低转苷活性糖化酶GluM3的淀粉糖化工艺优化及淀粉颗粒的结构表征 被引量：1

1

作者 范海月 于朝 +4 位作者 张政洁 黎明 柏映国 俞峰 李中媛 《食品工业科技》 北大核心 2025年第3期204-212,共9页

本文旨在优化糖化酶GluM3的玉米淀粉糖化工艺,探究其对淀粉颗粒结构的影响,进一步推动糖化酶GluM3在淀粉制糖工业的应用。首先通过单因素实验和响应面试验确定低转苷活性糖化酶GluM3的最佳糖化工艺,采用电子扫描电镜、X-射线衍射法和红... 本文旨在优化糖化酶GluM3的玉米淀粉糖化工艺,探究其对淀粉颗粒结构的影响,进一步推动糖化酶GluM3在淀粉制糖工业的应用。首先通过单因素实验和响应面试验确定低转苷活性糖化酶GluM3的最佳糖化工艺,采用电子扫描电镜、X-射线衍射法和红外光谱等方法对淀粉颗粒进行结构表征。结果表明,最佳糖化工艺条件为液化液的葡萄糖当量(DE)值16%,温度66℃,pH3.7,时间3 h,糖化酶添加量450 U/g和普鲁兰酶添加量1.25 U/g,优化后获得玉米淀粉糖化液的葡萄糖含量(DX)达到92.68%。糖化反应后玉米淀粉从光滑完整颗粒变成残破的碎屑状态;在糖化过程中淀粉内部的晶体结构遭到了一定程度的破坏;糖化反应后玉米淀粉短程有序化程度降低;玉米淀粉经淀粉酶液化反应后生成多种麦芽低聚糖,而经糖化酶GluM3糖化反应后麦芽低聚糖进一步转化成葡萄糖,其占比高达99.34%。本文确定了低转糖苷活性GluM3对玉米淀粉的最佳糖化工艺,并研究了糖化反应过程中淀粉微观结构和物理特性的变化规律,为糖化酶GluM3的后续工业应用提供理论依据和应用基础。 展开更多

关键词 玉米淀粉 糖化酶 糖化工艺优化 结构表征

在线阅读 下载PDF 职称材料

稀有密码子串联介导的HemB表达弱化提升5-氨基乙酰丙酸的含量

2

作者 李加仪 李尽益 +3 位作者 白雪 柏映国 刘波 张志伟 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期74-81,共8页

【目的】应用稀有密码子串联策略弱化5-氨基乙酰丙酸分解代谢途径中关键酶(5-氨基乙酰丙酸脱水酶) HemB表达,降低5-氨基乙酰丙酸分解代谢,进而提高5-氨基乙酰丙酸含量。【方法】以谷氨酸棒杆菌为底盘细胞合成5-氨基乙酰丙酸,依据谷氨酸... 【目的】应用稀有密码子串联策略弱化5-氨基乙酰丙酸分解代谢途径中关键酶(5-氨基乙酰丙酸脱水酶) HemB表达,降低5-氨基乙酰丙酸分解代谢,进而提高5-氨基乙酰丙酸含量。【方法】以谷氨酸棒杆菌为底盘细胞合成5-氨基乙酰丙酸,依据谷氨酸棒杆菌密码子偏好性,在HemB编码基因的5′引入含有稀有密码子串联的DNA序列来弱化HemB表达。【结果】引入稀有密码子的谷氨酸棒杆菌工程细胞生长速度降低,发酵液中5-氨基乙酰丙酸分解代谢产物含量下降,5-氨基乙酰丙酸含量得以明显提升。【结论】稀有密码子串联策略有效弱化了HemB表达,提高了5-氨基乙酰丙酸含量,此策略亦可用于其他蛋白质表达弱化和代谢途径的重塑。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 5-氨基乙酰丙酸脱水酶 5-氨基乙酰丙酸 弱化表达 稀有密码子

在线阅读 下载PDF 职称材料

Streptomyces hygroscopicus产谷氨酰胺转胺酶摇瓶发酵条件的优化 被引量：14

3

作者 柏映国 燕国梁 +1 位作者 堵国成 陈坚 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期27-32,共6页

介绍了吸水链霉菌 (Streptomyceshygroscopicus)WSH0 3 -1 3的筛选过程 ,重点考察了在摇瓶条件下 ,不同碳、氮源对吸水链霉菌生长和产酶的影响 ,利用正交实验 ,确定了复合碳、氮源的浓度 ,并对种龄、接种量、初始 pH值、培养温度和培养... 介绍了吸水链霉菌 (Streptomyceshygroscopicus)WSH0 3 -1 3的筛选过程 ,重点考察了在摇瓶条件下 ,不同碳、氮源对吸水链霉菌生长和产酶的影响 ,利用正交实验 ,确定了复合碳、氮源的浓度 ,并对种龄、接种量、初始 pH值、培养温度和培养时间等条件进行了研究。通过对发酵过程的优化 ,酶活达到 4 46u/mL ,比初始条件下提高了 3 0 9倍。 展开更多

