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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：17
1
作者 武昱孜 熊祺琰 +5 位作者 刘蓓蓓 张珍珍 王佳 华利忠 韦艳娜 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1491-1498,共8页
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测... 建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%,重复性好。检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%,鼻拭子阳性率22%,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%;猪鼻支原体的肺阳性率为40%,鼻拭子阳性率66%,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪鼻支原体 双重荧光定量PCR
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不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析 被引量：8
2
作者 武昱孜 邢宪平 +3 位作者 韦艳娜 熊祺琰 冯志新 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2365-2373,共9页
对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析... 对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪支原体肺炎 猪肺炎支原体 疫苗株 P46基因 P97基因
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支原体对细胞培养污染的研究概况 被引量：19
3
作者 武昱孜 张旭 +2 位作者 华利忠 刘茂军 邵国青 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第9期112-117,共6页
支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物。被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品... 支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物。被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品报废,且很难清除。一旦发生污染,就意味着试验的失败,造成巨大的人力、物力、财力的浪费。从支原体对细胞培养物污染后造成的危害及对支原体污染的预防、检测、清除等的研究进展进行论述,为细胞支原体污染的防控提供依据和手段。 展开更多
关键词 细胞培养 支原体污染 检测技术 清除
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兔出血症病毒检测方法研究进展 被引量：2
4
作者 武昱孜 贾广乐 +1 位作者 张映 张旭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期170-173,共4页
兔出血症发病率和致死率都很高,感染兔通常48-72 h后死亡,有肝坏死和肺出血为典型特征的组织病变,给养兔业带来了巨大的经济损失。近年来,随着对其研究的不断深入,在兔出血症病毒检测与诊断方面取得了很大的进展。文章系统阐述了兔出血... 兔出血症发病率和致死率都很高,感染兔通常48-72 h后死亡,有肝坏死和肺出血为典型特征的组织病变,给养兔业带来了巨大的经济损失。近年来,随着对其研究的不断深入,在兔出血症病毒检测与诊断方面取得了很大的进展。文章系统阐述了兔出血症病毒检测的研究进展,提出了存在的问题和展望,为更有效地防治此病提供了方便。 展开更多
关键词 兔出血症 检测方法
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猪肺炎支原体致病机理研究进展 被引量：17
5
作者 李彦伟 刘茂军 +4 位作者 武昱孜 张旭 李桂兰 张映 邵国青 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期84-88,共5页
猪肺炎支原体是猪支原体肺炎的主要病原。近年来对该病原研究较多,但主要都集中在基因和膜蛋白方面。论文从猪肺炎支原体基因结构、黏附蛋白、蛋白组学和猪肺炎支原体的细胞炎性因子反应等方面对猪肺炎支原体的致病机理进行综述,为相关... 猪肺炎支原体是猪支原体肺炎的主要病原。近年来对该病原研究较多,但主要都集中在基因和膜蛋白方面。论文从猪肺炎支原体基因结构、黏附蛋白、蛋白组学和猪肺炎支原体的细胞炎性因子反应等方面对猪肺炎支原体的致病机理进行综述,为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 致病机理 蛋白组学 细胞炎性因子
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猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析 被引量：4
6
作者 李彦伟 刘茂军 +6 位作者 刘蓓蓓 武昱孜 倪博 白方方 纪燕 张映 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1202-1206,共5页
分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行MTT和NO检测,筛选感染时间和感染剂量,利用间接免疫荧光(IFA)检测细胞上Mhp,通过H2O2和DAPI... 分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行MTT和NO检测,筛选感染时间和感染剂量,利用间接免疫荧光(IFA)检测细胞上Mhp,通过H2O2和DAPI验证细胞损伤。结果:在5×106 CCU感染36h时,细胞活力相同,Mhp168株感染细胞的NO浓度显著高于Mhp168L株(P<0.05);H2O2检测显示Mhp168对细胞的氧化损伤显著高于Mhp168L株,同时都显著高于对照(P<0.01);IFA观察分析显示Mhp168株在细胞上的黏附量高于Mhp168L。DAPI染色显示Mhp168对细胞造成的损伤程度高于Mhp168L。通过优化感染时间和感染剂量,找到了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞损伤的显著差异点,分析了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞的氧化损伤,为深入研究猪肺炎支原体强弱毒株感染细胞的差异机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 感染 上皮细胞 氧化损伤
