼睫状肌中EGF mRNA、EGFR mRNA及其蛋白表达水平与NC组和LIM+EA组相比均明显降低(均为P<0.05),而LIM+EA组和NC组EGF mRNA、EGFR mRNA及其蛋白表达水平差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论电针干预近视豚鼠可影响睫状肌中EGF和EGFR的表达水平并能延缓近视发展。 展开更多

关键词 表皮生长因子 表皮生长因子受体 电针 负透镜诱导型近视 睫状肌

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龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠补体C4、MBL2表达的影响 被引量：17

9

作者 魏慧霞 殷学伟 +2 位作者 吴姗姗 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第2期105-109,共5页

目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠的治疗作用及对血清中C4、MBL2蛋白表达水平的影响。方法54只Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU组和... 目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠的治疗作用及对血清中C4、MBL2蛋白表达水平的影响。方法54只Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU组和LXD组,其中EAU组、LXD组大鼠制备EAU模型,LXD组造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU组给予等量生理盐水灌胃。免疫后12 d使用激光扫描检眼镜(scanning laser ophthalmoscope,SLO)观察三组大鼠眼底炎症,并取三组大鼠同侧眼球进行病理切片,观察视网膜组织病理学变化;分离三组大鼠的脾脏和淋巴结,收集T淋巴细胞,流式细胞仪检测CD4^+/CD8^+细胞比例的变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中C4、MBL2蛋白的表达水平。结果SLO检查结果显示,与正常对照组相比,EAU组大鼠屈光间质不清,无法观察眼底视网膜及血管情况;LXD组大鼠眼底血管迂曲扩张,屈光间质混浊,视盘边界模糊不清,但较EAU组大鼠症状轻。组织病理学检查结果显示,与正常对照组相比,EAU组大鼠眼组织结构紊乱,视网膜全层破坏,视网膜内可见大量炎性细胞浸润;LXD组大鼠视网膜仅表现为轻、中度炎性细胞浸润。流式细胞仪检测结果发现,EAU组大鼠脾脏、淋巴结中CD4^+/CD8^+比值均高于正常对照组;LXD组大鼠的CD4^+T细胞表达水平下降,CD8^+T细胞表达水平升高,两者比例趋于平衡。ELISA检测结果发现,与正常对照组相比,EAU组大鼠免疫后12 d、16 d、20 d血清C4蛋白水平均显著升高,与EAU组相比,LXD组免疫后12 d、16 d、20 d血清C4蛋白水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);同时,EAU组各时间点血清MBL2蛋白水平明显降低,而LXD组较EAU组各时间点血清MBL2蛋白水平均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论LXD可有效缓解EAU大鼠眼内炎症,改善脾脏、淋巴结中CD4^+/CD8^+细胞比例失衡,同时降低血清中补体C4蛋白表达水平,上调MBL2蛋白表达水平,促进补体系统恢复平衡,加快葡萄膜炎的炎症消退,从而达到治疗EAU的作用。 展开更多

关键词 龙胆泻肝汤 实验性自身免疫性葡萄膜炎 C4 MBL2

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龙胆泻肝汤抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠Th1、Th2细胞分化的影响 被引量：7

10

作者 周梦贤 殷学伟 +3 位作者 郭励劼 邱岩 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第6期506-510,共5页