关键词 菌种筛选 微生物谷氨酰胺转胺酶 优化 分批发酵 STREPTOMYCES HYGROSCOPICUS

在线阅读 下载PDF 职称材料

木聚糖酶XYNB的N46D突变、表达及酶学性质变化 被引量：12

4

作者 杨浩萌 柏映国 +5 位作者 李江 罗会颖 王亚茹 伍宁丰 范云六 姚斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期204-211,共8页

对来源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模和同源序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存的一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关.据此设计了XYNB的N46D定点突变.... 对来源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模和同源序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存的一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关.据此设计了XYNB的N46D定点突变.将突变酶XYNBN46D在毕赤酵母中表达,表达的XYNBN46D经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,XYNBN46D的最适pH值由5·2下降到4·2,pH稳定性也向酸性pH偏移,同时,热稳定性和最适温度也有一定的提高,但酶的比活性显著下降.结果证实,木聚糖酶XYNB的第46位Asn与其最适pH值相关.对导致酶学性质改变的可能因素进行了分析,结果为进一步的结构与功能研究提供了资料. 展开更多

关键词 木聚糖酶 XYNBN46D 定点突变 pH特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

在烟草中表达的高比活性木聚糖酶XYNB 被引量：2

5

作者 杨培龙 姚斌 +4 位作者 王亚茹 罗会颖 袁铁铮 柏映国 范云六 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期176-181,共6页

来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一性质优良的高比活性木聚糖酶,已在饲料中作为添加剂应用。本研究利用携带双35S启动子和AMV增强子的表达载体,在烟草中高效表达了XYNB。转基因烟草及其子代植株基... 来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一性质优良的高比活性木聚糖酶,已在饲料中作为添加剂应用。本研究利用携带双35S启动子和AMV增强子的表达载体,在烟草中高效表达了XYNB。转基因烟草及其子代植株基因组PCR检测证实xynB基因已整合到转基因烟草的基因组中,ELISA和SDS-PAGE以及Westernblot分析确证了xynB基因的高效表达,木聚糖酶活性分析证实了表达酶具有正常的生物学活性。表达的XYNB约占叶片总蛋白含量的6%,转基因烟草表现的最高酶活性约为170 IU/g鲜叶片(23 IU/mg总蛋白)。表达酶蛋白分子量为20.8 kD,与理论分子量相当。转基因植株可以正常生长和繁殖,T1子代植株表现了与亲代相似的酶活性,具有较好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 高比活性木聚糖酶 转基因植物 烟草

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种谷氨酸棒杆菌4-异丙基苯甲酸诱导型启动子的设计与应用

6

作者 毋舒宁 苏永平 +3 位作者 李冬雪 柏映国 刘波 张志伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期108-116,共9页

【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱... 【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱导剂的启动子P_(H10-CuO)。【结果】绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示,无诱导剂时,谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低;以25μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导12 h时,谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达62000,证明P_(H10-CuO)具有很好的严谨性和诱导表达强度。构建了以启动子P_(H10-CuO)调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒,实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入。【结论】诱导型启动子P_(H10-CuO)具有表达强度高且渗漏表达低的特点,可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 诱导型启动子 阻遏蛋白CymR 4-异丙基苯甲酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于酶热稳定性系统计算的乳酸氧化酶热稳定性改造 被引量：2

7

作者 华晨 李新新 +6 位作者 涂涛 杨虹 罗会颖 陈家明 姚斌 柏映国 彭书传 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期144-150,共7页

乳酸氧化酶能够催化乳酸氧化为丙酮酸,具有重要的工业应用价值,但已有研究表明,不同来源的乳酸氧化酶均存在热稳定性不好的问题,影响了其在工业当中的应用。目前对于乳酸氧化酶的研究报道较少,对其热稳定性的改造更未见报道,因此提高乳... 乳酸氧化酶能够催化乳酸氧化为丙酮酸,具有重要的工业应用价值,但已有研究表明,不同来源的乳酸氧化酶均存在热稳定性不好的问题,影响了其在工业当中的应用。目前对于乳酸氧化酶的研究报道较少,对其热稳定性的改造更未见报道,因此提高乳酸氧化酶的热稳定性具有重要意义。克隆表达了一个高比活乳酸氧化酶(Eg LOD),通过生物信息学辅助分析及表面电荷分析软件(ETSS)对乳酸氧化酶的蛋白结构进行理性分析,基于蛋白表面电荷分布优化设计了9个突变体尝试对其进行热稳定性改良。通过对突变体的筛选获得了两个有效提升热稳定性的突变体D250N,D281N,在60℃下处理30 min仍然能够保持50%以上的酶活,而野生型Eg LOD酶活仅剩20%左右。 展开更多