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猪肺炎支原体黏附猪肾细胞模型建立及体外黏附特性研究 被引量：3
7
作者 张旭 冯志新 +6 位作者 武昱孜 车巧林 刘茂军 熊祺琰 华利忠 李彬 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期772-777,共6页
为了建立猪肺炎支原体全菌体外黏附细胞模型及初步探讨其对不同细胞系的黏附特性,选取实验室保存的Mhp野毒分离株(XLW-1、XLW-2、XLW-3、WX株)、国际标准株232、弱毒疫苗168株感染猪肾传代细胞系(PK15),同时利用本实验室已建立的Mhp间... 为了建立猪肺炎支原体全菌体外黏附细胞模型及初步探讨其对不同细胞系的黏附特性,选取实验室保存的Mhp野毒分离株(XLW-1、XLW-2、XLW-3、WX株)、国际标准株232、弱毒疫苗168株感染猪肾传代细胞系(PK15),同时利用本实验室已建立的Mhp间接免疫荧光检测方法检测各菌株对PK15的黏附特性。结果发现,不同Mhp株全菌均可黏附PK15细胞,但不同菌株黏附能力存在差异。其黏附能力强弱依次为野毒株XLW-1株、WX株、疫苗168株、国际标准株232、野毒株XLW-2、XLW-3株。选取黏附能力较强的XLW-1株,继续探讨其对猪原代气管上皮细胞、猪肺泡上皮细胞(SJPL)、猪肺泡巨噬细胞(3D4/31)、恒河猴肾细胞(Marc145)的黏附性。XLW-1株能在体外黏附不同的细胞系,但对不同细胞的黏附能力存在差异,其中对猪源的原代分离的猪气管上皮细胞、SJPL细胞系、3D4/31细胞系黏附性均较强,而对非猪源的Marc145细胞系的黏附性较弱。本研究结果表明,Mhp全菌体可在多种细胞系上建立黏附感染模型,不同Mhp菌株的黏附能力存在着差异,且同一菌株对不同细胞系的黏附特性也存在差异。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 体外感染模型 黏附特性
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猪鼻支原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
8
作者 王佳 熊祺琰 +6 位作者 华利忠 刘蓓蓓 甘源 冯志新 刘茂军 武昱孜 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1932-1938,共7页
猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,... 猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5μg·mL^(-1);一抗的最佳稀释度为1∶100,作用时间为30min;二抗的最佳稀释浓度为1∶20 000,最佳作用时间为30min;显色时间为10min;阴阳性的判定值为0.27。交叉性试验结果显示,Vlp抗原与猪其他支原体阳性血清及猪常见传染病阳性血清均无交叉反应。在重现性试验中,批内及批间的变异系数均低于10%,证明重现性良好。利用所建立的方法对已知阴性及阳性样本进行检测,结果显示特异性和灵敏度均良好。最后,用建立的方法对人工感染后28d的猪血清和247份临床样品进行检测,感染猪血清抗体呈阳性,建立的Vlp-ELISA方法、吐温20膜蛋白-ELISA方法对不同猪群临床样品检测的阳性率趋势相同。综上所述,建立的Vlp-ELISA方法特异性、稳定性良好,可以广泛用于临床猪鼻支原体血清抗体检测,为该病的检测和防控提供了重要工具。 展开更多
关键词 间接ELISA 猪鼻支原体 血清学诊断 VLP
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顶点赋权图分析法在沼气工程系统中的应用研究 被引量：1
9
作者 孙伟 邵国青 +3 位作者 刘茂军 武昱孜 张旭 华利忠 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期862-867,共6页
利用顶点赋权反馈图分析法分析江苏某猪场沼气系统工程的效益,并建立猪场排泄物无污染的仿真学模型。根据2011年江苏某猪场与年猪粪尿和沼气效益有关的顶点赋权反馈图对其中的权值进行量化,采用量化结果和农户液化气消耗情况及耕地面积... 利用顶点赋权反馈图分析法分析江苏某猪场沼气系统工程的效益,并建立猪场排泄物无污染的仿真学模型。根据2011年江苏某猪场与年猪粪尿和沼气效益有关的顶点赋权反馈图对其中的权值进行量化,采用量化结果和农户液化气消耗情况及耕地面积,建立猪场排泄物无污染的仿真学模型。结果表明:2011年该系统中含有3条正反馈环(沼气能源效益正反馈环、施肥面积正反馈环和沼渣效益正反馈环)及2条负反馈环(沼气浪费负反馈环和沼肥浪费负反馈环)。建立了两套排泄物无污染的仿真学模型的调整方案:一是在平均存栏量(1 728头)不变的情况下与168户农户建立输气管道,供农户使用;二是按比例扩大规模至3 721头,并建立与周边所有361户农户的输气管道,进一步健全沼液灌溉渠,扩大沼液灌溉面积。 展开更多
关键词 顶点赋权反馈图 沼气工程系统 猪 排泄物 效益
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助我高考考满分的四句话
10
作者 武昱孜 《中学生数理化（高二数学、高考数学）》 2021年第24期3-3,M0002,共2页
大家好,作为一个历经高考数学洗礼并在其中小有成就(高考数学获得150分)的学生,我在此和大家分享一下关于高中数学学习的一些心得。(1)“台上一分钟,台下十年功。”说的便是平日课堂与巩固练习的重要性。课堂四十分钟是取得数学高分的... 大家好,作为一个历经高考数学洗礼并在其中小有成就(高考数学获得150分)的学生,我在此和大家分享一下关于高中数学学习的一些心得。(1)“台上一分钟,台下十年功。”说的便是平日课堂与巩固练习的重要性。课堂四十分钟是取得数学高分的制胜法宝,在课堂上,老师会将各个题型的破题点和快捷方法告诉我们,如:哪些题需要数形结合,哪些题需要建模等,都是“有迹可循”的。 展开更多
关键词 高考数学 巩固练习 数形结合 高中数学学习 快捷方法 有迹可循 制胜法宝
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