目的探讨龙胆泻肝汤(LXD)对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD... 目的探讨龙胆泻肝汤(LXD)对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD干预组大鼠造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃。干预后12 d分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测Rbpj基因的表达,ELISA检测Rbpj、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)蛋白的表达,流式细胞仪检测各组织中Th1、Th2细胞的表达水平,分析Th1/Th2细胞比例的变化。结果干预后12 d,Q-PCR检测发现,与正常对照组大鼠相比,Rbpj mRNA在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中均呈显著上调表达(均为P<0.001);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj mRNA相对表达水平均显著降低(均为P<0.01)。ELISA检测结果发现,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj和IFN-γ蛋白表达水平均明显高于正常对照组,IL-4蛋白表达水平均明显低于正常对照组(均为P<0.05);相比于EAU模型组,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中Rbpj IFN-γ蛋白表达水平均显著降低,IL-4蛋白表达水平均显著升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Th1细胞水平均明显升高,Th2细胞水平均明显降低,Th1/Th2细胞比例失衡(均为P<0.05);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中Th1细胞水平均明显下降,Th2细胞水平均明显升高,两者细胞比例逐渐恢复均衡(均为P<0.01)。结论LXD可通过下调EAU大鼠Notch信号通路转录因子Rbpj的表达水平抑制Notch信号通路的活化,显著促进EAU大鼠中Th1/Th2细胞比例恢复平衡并改善免疫微环境,从而达到治疗葡萄膜炎的目的。 展开更多

关键词 龙胆泻肝汤 实验性自身免疫性葡萄膜炎 Th1/Th2细胞比例 干扰素-γ 白细胞介素-4

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非编码RNA在葡萄膜炎发生发展过程中的调控作用研究进展 被引量：2

11

作者 魏慧霞 殷学伟 +1 位作者 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第1期86-89,共4页

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是真核细胞中一类不编码蛋白质但具有重要生物学功能的RNA分子,具有调控转录翻译过程、维持mRNA和蛋白质稳定、剪切和修饰RNA等重要的生物学功能,可参与胚胎发育、组织分化等基本的生命活动,以及调控疾... 非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是真核细胞中一类不编码蛋白质但具有重要生物学功能的RNA分子,具有调控转录翻译过程、维持mRNA和蛋白质稳定、剪切和修饰RNA等重要的生物学功能,可参与胚胎发育、组织分化等基本的生命活动,以及调控疾病的发生和发展过程。越来越多的研究显示,ncRNA与葡萄膜炎发病关系密切相关,为葡萄膜炎治疗提供了新的思路。本文就ncRNA在葡萄膜炎发生发展过程中的调控作用研究进展进行综述。 展开更多

关键词 非编码RNA 葡萄膜炎 调控作用

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miR-223-3p靶向调控Rbpj转录因子对葡萄膜炎大鼠Th1和Th17细胞分化的影响 被引量：2

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作者 周梦贤 屈如意 +3 位作者 殷学伟 郭励劼 邱岩 郭大东 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期769-774,共6页

目的:探讨miR-223-3p对Notch信号通路转录因子Rbpj表达的调控作用以及对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th17细胞分化水平的影响。方法:用双荧光素酶表达报告系统探讨miR-223-3p对Rbpj基因表达的调控作用。将24只雌性Lewis大鼠... 目的:探讨miR-223-3p对Notch信号通路转录因子Rbpj表达的调控作用以及对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th17细胞分化水平的影响。方法:用双荧光素酶表达报告系统探讨miR-223-3p对Rbpj基因表达的调控作用。将24只雌性Lewis大鼠随机分为EAU模型组、正常对照组(NC组)和空白对照组(BC组),每组8只。EAU模型组注射含光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)、结核菌素和完全弗氏佐剂的乳糜液以诱导葡萄膜炎,BC组注射等体积的不含IRBP多肽的乳糜液,NC组注射等体积的无菌生理盐水。免疫后12d,无菌分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测miR-223-3p和Rbpj基因的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白的表达水平;流式细胞仪检测三组大鼠不同组织中Th1和Th17细胞的表达水平。结果:双荧光素酶检测结果证实Rbpj是miR-223-3p调控的靶基因。免疫后12d,相比于NC组,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p相对表达水平分别为0.33±0.29、0.11±0.12、0.18±0.11,均呈下调表达(均P<0.05);Rbpj mRNA水平均呈上调表达,分别为3.00±0.06、1.52±0.12、3.01±0.34(均P<0.05);BC组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p和Rbpj mRNA水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。ELISA检测结果发现,免疫后12d的EAU模型组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平均明显高于NC组(均P<0.05),BC组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12d,EAU模型组各组织的Th1和Th17细胞比例均显著高于NC组(均P<0.05)。BC组与NC组各组织Th1和Th17细胞比例无明显变化(均P>0.05)。结论:miR-223-3p可负调控Notch信号通路转录因子Rbpj的表达。EAU大鼠中miR-223-3p的下调表达可升高Rbpj基因和蛋白的表达水平,促进Th1和Th17细胞的分化以及提高相关分子IFN-γ和IL-17的表达水平,进而影响葡萄膜炎的发生发展。 展开更多

