6种人兽共患病病原核酸液相芯片检测体系的建立 被引量：13

1

作者 王艳 沈家红 +5 位作者 蒋蔚 张磊萍 张强 林颖峥 熊炜 李树清 《中国动物检疫》 CAS 2018年第12期80-84,共5页

本研究通过设计、合成特异性引物和探针并对其进行修饰,将探针和特定荧光编码微球共价交联后,利用Luminex检测仪读取荧光信号,从而建立了针对布鲁氏菌、沙门氏菌、弓形虫,狂犬病病毒、巴氏通体、弯曲杆菌等6种病原的液相芯片检测方法。... 本研究通过设计、合成特异性引物和探针并对其进行修饰,将探针和特定荧光编码微球共价交联后,利用Luminex检测仪读取荧光信号,从而建立了针对布鲁氏菌、沙门氏菌、弓形虫,狂犬病病毒、巴氏通体、弯曲杆菌等6种病原的液相芯片检测方法。数据显示,本研究建立的液相芯片检测体系具有良好的特异性,检测灵敏度达50拷贝数,能同时检测6种重要人兽共患病病原,对于这6种人兽共患病的快速筛查和控制提供了技术支撑。 展开更多

关键词 人兽共患病 液相芯片 布鲁氏菌 沙门氏菌 弓形虫 狂犬病病毒 巴氏通体 弯曲杆菌

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猫传染性腹膜炎病毒核衣壳蛋白的表达及间接ELISA法的建立 被引量：10

2

作者 熊炜 林颖峥 +5 位作者 王艳 魏晓锋 王巧全 黄忠荣 胡建华 李健 《中国动物检疫》 CAS 2014年第2期67-70,共4页

本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检... 本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检疫部门监控FIPV疫情提供技术支撑。 展开更多

关键词 猫传染性腹膜炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆和表达

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口岸入侵病媒生物特征及防控策略 被引量：4

3

作者 林颖峥 张冠楠 +4 位作者 李树清 邓耀华 王艳 张强 何宇平 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期29-32,共4页

加强对境外病媒生物及其传播疫病的管控,是防止疫病随病媒生物跨境传播的重要举措。当前口岸入侵病媒生物存在来源广、入侵途径多、类别杂、种群丰富及随季节变化等特征。本文针对口岸入侵病媒生物的防控重点,提出应强化源头治理,切断... 加强对境外病媒生物及其传播疫病的管控,是防止疫病随病媒生物跨境传播的重要举措。当前口岸入侵病媒生物存在来源广、入侵途径多、类别杂、种群丰富及随季节变化等特征。本文针对口岸入侵病媒生物的防控重点,提出应强化源头治理,切断入侵途径,加强查验及口岸区域的可持续治理能力,并指出加强监管队伍建设、应用新技术及跨域多方合作是防控关键。 展开更多

关键词 口岸 入侵 病媒 出入境 海关 外来动物疫病

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兔黏液瘤病快速检测方法的建立 被引量：3

4

作者 林颖峥 林士佳 +5 位作者 宋青 郭雨雁 包雯骏 熊炜 李树清 魏晓锋 《中国动物检疫》 CAS 2015年第8期72-75,共4页

兔黏液瘤病是由兔黏液瘤病毒引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为了加强口岸对进境野生及实验用兔中兔黏液瘤病的筛查和流行病学调查,本研究建立了PCR和Real-time PCR快速高通量检测兔黏液瘤病的方法,证实两种检测方法具有良好... 兔黏液瘤病是由兔黏液瘤病毒引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为了加强口岸对进境野生及实验用兔中兔黏液瘤病的筛查和流行病学调查,本研究建立了PCR和Real-time PCR快速高通量检测兔黏液瘤病的方法,证实两种检测方法具有良好的特异性和灵敏性,适用于兔黏液瘤病的快速检测。 展开更多

关键词 兔黏液瘤病 PCR Real—time PCR TAQMAN探针

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淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒快速核酸检测方法 被引量：1

5

作者 熊炜 林颖峥 +5 位作者 魏晓锋 王艳 张强 李健 胡建华 黄忠荣 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期75-78,共4页

