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题名RagA缺失果蝇的构建及表型分析
被引量：1
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作者
傅媛媛
沈苏林
孟国强
刘倩倩
樊伟康
韦有恒
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机构
扬州大学生物科学与技术学院
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出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1182-1189,共8页
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基金
国家自然科学基金面上项目(32370504)。
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文摘
【目的】Rag GTPase是真核生物中高度保守的Ras家族蛋白,在调节雷帕霉素靶点复合体1(mechanic target of rapamycin complex 1, mTORC1)活性和自噬等方面发挥重要作用。为了研究Rag GTPase的生理功能,本研究构建了RagA基因编码区缺失的突变黑腹果蝇Drosophila melanogaster,对其表型进行分析。【方法】将靶向RagA基因的gRNA表达质粒导入表达Cas9蛋白的黑腹果蝇中,随后通过PCR方法筛选获得RagA编码区缺失的RagA突变黑腹果蝇;利用遗传杂交的方法对腹果蝇RagA突变体的生殖及存活情况进行分析;利用FLP-FRT系统分别在脂肪体和雌性卵巢中诱导产生RagA突变的细胞克隆,分别分析RagA突变细胞生长和自噬水平的改变。【结果】利用CRISPR-cas9结合显微注射技术成功敲除RagA基因;RagA突变导致黑腹果蝇在胚胎期死亡,在细胞水平上使细胞生长明显降低、细胞内LAMP1和Rab7标记的自噬溶酶体堆积。【结论】本研究验证了RagA基因调节细胞代谢的功能,为进一步利用RagA突变果蝇研究RagA基因在发育中的功能分析和机制解析奠定基础。
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关键词
果蝇
自噬
Ras家族蛋白
Rag
GTPase
基因敲除
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Keywords
Drosophila
autophagy
Ras family protein
Rag GTPases
gene knockout
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分类号
Q963
[生物学—昆虫学]
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题名本科生基因工程实验课程基因克隆构建方案
被引量：2
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作者
陆盈盈
樊伟康
韦有恒
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机构
扬州大学生物科学与技术学院
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出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期119-123,共5页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31872287)。
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文摘
将常用于Gateway克隆系统中的对大肠杆菌具有毒性ccdB基因引入载体,提高基因克隆成功率。构建基因克隆过程中,含有ccdB基因的原始载体在大肠杆菌中不能正常生长,无法形成细胞克隆,避免空载的假阳性克隆产生。通过分组比较实验、启发引导的教学设计,可以让学生充分领会酶切、重组、连接等生物工程相关操作,加深学生对理论课程的理解。该基因克隆方法的改进能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中的基因克隆效率的提高。
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关键词
基因工程
实验教学
构建基因克隆
ccdB
质粒
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Keywords
genetic engineering
experimental teaching
cloning construction
ccdB
plasmid
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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