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基于RAA-CRISPR/Cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法的建立
1
作者
罗如杏
梁子立
+3 位作者
何琪富
张炎
张志东
郭紫晶
《现代畜牧兽医》
2025年第8期14-19,共6页
研究旨在将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术结合,建立基于RAA-CRISPR/cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法。针对空肠弯曲杆菌的保守基因设计特异...
研究旨在将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术结合,建立基于RAA-CRISPR/cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法。针对空肠弯曲杆菌的保守基因设计特异性的CRISPR RNA序列和RAA引物,通过RAA扩增后进行CRISPR-Cas13a的荧光检测,优化检测体系中主要成分,之后对优化后的检测方法的特异性、敏感性、重复性进行评估,并通过检测临床样品与现有的实时荧光PCR(qPCR)检测方法进行比较。结果显示,优化后的检测方法对多种食源性致病菌无交叉反应,具有良好的特异性;检测下限低至9.3 copies/μL,具有较高的灵敏度。组内和组间的变异系数分别低于4.15%和3.51%,具有良好的重复性。该方法对40份猪腹泻粪便样品的检出率为30%(12/40),高于qPCR检测方法(20%,8/40),检测的12份阳性样品经测序进一步确认为空肠弯曲杆菌,证明该方法检测结果的准确性。研究表明,试验建立了灵敏高、特异性强的检测空肠弯曲杆菌的RAA-CRISPR/Cas13a方法,为空肠弯曲杆菌的检测提供了新技术,在食源性疾病监测和动物疫病防控领域展现出良好的应用前景。
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关键词
空肠弯曲杆菌
RAA
CRISPR-Cas13a
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职称材料
题名
基于RAA-CRISPR/Cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法的建立
1
作者
罗如杏
梁子立
何琪富
张炎
张志东
郭紫晶
机构
西南民族大学畜牧兽医学院
成都市武侯区人民医院
成都市武侯区妇幼保健院
出处
《现代畜牧兽医》
2025年第8期14-19,共6页
基金
大学生创新创业训练计划项目(S202410656086)
四川省科技计划资助-四川省自然科学基金(青年基金项目)(2024NSFSC1274)
西南民族大学科研启动金资助项目(RQD2023001)。
文摘
研究旨在将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术结合,建立基于RAA-CRISPR/cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法。针对空肠弯曲杆菌的保守基因设计特异性的CRISPR RNA序列和RAA引物,通过RAA扩增后进行CRISPR-Cas13a的荧光检测,优化检测体系中主要成分,之后对优化后的检测方法的特异性、敏感性、重复性进行评估,并通过检测临床样品与现有的实时荧光PCR(qPCR)检测方法进行比较。结果显示,优化后的检测方法对多种食源性致病菌无交叉反应,具有良好的特异性;检测下限低至9.3 copies/μL,具有较高的灵敏度。组内和组间的变异系数分别低于4.15%和3.51%,具有良好的重复性。该方法对40份猪腹泻粪便样品的检出率为30%(12/40),高于qPCR检测方法(20%,8/40),检测的12份阳性样品经测序进一步确认为空肠弯曲杆菌,证明该方法检测结果的准确性。研究表明,试验建立了灵敏高、特异性强的检测空肠弯曲杆菌的RAA-CRISPR/Cas13a方法,为空肠弯曲杆菌的检测提供了新技术,在食源性疾病监测和动物疫病防控领域展现出良好的应用前景。
关键词
空肠弯曲杆菌
RAA
CRISPR-Cas13a
Keywords
Campylobacterjejuni
RAA
CRISPR-Cas13a
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于RAA-CRISPR/Cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法的建立
罗如杏
梁子立
何琪富
张炎
张志东
郭紫晶
《现代畜牧兽医》
2025
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