为加强口岸对进境野生及实验用啮齿类动物中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)筛查和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR快速高通量检测LCMV的方法,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适于快速检测L... 为加强口岸对进境野生及实验用啮齿类动物中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)筛查和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR快速高通量检测LCMV的方法,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适于快速检测LCMV。 展开更多

关键词 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 RT-PCR REAL-TIME RT-PCR TAQMAN探针

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TaqMan实时荧光RT-PCR检测猪脑心肌炎病毒方法的建立与应用 被引量：1

6

作者 张强 王巧全 +4 位作者 熊炜 李树清 李健 林颖峥 黄忠荣 《中国动物检疫》 CAS 2014年第5期81-84,共4页

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释... 针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,EMCV标准曲线的相关系数为0.999。结果显示,该方法检测灵敏度达到10拷贝/μL,对猪捷申病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒检测结果均为阴性。方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2%。检测采集自上海供港猪场、进境美国种猪、加拿大、法国种猪的血清样本145份,EMCV核酸的检出率国内猪场53.6%,美国猪检出率为27.6%,加拿大猪检出率为20%,法国猪检出率为26.7%。EMCV实时荧光RT-PCR方法的建立为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段。 展开更多

关键词 猪脑心肌炎病毒 实时荧光PCR TAQMAN探针

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野兔热快速检测方法的建立 被引量：1

7

作者 林颖峥 林士佳 +4 位作者 张冠楠 李树清 熊炜 郭雨雁 严亚贤 《中国动物检疫》 CAS 2017年第10期94-97,共4页

野兔热是由土拉弗朗西斯菌引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为加强口岸对进境野生及实验用兔中野兔热的筛查和流行病学调查,基于土拉弗朗西斯菌保守基因序列,建立了PCR和实时PCR检测野兔热的方法。将建立的方法应用于临床样品... 野兔热是由土拉弗朗西斯菌引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为加强口岸对进境野生及实验用兔中野兔热的筛查和流行病学调查,基于土拉弗朗西斯菌保守基因序列,建立了PCR和实时PCR检测野兔热的方法。将建立的方法应用于临床样品检测发现经PCR检测,仅有土拉弗朗西斯菌DNA出现条带单一的特异性基因扩增,经实时PCR检测,土拉弗朗西斯菌DNA在10~12个循环处出现显著扩增,对照病毒样品未见扩增;PCR检测土拉弗朗西斯菌DNA模板的下限量为100~10 pg,而实时PCR检测的下限量为100~10 fg。检测结果证实两种检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于野兔热的快速检测。 展开更多

关键词 野兔热 PCR REAL-TIMEPCR TAQMAN探针

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进口饲料中沙门氏菌的分离鉴定及其药敏分析 被引量：2

8

作者 林颖峥 陈志飞 +5 位作者 费娅绯 李思思 张强 陈皆蒨 王恒安 李树清 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期45-50,共6页

为了解进口饲料中沙门氏菌的耐药情况,分离、鉴定进口饲料中的沙门氏菌,采用药敏试剂盒对分离的沙门氏菌菌株进行了14种抗菌药物的敏感性试验。结果显示,从进口饲料中分离鉴定出的148株沙门氏菌对14种抗菌药物的敏感率均在93%(138/148)... 为了解进口饲料中沙门氏菌的耐药情况,分离、鉴定进口饲料中的沙门氏菌,采用药敏试剂盒对分离的沙门氏菌菌株进行了14种抗菌药物的敏感性试验。结果显示,从进口饲料中分离鉴定出的148株沙门氏菌对14种抗菌药物的敏感率均在93%(138/148)以上,对阿奇霉素完全敏感;148株沙门氏菌中有8株具有耐药性,以多重耐药为主,分离自7个国家和地区的样品。结果说明,进口饲料中沙门氏菌耐药率相对较低,但部分国家样品中的沙门氏菌存在耐药,而且多为多重耐药。建议加强进口饲料中的沙门氏菌及其耐药性监测,防止国外沙门氏菌,特别是耐药沙门氏菌的传入。 展开更多

关键词 沙门氏菌 饲料 耐药性 药敏试验

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检测胸膜肺炎放线杆菌7型抗体的竞争ELISA方法的建立与应用

9

作者 李树清 陈志飞 +7 位作者 张强 吴建祥 刘雨潇 王巧全 林颖峥 宋青 唐智芳 陆承平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1829-1837,共9页

