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基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析
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作者 江锦秀 张靖鹏 +3 位作者 林裕胜 刘维巍 胡奇林 万春和 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1684-1695,共12页
热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实... 热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 HSP70基因 TaqMan实时荧光定量PCR方法 序列分析
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猪流行性腹泻病毒S、N和ORF3基因的遗传变异分析 被引量:30
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作者 王隆柏 林裕胜 +4 位作者 车勇良 吴学敏 陈如敬 邵良平 周伦江 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2014年第11期1830-1836,共7页
为探明2012—2013年在福建省流行猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白的遗传变异情况,对7株PEDV流行毒株的S、N及ORF3基因进行克隆、测序及分析。结果表明:7株PEDV S基因之间的核苷酸相似性为98.6%<sup>9</sup>9.4%,与attenua... 为探明2012—2013年在福建省流行猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白的遗传变异情况,对7株PEDV流行毒株的S、N及ORF3基因进行克隆、测序及分析。结果表明:7株PEDV S基因之间的核苷酸相似性为98.6%<sup>9</sup>9.4%,与attenuated DR13弱毒株和CV777标准株的相似性分别为93.7%<sup>9</sup>4.1%和93.8%<sup>9</sup>4.1%;同CV777标准株比较,存在64个氨基酸突变,其中有3个氨基酸较以往国内外流行毒株的变异不一样,为新变异氨基酸,氨基酸的插入和缺失与2008年泰国NPPED2008<sub>2</sub>株相似;7株PEDV毒株的N基因和ORF3基因之间核苷酸的相似性分别为96.5%<sup>9</sup>9.7%和99.7%<sup>1</sup>00%,与CV777标准株的相似性分别为96.6%<sup>9</sup>8.0%和96.6%<sup>9</sup>6.9%。遗传进化树表明:7株PEDV毒株的S基因和ORF3基因与泰国流行毒株的亲缘关系较近,N基因与CV777标准株亲缘关系较近。7株PEDV毒株的S基因和ORF3基因变异程度较大,可能源于泰国及韩国的变异株。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 N基因 ORF3基因 变异分析
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副猪嗜血杆菌病诊断方法研究进展 被引量:7
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作者 王晨燕 林裕胜 +2 位作者 车勇良 周伦江 邵良平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期86-90,共5页
近几年来,临床上表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎的病猪屡见不鲜,从患病猪的病理脏器中分离出副猪嗜血杆菌的比例越来越高。由于该菌分离培养条件苛刻,无法满足临床诊断的需要,新的诊断方法正在推进,有的已经在兽医临床上应用。论... 近几年来,临床上表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎的病猪屡见不鲜,从患病猪的病理脏器中分离出副猪嗜血杆菌的比例越来越高。由于该菌分离培养条件苛刻,无法满足临床诊断的需要,新的诊断方法正在推进,有的已经在兽医临床上应用。论文从病原分离培养、抗体检测、菌株分型和分子生物学诊断等4个方面对副猪嗜血杆菌病的诊断方法进行概述和比较。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 诊断方法 菌株分型 分子生物学 聚合酶链反应
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羊传染性脓疱病毒研究进展 被引量:16
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作者 林裕胜 江锦秀 +1 位作者 林甦 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期91-96,共6页
羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特... 羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特征、致病性、致病机理、免疫机理、免疫逃逸机制、检测方法和疫苗研究进行了综述。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 致病机理 免疫机理 检测方法 疫苗
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福建省羊传染性脓疱病毒F1L、B2L和VIR基因的遗传变异分析 被引量:6
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作者 林裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期1-6,共6页