关键词 乳酸氧化酶 热稳定性 分子改造 ETSS

在线阅读 下载PDF 职称材料

来源于Alicyclobacillus sp.A4葡萄糖异构酶的克隆表达及转化应用研究 被引量：3

8

作者 戴晨霞 曹慧方 +3 位作者 罗会颖 姚斌 柏映国 徐波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期144-151,共8页

葡萄糖异构酶在体外可以将D-葡萄糖异构化为D-果糖,是商业制备高果糖浆的关键酶。本研究从嗜热菌Alicyclobacillus sp.A4中克隆了葡萄糖异构酶(A4GI)基因,并在大肠杆菌BL21中成功进行了表达。利用His-tag蛋白纯化磁珠对粗酶液进行纯化,... 葡萄糖异构酶在体外可以将D-葡萄糖异构化为D-果糖,是商业制备高果糖浆的关键酶。本研究从嗜热菌Alicyclobacillus sp.A4中克隆了葡萄糖异构酶(A4GI)基因,并在大肠杆菌BL21中成功进行了表达。利用His-tag蛋白纯化磁珠对粗酶液进行纯化,并对已纯化的重组A4GI进行详细的酶学性质及转化率的测定。结果表明:A4GI的最适温度和pH分别为65℃和p H 7.5,该酶在p H 6.0-11.0之间很稳定,在pH 6.0-11.0缓冲液中37℃处理1 h后,剩余酶活99%以上。最适反应条件下,重组酶对D-葡萄糖的Km与Vmax值为99.8 mM与3.75μmol/min/mg。在不同浓度的葡萄糖转化实验中,A4GI的转化率在一定底物浓度范围内随底物浓度增加呈现升高的趋势,在底物葡萄糖浓度为3 M时达到52.7%的最高转化率,因此可以实现在高浓度葡萄糖下进行高效转化,降低后期浓缩的生产成本,具有较好的工业应用潜力。 展开更多

关键词 葡萄糖异构酶 高果糖浆 转化率 ALICYCLOBACILLUS sp.A4

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种高温酸性α-淀粉酶基因的高效表达和表达产物分析 被引量：6

9

作者 袁铁铮 姚斌 +4 位作者 罗会颖 王亚茹 柏映国 伍宁丰 范云六 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期63-68,共6页

一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg/L.对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究.rBD5063作用最适pH值为5.0,在pH3.5... 一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg/L.对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究.rBD5063作用最适pH值为5.0,在pH3.5～10.0范围内酶活性保留50%以上,最适温度在105～110℃之间,在90℃下酶活性半衰期约30min.低浓度Ca2+对激活rBD5063活性和维持稳定性是必需的,高浓度对活性会产生轻微抑制作用,Mg2+、SDS和Trition X-100都能够部分抑制rBD5063活性,Cu2+和EDTA严重抑制rBD5063活性.表达产物水解可溶性淀粉主要产物是单糖和低聚寡糖.表达产物包括分子量分别是62、56、44kD的3种活性组分,在通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在.重组α-淀粉酶rBD5063不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象,O-连接对rBD5063的热稳定性和最适温度没有显著影响. 展开更多

关键词 高温酸性α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达 多组分表达产物

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜菜糖蜜发酵饲料对肉羊生长、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用 被引量：20

10

作者 成思源 马涛 +5 位作者 杨东 王文义 柏映国 马书林 马友记 刁其玉 《饲料工业》 CAS 北大核心 2022年第19期7-13,共7页

试验将甜菜糖蜜发酵饲料按不同比例添加在肉羊饲粮中,旨在研究其对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用。选取体重为(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔54只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6只羊。分别添加0、10、50 kg/... 试验将甜菜糖蜜发酵饲料按不同比例添加在肉羊饲粮中,旨在研究其对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用。选取体重为(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔54只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6只羊。分别添加0、10、50 kg/t甜菜糖蜜发酵饲料(对照组、FⅠ组、FⅡ组)。试验共计100 d,预试期10 d,正试期90 d,每30 d进行一次称重,正试期第70天到第80天进行消化代谢试验,正试期结束后,每组选取8只羊屠宰并采样,测定屠宰性能与肉品质指标。结果显示:①各组生长性能无显著差异(P>0.05),但FⅡ组的平均日增重较对照组提高,而采食量低于对照组,饲粮转化率较对照组有所改善。②各试验组胴体重、胴体脂肪含量值无显著差异(P>0.05),FⅡ组肉羊屠宰率、眼肌面积显著高于对照组(P<0.05)。③各组肉品质指标无显著差异(P>0.05)。④FⅡ组粗蛋白、粗脂肪、中性洗涤纤维以及酸性洗涤纤维的消化率显著高于对照组(P<0.05),各组干物质、代谢能的表观消化率无显著差异(P>0.05)。综上所述,试验采用的发酵饲料可以明显提高饲粮粗蛋白、粗脂肪、酸性洗涤纤维以及中性洗涤纤维的表观消化率,对肉羊的平均日增重有促进作用,能显著提高肉羊的屠宰率,每吨添加50 kg发酵饲料的作用较优。 展开更多