针对猪传染性胸膜肺炎(App)最主要的流行血清型7型,建立该型特异的抗体检测方法,并应用于出入境检疫。使用App 7型参考菌株制备单克隆抗体,基于辣根过氧化物酶标记的单抗,建立检测App 7型抗体的竞争ELISA方法,用于检测出入境临床采集及... 针对猪传染性胸膜肺炎(App)最主要的流行血清型7型,建立该型特异的抗体检测方法,并应用于出入境检疫。使用App 7型参考菌株制备单克隆抗体,基于辣根过氧化物酶标记的单抗,建立检测App 7型抗体的竞争ELISA方法,用于检测出入境临床采集及免疫接种的猪血清样品,并与商品化进口试剂盒进行比较。结果显示制备的单抗为IgM,与App 7型参考菌株之外的其他14个血清型以及27株其他相关菌株均无交叉反应。建立的竞争ELISA方法只能检测App 7型抗体,特异性好。用该方法检测App 7型参考菌株免疫猪的血清,免疫后14d可检出抗体,35d抗体滴度达峰值,并维持此滴度至143d。使用建立的竞争ELISA检测免疫猪及临床血清样品260份,结果与法国IDvet试剂盒检测符合率为97.2%,与加拿大Biovet试剂盒检测符合率为97.9%~98.2%。建立的竞争ELISA方法可以应用于App 7型抗体的检测。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌7型 抗体检测 竞争ELISA

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扇棘单睾吸虫Real-time PCR与常规PCR检测方法的建立

10

作者 李树清 梅雪芳 +8 位作者 林颖峥 石云良 黄腾飞 王巧全 张强 陈志飞 宋青 唐智芳 黄维义 《动物医学进展》 北大核心 2015年第12期62-67,共6页

根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的... 根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫,并用测序进行验证,检验方法的准确性和实用性。结果表明,建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段,不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增;敏感性试验表明,real-time PCR和常规PCR检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的realtime PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.998)。鉴定来自犬猫的吸虫17条,结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。 展开更多

关键词 扇棘单睾吸虫 实时荧光定量PCR 常规PCR 鉴定

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可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立

11

作者 熊炜 魏晓锋 +6 位作者 王艳 林颖峥 张强 李春阳 黄忠荣 胡建华 李健 《中国动物检疫》 CAS 2016年第12期75-77,84,共4页

由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法... 由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 环介导等温核酸扩增技术 可视化

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喹诺酮类药物的抗菌和抗性机制 被引量：12

12

作者 卞佳豪 奉竹 +4 位作者 林颖峥 李思思 李树清 王恒安 陈志飞 《中国兽药杂志》 2020年第1期80-85,共6页

喹诺酮类药物是广泛使用的一类抗菌药物,日趋严峻的细菌耐药性已严重威胁其临床应用。介绍喹诺酮类药物的发展过程,其靶向细菌DNA促旋酶(DNA gyrase)和拓扑异构酶Ⅳ(topoisomeraseⅣ)抑制DNA复制的抗菌机制,并进一步探讨了细菌对喹诺酮... 喹诺酮类药物是广泛使用的一类抗菌药物,日趋严峻的细菌耐药性已严重威胁其临床应用。介绍喹诺酮类药物的发展过程,其靶向细菌DNA促旋酶(DNA gyrase)和拓扑异构酶Ⅳ(topoisomeraseⅣ)抑制DNA复制的抗菌机制,并进一步探讨了细菌对喹诺酮类药物的抗性机制,包括染色体编码药物靶酶DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的点突变,染色体编码的调节蛋白突变所引发的药物输入蛋白下调或药物输出蛋白上调,以及质粒编码的可阻断药物与靶酶的相互作用、增加药物输出和改变药物代谢等抗性蛋白。研究喹诺酮的抗菌原理及细菌对喹诺酮的抗性机制,将有助于筛查和防控喹诺酮耐药菌。 展开更多

关键词 喹诺酮 抗菌机制 细菌 抗性机制

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五种重要犬病毒微流控芯片检测方法的建立及应用 被引量：4

