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重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定
1
作者
郑娟
郭怀祖
+5 位作者
李晶
段树燕
赵自叶
张大鹏
郭尚敬
王皓
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期186-192,共7页
蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶...
蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。
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关键词
重组内肽酶AspN
原核表达
纯化
活性鉴定
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职称材料
题名
重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定
1
作者
郑娟
郭怀祖
李晶
段树燕
赵自叶
张大鹏
郭尚敬
王皓
机构
聊城大学药学院
抗体药物与靶向治疗国家重点实验室
第二军医大学肿瘤研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期186-192,共7页
文摘
蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。
关键词
重组内肽酶AspN
原核表达
纯化
活性鉴定
Keywords
recombinant endoproteinase AspN
prokaryotic expression
purification
activity assay
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
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被引量
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1
重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定
郑娟
郭怀祖
李晶
段树燕
赵自叶
张大鹏
郭尚敬
王皓
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
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