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题名甘露聚糖酶在黑曲霉中的优化表达及其酶学性质研究
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作者
张会
李柱
马佳欣
樊俊博
邵志伟
姜毓君
李杰
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机构
东北农业大学生命科学学院
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出处
《食品工业科技》
北大核心
2025年第15期218-227,共10页
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基金
中国博士后科学基金(2019M651149)。
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文摘
为获得更高表达量和优良酶学性质的甘露聚糖酶,本研究采用同源重组定点整合技术构建甘露聚糖酶黑曲霉重组菌株,并对其表达特性及酶学性质进行分析。本研究成功获得了在glaA位点发生同源重组的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MG,以及同时在asAA位点过表达内质网辅助分子伴侣DnaJ1基因的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MD。菌株MG和MD在约37 kDa处均显现出明显的甘露聚糖酶Man蛋白条带,其最高酶活力分别为6909.861 U·mL^(−1)和7890.083 U·mL^(−1),其菌落大小略小于野生型菌株TH-2(ΔasAA::pyrG)。菌株MG和MD添加1%CPPs后的最高甘露聚糖酶酶活力分别提高了1.07倍和1.14倍,并且菌落大小明显增加。菌株MD中的甘露聚糖酶man基因转录水平是MG的1.01倍。此外,MD中内质网UPR指示基因hacA和bipA的转录水平均高于MG。重组甘露聚糖酶Man的最适温度为70℃、最适pH为4.5,且对金属离子及化学试剂表现出较高耐受性。通过过表达DnaJ1基因及添加1%CPPs可以有效提高甘露聚糖酶Man的表达量。本研究对开发和筛选酶学性质更优、产量更高的甘露聚糖酶具有重要意义。
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关键词
甘露聚糖酶
黑曲霉
DnaJ1
CPPS
酶学性质
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Keywords
mannanase
Aspergillus niger
DnaJ1
CPPs
enzymatic properties
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分类号
Q815
[生物学—生物工程]
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题名基因表达盒多拷贝对木聚糖酶在黑曲霉中表达的影响
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作者
张会
马佳欣
李柱
邵志伟
樊俊博
李杰
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机构
东北农业大学生命科学学院
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出处
《东北农业大学学报》
北大核心
2025年第2期63-71,共9页
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基金
中国博士后科学基金项目(2019M651149)。
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文摘
为提高木聚糖酶在黑曲霉中的分泌表达,采用同源重组定点整合技术将含有1或2个AnxynB基因表达盒的重组表达载体质粒pSZHG6R-AnxynB1R和pSZHG6R-AnxynB2R转入Aspergillus niger TH-2上高表达的glaA基因位点,获得纯合同源重组转化子X1R和X2R;重组菌株摇瓶发酵上清液,经SDS-PAGE、酶活性和实时荧光定量PCR检测。结果表明:通过多拷贝策略,木聚糖酶酶活性提高61.27%,AnxynB基因转录水平提高102.56%,同时增加基因剂量,触发UPR响应以缓解内质网应激。重组木聚糖酶最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.5,在此条件下酶活性最高为7 596.43 U·mL^(-1)。
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关键词
木聚糖酶
黑曲霉
多拷贝
酶学性质
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Keywords
xylanase
Aspergillusniger
multiple copies
enzymology properties
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分类号
Q815
[生物学—生物工程]
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