13

作者 熊炜 林颖峥 +4 位作者 薛俊欣 蒋静 王巧全 张强 李健 《中国动物检疫》 CAS 2021年第5期104-108,共5页

狂犬病毒、伪狂犬病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒是引起犬科动物重要传染病的5种病毒,严重威胁着犬科动物的健康,是出入境犬科动物重点筛查的致病因子。为提升口岸进出境犬科动物检疫工作效率,建立了上述5种病毒微流控芯片... 狂犬病毒、伪狂犬病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒是引起犬科动物重要传染病的5种病毒,严重威胁着犬科动物的健康,是出入境犬科动物重点筛查的致病因子。为提升口岸进出境犬科动物检疫工作效率,建立了上述5种病毒微流控芯片检测方法。在建立5种病毒环等温扩增检测技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)的基础上,将这些LAMP检测体系固化在同一块塑料芯片上,制备了同步高通量快速检测微流控芯片,并将其应用于临床检测。结果显示:微流控芯片检测方法具有良好的特异性,含有目的基因的阳性样本仅在芯片上相应病毒反应槽出现显著扩增,而其他病毒反应槽未出现扩增,彼此无交叉反应;微流控芯片的敏感性与LAMP方法一致;通过检测不同时期收集的感染犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒临床样本,证实建立的微流控芯片检测方法具有良好的稳定性和可靠性。与现有核酸检测方法相比,微流控芯片可以在受试核酸上样40 min内完成上述5种犬病毒的快速筛查,从而满足进出境犬科动物快速检疫的需求。 展开更多

关键词 微流控芯片 狂犬病毒 伪狂犬病毒 犬瘟热病毒 犬细小病毒 犬冠状病毒

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牛血清中6种外源性病毒的液相芯片检测方法建立 被引量：2

14

作者 王艳 严敏鸣 +5 位作者 黄忠荣 张磊萍 张强 林颖峥 熊炜 李树清 《安徽农业科学》 CAS 2020年第23期116-118,124,共4页

为建立牛血清中6种外源性病毒(BVDV、BPV、BTV、REOV、BPyV、RABV)的液相芯片检测方法,根据6种病毒的高度保守区域设计引物和探针,通过杂交偶联检测,利用Luminex检测仪检测荧光信号,建立了牛血清中6种外源性病毒的快速检测方法。结果表... 为建立牛血清中6种外源性病毒(BVDV、BPV、BTV、REOV、BPyV、RABV)的液相芯片检测方法,根据6种病毒的高度保守区域设计引物和探针,通过杂交偶联检测,利用Luminex检测仪检测荧光信号,建立了牛血清中6种外源性病毒的快速检测方法。结果表明,该试验建立的检测体系具有良好的特异性和敏感性,其检测灵敏度可达50拷贝/反应。该研究初步建立了同时检测牛血清中6种外源性病毒的液相芯片检测方法,为牛血清的质量把关提供了技术支持。 展开更多

关键词 牛血清 外源性病毒 液相芯片

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欧盟动物进境检疫法规体系概述及启示 被引量：1

15

作者 薛俊欣 乔彩霞 +6 位作者 方海萍 林颖峥 蒋静 冯之航 王艳 李健 季新成 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期52-60,共9页

欧盟在根除动物疫病方面积累了丰富的经验,动物疫病防范制度完善,现有法规体系的动物疫情防控效果理想。欧盟进境动物检疫重视风险分析,对授权进口动物的基本卫生要求普遍较高,对出口欧盟的国家、地区实行清单管理,对主要检疫疫病的最... 欧盟在根除动物疫病方面积累了丰富的经验,动物疫病防范制度完善,现有法规体系的动物疫情防控效果理想。欧盟进境动物检疫重视风险分析,对授权进口动物的基本卫生要求普遍较高,对出口欧盟的国家、地区实行清单管理,对主要检疫疫病的最短无疫时间做了明确规定,动物境外隔离期限较长而境内隔离期限较短。由此建议,我国应强化风险分析在动物进境检疫中的预警作用,在法律层面完善准入清单制度,并对特定疫病做附加规定,依据疫病特点规定出口国最短无疫时间,适当增加境外隔离检疫期限并减少境内隔离检疫期限。本文对于提升和完善我国进境动物检疫工作具有参考意义。 展开更多

关键词 欧盟 进境动物检疫 动物卫生 法规体系

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