关键词 肉羊 酿酒酵母 甜菜糖蜜发酵饲料 生长性能 屠宰性能 肉品质 表观消化率

在线阅读 下载PDF 职称材料

复合酶制剂对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质以及消化代谢的影响 被引量：16

11

作者 成思源 马涛 +4 位作者 杨东 王文义 柏映国 马友记 刁其玉 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期4530-4539,共10页

本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量复合酶制剂对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质和消化代谢的影响。选取体重在(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔72只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复6只。4组羔羊分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、0.... 本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量复合酶制剂对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质和消化代谢的影响。选取体重在(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔72只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复6只。4组羔羊分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、0.5(M1组)、1.0(M2组)和2.0 kg/t(M3组)复合酶制剂(蛋白酶∶脂肪酶∶淀粉酶=1∶1∶1)的试验饲粮。预试期10 d,正试期90 d。每天记录1次采食量,每隔30 d进行1次称重;正试期第70~80天采用全收粪尿法进行消化代谢试验;正试期结束后,每组选取8只羊进行屠宰,测定其屠宰性能、肉品质指标。结果显示:1)各组全期平均日增重、干物质采食量和料重比差异不显著(P>0.05)。2)M3组胴体重显著高于M1组、M2组和对照组(P<0.05),其他屠宰性能指标各组间无显著差异(P>0.05)。3)各组背最长肌肉色、滴水损失以及pH0 h、ΔpH无显著差异(P>0.05);M2组和M3组羊只背最长肌的pH24 h显著高于对照组(P<0.05)。4)各试验组粗脂肪表观消化率显著高于对照组(P<0.05);M2组和M3组的粗蛋白质表观消化率显著高于对照组(P<0.05);代谢能以及中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、钙、磷表观消化率各组间差异不显著(P>0.05)。综上所述,本试验条件下,在肉羊生长育肥饲粮中添加2.0 kg/t的复合酶制剂(蛋白酶∶脂肪酶∶淀粉酶=1∶1∶1)可改善肉羊的屠宰性能、肉品质以及养分表观消化率。 展开更多

关键词 肉羊 复合酶制剂 生长性能 屠宰性能 肉品质 养分表观消化率

在线阅读 下载PDF 职称材料

高产谷氨酸脱羧酶的菌株筛选及鉴定 被引量：1

12

作者 孙磊 周成 +3 位作者 张琇 孟昆 柏映国 涂涛 《饲料工业》 CAS 北大核心 2021年第19期49-55,共7页

γ-氨基丁酸作为一种新型饲料添加剂,助推畜牧养殖业绿色健康发展。谷氨酸脱羧酶利用磷酸吡哆醛为辅因子将L-谷氨酸脱羧生成γ-氨基丁酸的转化方法得到了广泛关注。本研究利用平板活性筛选结合摇瓶发酵复筛的方法,从宁夏沙漠土样中筛选... γ-氨基丁酸作为一种新型饲料添加剂,助推畜牧养殖业绿色健康发展。谷氨酸脱羧酶利用磷酸吡哆醛为辅因子将L-谷氨酸脱羧生成γ-氨基丁酸的转化方法得到了广泛关注。本研究利用平板活性筛选结合摇瓶发酵复筛的方法,从宁夏沙漠土样中筛选获得了3株具有较高谷氨酸脱羧酶活性的菌株。通过对菌落形态、16S rDNA序列比对和系统发育树分析,3株菌初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),命名为Bacillus sp.Z1、Bacillus sp.Z11和Bacillus sp.Z20,保藏于中国农业微生物菌种保存中心。通过全基因组测序分析,发现三株菌分别含有一个谷氨酸脱羧酶编码基因。三条基因序列长度均为1470 bp,序列相似性为94.5%~97.3%,编码489个氨基酸和1个终止密码子,理论分子量55 ku。 展开更多

关键词 芽孢杆菌 谷氨酸脱羧酶 Γ-氨基丁酸 筛选 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料