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骨髓间充质干细胞源性外泌体在大鼠巨结肠模型中的干预性研究及相关机制初探
1
作者
郭柏华
王建峰
+5 位作者
张轶男
张剑峰
樊长河
黄婵
童国煜
曾祥勇
《临床小儿外科杂志》
北大核心
2025年第8期786-792,共7页
目的分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源性外泌体(exosomes)并作用于巨结肠模型大鼠与人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),观察其治疗作用并探讨相关机制。方法通过全骨髓粘附法体外分离、培养和纯化斯泼累格&...
目的分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源性外泌体(exosomes)并作用于巨结肠模型大鼠与人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),观察其治疗作用并探讨相关机制。方法通过全骨髓粘附法体外分离、培养和纯化斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley,SD)大鼠骨髓组织中的BMSCs。采用ExoQuick法从BMSCs培养上清液中分离Exosomes。将30只SD大鼠称重后随机等额分为巨结肠大鼠模型组、对照组和干预组(干预组自尾静脉注射100μg/mL的Exosomes稀释液1 mL干预巨结肠大鼠模型,每日1次,连续7 d)。培养的SH-SY5Y细胞分为Exosomes干预组和对照组。HE染色观察结肠病理学结构改变;实时荧光定量PCR测定结肠组织NOTCH(为一组单次跨膜受体)、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和性别决定取Y框蛋白10基因(SRY-related HMG-box 10,SOX-10)mRNA的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测结肠组织NOTCH、GDNF和Sox10蛋白的表达。四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)和Transwell小室检测细胞增殖和迁移能力。结果采用ExoQuick法分离出的BMSCs源性Exosomes在大小上存在异质性,介于50~120 nm之间,且表达Exosomes特异性标记CD9和CD63。HE染色显示,干预组大鼠结肠组织病理结构改变较模型组轻微。模型组大鼠结肠组织中NOTCH、GDNF和Sox10的mRNA(F=17.420、19.740和25.820,P均<0.001)及蛋白表达(F=7.690、8.470和11.780,P均<0.001)均明显低于对照组,而在干预组大鼠结肠组织较模型组大鼠而言明显升高(F=18.120,P<0.001)。干预组SH-SY5Y细胞NOTCH、GDNF和Sox10较对照组明显升高(t=3.130、2.420和3.340,P<0.05),干预组SH-SY5Y细胞增殖率和划痕后24 h迁移距离均高于对照组(P<0.05)。结论BMSCs源性Exosomes能够改善巨结肠模型大鼠结肠的病理变化,其作用可能是通过调控NOTCH、GDNF和Sox10相关信号通路实现的。
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关键词
外泌体
骨髓间充质干细胞
HIRSCHSPRUNG病
信号通路
大鼠
模型
动物
动物
实验
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职称材料
题名
骨髓间充质干细胞源性外泌体在大鼠巨结肠模型中的干预性研究及相关机制初探
1
作者
郭柏华
王建峰
张轶男
张剑峰
樊长河
黄婵
童国煜
曾祥勇
机构
上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心海南医院儿外科
嘉兴市妇幼保健院儿外科
海南医科大学第二附属医院普通外科
出处
《临床小儿外科杂志》
北大核心
2025年第8期786-792,共7页
基金
浙江省卫生健康科技计划(临床研究应用项目2022KY390)。
文摘
目的分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源性外泌体(exosomes)并作用于巨结肠模型大鼠与人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),观察其治疗作用并探讨相关机制。方法通过全骨髓粘附法体外分离、培养和纯化斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley,SD)大鼠骨髓组织中的BMSCs。采用ExoQuick法从BMSCs培养上清液中分离Exosomes。将30只SD大鼠称重后随机等额分为巨结肠大鼠模型组、对照组和干预组(干预组自尾静脉注射100μg/mL的Exosomes稀释液1 mL干预巨结肠大鼠模型,每日1次,连续7 d)。培养的SH-SY5Y细胞分为Exosomes干预组和对照组。HE染色观察结肠病理学结构改变;实时荧光定量PCR测定结肠组织NOTCH(为一组单次跨膜受体)、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和性别决定取Y框蛋白10基因(SRY-related HMG-box 10,SOX-10)mRNA的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测结肠组织NOTCH、GDNF和Sox10蛋白的表达。四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)和Transwell小室检测细胞增殖和迁移能力。结果采用ExoQuick法分离出的BMSCs源性Exosomes在大小上存在异质性,介于50~120 nm之间,且表达Exosomes特异性标记CD9和CD63。HE染色显示,干预组大鼠结肠组织病理结构改变较模型组轻微。模型组大鼠结肠组织中NOTCH、GDNF和Sox10的mRNA(F=17.420、19.740和25.820,P均<0.001)及蛋白表达(F=7.690、8.470和11.780,P均<0.001)均明显低于对照组,而在干预组大鼠结肠组织较模型组大鼠而言明显升高(F=18.120,P<0.001)。干预组SH-SY5Y细胞NOTCH、GDNF和Sox10较对照组明显升高(t=3.130、2.420和3.340,P<0.05),干预组SH-SY5Y细胞增殖率和划痕后24 h迁移距离均高于对照组(P<0.05)。结论BMSCs源性Exosomes能够改善巨结肠模型大鼠结肠的病理变化,其作用可能是通过调控NOTCH、GDNF和Sox10相关信号通路实现的。
关键词
外泌体
骨髓间充质干细胞
HIRSCHSPRUNG病
信号通路
大鼠
模型
动物
动物
实验
Keywords
Exosomes
Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell
Hirschsprung Disease
Rats
Signal Pathway
Models,Animal
Animals,Laboratory
分类号
R726.5 [医药卫生—儿科]
R-332 [医药卫生]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
骨髓间充质干细胞源性外泌体在大鼠巨结肠模型中的干预性研究及相关机制初探
郭柏华
王建峰
张轶男
张剑峰
樊长河
黄婵
童国煜
曾祥勇
《临床小儿外科杂志》
北大核心
2025
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