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蓝藻热休克诱导高效表达系统的构建
被引量：
9
1
作者
章军
秦燕
+5 位作者
欧阳青
徐虹
黄澜
刘仁海
周克夫
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001年第8期17-21,共5页
以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素...
以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素α1(Tα1)目的基因 ,在下游组装有rbcSpolyA终止子。此外 ,还组装了一个完整的卡那霉素抗性基因作为筛选标记基因。这样 ,就构建了完整的蓝藻的基因表达系统。经转化蓝藻Synechococcussp .PCC794 2细胞 ,在 4 2℃热诱导 30min后 ,目的基因UB Tα1得到较高水平表达 ,表达量约占可溶性蛋白的 8.7%
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关键词
蓝藻
热休克诱导
基因表达
基因工程
表达系统
卡那霉素抗性基因
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职称材料
胸腺素α_1基因在钝顶螺旋藻中的表达
被引量：
6
2
作者
徐虹
章军
+3 位作者
柯珍恋
周克夫
刘仁海
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2002年第12期83-87,共5页
将钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis)在 2 4℃培养 ,并经 2mmol/LEDTA预处理16～ 2 4h ,以本实验室构建的基因整合平台系统供体质粒 pEUTISI进行超声波转化螺旋藻 ,经筛选获得了具G4 18抗性的转化藻株。通过PCR扩增和Southern杂交证实 ,p...
将钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis)在 2 4℃培养 ,并经 2mmol/LEDTA预处理16～ 2 4h ,以本实验室构建的基因整合平台系统供体质粒 pEUTISI进行超声波转化螺旋藻 ,经筛选获得了具G4 18抗性的转化藻株。通过PCR扩增和Southern杂交证实 ,pEUTISI中目的基因UB Tα1和nptII基因已整合到钝顶螺旋藻染色体上。转化藻株经4 5℃热诱导 4 0min后 ,进行蛋白质SDS PAGE电泳和Westernblot,杂交结果证实 ,外源胸腺素α1基因在螺旋藻中得到有效表达。
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关键词
钝顶螺旋藻
超声波转化
胸腺素Α1
基因表达
转基因
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职称材料
乙肝表面抗原S_2S基因在蓝藻Synechococcus sp. PCC7942中的表达研究
被引量：
2
3
作者
陈天圣
章军
+3 位作者
徐虹
周克夫
刘仁海
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第8期28-32,共5页
用PCR法将乙肝表面抗原基因S2 S片段从乙肝病毒中扩增得到 ,将其插入到蓝藻热休克表达载体 pEUTMT1中 ,构建成表达重组质粒 pES2ST1。将蓝藻Synechococ cussp .PCC794 2的总染色体与质粒 pES2ST1同时进行EcoRI和SacI双酶切 ,再连接构建...
用PCR法将乙肝表面抗原基因S2 S片段从乙肝病毒中扩增得到 ,将其插入到蓝藻热休克表达载体 pEUTMT1中 ,构建成表达重组质粒 pES2ST1。将蓝藻Synechococ cussp .PCC794 2的总染色体与质粒 pES2ST1同时进行EcoRI和SacI双酶切 ,再连接构建成为系列含有蓝藻染色体DNA同源片段的供体表达质粒。经转化筛选得到蓝藻Synechococcussp .PCC794 2转化藻株。PCR和Southern杂交证明目的基因已经整合到宿主的染色体中。转化藻通过热诱导后 ,Northern blot结果呈阳性 ,用化学发光检测技术可以检测到微量目的蛋白的表达 ,检测含量约为 0 .78～ 0 .6 4ng/ml,目的蛋白约为可溶性蛋白的 1.1× 10 - 6 ～ 1.5× 10 - 6 。
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关键词
蓝藻
Synechococcus-sp.PCC7942
表达
PCR法
乙肝
表面抗原
S2S基因
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职称材料
题名
蓝藻热休克诱导高效表达系统的构建
被引量：
9
1
作者
章军
秦燕
欧阳青
徐虹
黄澜
刘仁海
周克夫
楼士林
机构
厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001年第8期17-21,共5页
基金
863计划资助项目 (863 819 0 4 0 3 )
文摘
以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素α1(Tα1)目的基因 ,在下游组装有rbcSpolyA终止子。此外 ,还组装了一个完整的卡那霉素抗性基因作为筛选标记基因。这样 ,就构建了完整的蓝藻的基因表达系统。经转化蓝藻Synechococcussp .PCC794 2细胞 ,在 4 2℃热诱导 30min后 ,目的基因UB Tα1得到较高水平表达 ,表达量约占可溶性蛋白的 8.7%
关键词
蓝藻
热休克诱导
基因表达
基因工程
表达系统
卡那霉素抗性基因
Keywords
Synechococcus sp. PCC7942, Heat shock induce, Gene expression
分类号
Q943 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
胸腺素α_1基因在钝顶螺旋藻中的表达
被引量：
6
2
作者
徐虹
章军
柯珍恋
周克夫
刘仁海
楼士林
机构
厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2002年第12期83-87,共5页
基金
86 3计划 ( 86 3- 819- 0 4- 0 3)
福建省自然科学基金 (B0 2 10 0 0 1)资助项目。
文摘
将钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis)在 2 4℃培养 ,并经 2mmol/LEDTA预处理16～ 2 4h ,以本实验室构建的基因整合平台系统供体质粒 pEUTISI进行超声波转化螺旋藻 ,经筛选获得了具G4 18抗性的转化藻株。通过PCR扩增和Southern杂交证实 ,pEUTISI中目的基因UB Tα1和nptII基因已整合到钝顶螺旋藻染色体上。转化藻株经4 5℃热诱导 4 0min后 ,进行蛋白质SDS PAGE电泳和Westernblot,杂交结果证实 ,外源胸腺素α1基因在螺旋藻中得到有效表达。
关键词
钝顶螺旋藻
超声波转化
胸腺素Α1
基因表达
转基因
Keywords
Spirulina platensis, Ultrasonic transformation, Thymosin α1, Expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
乙肝表面抗原S_2S基因在蓝藻Synechococcus sp. PCC7942中的表达研究
被引量：
2
3
作者
陈天圣
章军
徐虹
周克夫
刘仁海
楼士林
机构
厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第8期28-32,共5页
基金
863计划 ( 863- 819- 0 4- 0 3 )资助项目
文摘
用PCR法将乙肝表面抗原基因S2 S片段从乙肝病毒中扩增得到 ,将其插入到蓝藻热休克表达载体 pEUTMT1中 ,构建成表达重组质粒 pES2ST1。将蓝藻Synechococ cussp .PCC794 2的总染色体与质粒 pES2ST1同时进行EcoRI和SacI双酶切 ,再连接构建成为系列含有蓝藻染色体DNA同源片段的供体表达质粒。经转化筛选得到蓝藻Synechococcussp .PCC794 2转化藻株。PCR和Southern杂交证明目的基因已经整合到宿主的染色体中。转化藻通过热诱导后 ,Northern blot结果呈阳性 ,用化学发光检测技术可以检测到微量目的蛋白的表达 ,检测含量约为 0 .78～ 0 .6 4ng/ml,目的蛋白约为可溶性蛋白的 1.1× 10 - 6 ～ 1.5× 10 - 6 。
关键词
蓝藻
Synechococcus-sp.PCC7942
表达
PCR法
乙肝
表面抗原
S2S基因
Keywords
Synechococcus sp.PCC7942, HBsAg, Express
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蓝藻热休克诱导高效表达系统的构建
章军
秦燕
欧阳青
徐虹
黄澜
刘仁海
周克夫
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
胸腺素α_1基因在钝顶螺旋藻中的表达
徐虹
章军
柯珍恋
周克夫
刘仁海
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2002
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
乙肝表面抗原S_2S基因在蓝藻Synechococcus sp. PCC7942中的表达研究
陈天圣
章军
徐虹
周克夫
刘仁海
楼士林
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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