关键词 miR-223-3p Rbpj 实验性自身免疫性葡萄膜炎 TH1 TH17 IFN-γ IL-17

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Notch信号通路在眼科疾病发生发展中的调控作用

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作者 周梦贤 李土玲 +2 位作者 殷学伟 毕宏生 郭大东 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第10期1707-1710,共4页

Notch信号通路是一种进化上高度保守的信号通路,广泛存在于各类组织细胞中,在胚胎发育、细胞增殖、分化和凋亡,维持多细胞生物稳态、血管生成以及多种癌症的发生发展过程中起重要作用。近年来研究发现Notch信号通路在白内障、葡萄膜炎... Notch信号通路是一种进化上高度保守的信号通路,广泛存在于各类组织细胞中,在胚胎发育、细胞增殖、分化和凋亡,维持多细胞生物稳态、血管生成以及多种癌症的发生发展过程中起重要作用。近年来研究发现Notch信号通路在白内障、葡萄膜炎、视网膜病变等多种眼科疾病中会表现为异常活化,调控着相关眼科疾病的发生和发展过程。本文就Notch信号通路在眼科疾病发生发展过程中的调控作用做简要综述。 展开更多

关键词 NOTCH信号通路 白内障 葡萄膜炎 年龄相关性黄斑变性 调控作用

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miR-223-3p调控NLRP3炎症小体对自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响 被引量：3

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作者 屈如意 周梦贤 +2 位作者 彭媛 殷学伟 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第1期7-12,共6页

目的探讨miR-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。方法首先构建双荧光素酶报告质粒载体,并验证miR-223-3p对NLRP3基因表达的调控作... 目的探讨miR-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。方法首先构建双荧光素酶报告质粒载体,并验证miR-223-3p对NLRP3基因表达的调控作用。然后将48只健康Lewis雌性大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAU组和miR-223-3p慢病毒组,每组16只。EAU组和miR-223-3p慢病毒组大鼠首先用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)乳糜液诱导EAU模型,同时miR-223-3p慢病毒组每只大鼠双眼玻璃体内注射8μL携带miR-223-3p的慢病毒,造模12 d后麻醉处死大鼠,分离各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织。实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p、NLRP3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)的基因表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)以及NLRP3的蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中M1、M2型巨噬细胞水平。结果双荧光素酶表达报告系统检测证实NLRP3是miR-223-3p调控的靶基因。与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p的表达水平均降低(均为P<0.05),而NLRP3和iNOS的mRNA表达水平均升高(均为P<0.05),M1型巨噬细胞相关因子iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中NLRP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均降低,而Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低,M1/M2巨噬细胞比例升高(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠M1型巨噬细胞极化水平降低,而M2型巨噬细胞极化水平升高,M1/M2巨噬细胞比例逐渐恢复平衡(均为P<0.05)。结论EAU大鼠体内巨噬细胞极化失衡,提高miR-223-3p水平可抑制NLRP3炎症小体的表达,进而抑制炎症相关信号通路,降低M1型巨噬细胞极化水平以及提高M2型巨噬细胞极化水平,从而发挥对葡萄膜炎大鼠巨噬细胞极化平衡的调控作用。 展开更多

关键词 miR-223-3p NLRP3炎症小体 葡萄膜炎 巨噬细胞极化

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