为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株ORFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFV F1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96... 为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株ORFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFV F1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.8%~99.7%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.3%~97.1%;同NZ2参考株比较,FJ-YT2014缺失2个氨基酸;10株ORFV B2L基因之间核苷酸序列同源性为97.5%~99.9%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.5%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.7%~97.7%;10株ORFV VIR基因之间的核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,与国内株的核苷酸序列同源性为94.6%~99.6%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为94.6%~96.4%。基于基因核苷酸序列的遗传进化分析表明,10株ORFV F1L基因与福建省分离株、山西株和新疆株亲缘关系较近;10株ORFV B2L基因与新疆、山西、德国毒株亲缘关系较近;10株ORFV VIR基因与台湾、新疆株亲缘关系较近。结果提示,当前福建省流行的ORFV F1L、B2L和VIR基因尚未出现明显变异,但是其F1L、B2L和VIR基因核苷酸序列之间普遍存在异质性。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 B2L基因 VIR基因 变异分析
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山羊莱氏无胆甾原体FJ-NP株的分离鉴定 被引量:2
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作者 江锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 江斌 胡奇林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3329-3335,共7页
为明确福建省某羊场发生的疑似羊支原体性肺炎病例的病原,利用支原体培养基对发病羊肺脏组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,并对分离株16SrRNA进行测序分析。结果显示,分离株菌落呈油煎蛋状,有棕黄色... 为明确福建省某羊场发生的疑似羊支原体性肺炎病例的病原,利用支原体培养基对发病羊肺脏组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,并对分离株16SrRNA进行测序分析。结果显示,分离株菌落呈油煎蛋状,有棕黄色中心突起;能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,氯化四氮唑还原反应、胆固醇需要试验、血细胞吸附试验及溶血试验的结果均为阴性,美兰还原反应阳性。经PCR扩增出莱氏无胆甾原体支原体(Acholeplasma laidlawii,AL)大小为505bp的特异性目的片段,分离株16SrRNA序列与莱氏无胆甾原体标准株PG8同源性为99.8%。鉴定结果表明,本次从山羊肺脏组织分离到的支原体为莱氏无胆甾原体,命名为FJ-NP株,但该分离株与山羊发病性的关系有待进一步研究。 展开更多
关键词 山羊支原体性肺炎 莱氏无胆甾原体 分离 鉴定
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福建省部分养殖场鸡圆圈病毒3型病原检测及VP2基因分析 被引量:4
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作者 林裕胜 余明兴 +6 位作者 陈长福 张龙 江锦秀 张靖鹏 刘维巍 刘庆华 胡奇林 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期12-16,共5页
为了解福建省鸡场圆圈病毒3型(GyV3)的流行及其VP2基因变异情况,2021年在南平市、龙岩市和福州市的36个鸡场,采集365份疑似GyV3感染病鸡的腺胃样品,通过PCR进行GyV3核酸检测。结果显示:共检出GyV3核酸阳性55份,阳性检出率为15.06%。对5... 为了解福建省鸡场圆圈病毒3型(GyV3)的流行及其VP2基因变异情况,2021年在南平市、龙岩市和福州市的36个鸡场,采集365份疑似GyV3感染病鸡的腺胃样品,通过PCR进行GyV3核酸检测。结果显示:共检出GyV3核酸阳性55份,阳性检出率为15.06%。对5份GyV3阳性样品进行VP2基因序列分析发现,5份样品的VP2基因核苷酸和推导氨基酸序列相似性分别为98.6%~99.9%和98.3%~100%,与参考株山东肉鸡分离株SDAU-1和巴西家鸡分离株核苷酸和推导氨基酸序列的相似性分别为98.3%~99.2%和97.5%~99.2%,均属于Group A分支中的GyV3小分支。结果表明:福建省鸡场存在GyV3流行;其VP2基因遗传序列稳定,可作为GyV3感染流行病学监测的首选基因。本研究为GyV3的后续研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 鸡圆圈病毒3型 VP2基因 流行病学 序列分析
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福建省福清市山羊地方性鼻内肿瘤病毒2型感染流行病学调查 被引量:2
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作者 张靖鹏 陈芹 +12 位作者 刘维巍 陈勇 江锦秀 吴丹 林裕胜 方玉琴 郑晓何 黄守愚 杨陈文 林秀敏 林银娇 胡奇林 毛坤明 《中国动物检疫》 CAS 2023年第6期25-30,共6页
为了解福建省福清市山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)流行及遗传变异情况,通过Taq Man qPCR检测方法,对998份山羊鼻拭子样品进行ENTV-2核酸检测,并对阳性样品SU蛋白编码基因进行遗传进化分析。结果显示:在福清市16个镇街40个山羊养殖场户... 为了解福建省福清市山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)流行及遗传变异情况,通过Taq Man qPCR检测方法,对998份山羊鼻拭子样品进行ENTV-2核酸检测,并对阳性样品SU蛋白编码基因进行遗传进化分析。结果显示:在福清市16个镇街40个山羊养殖场户中,共检测出19个阳性场户、89份阳性样品,场阳性率为47.50%,个体阳性率为8.92%;9份阳性样品的SU蛋白编码基因均与ENTV-2位于同一进化分支,其中2份阳性样品处于相对独立的分支,与ENTV-2流行株同源性约为96%,且各有5处氨基酸突变,其他阳性样品与ENTV-2流行株同源性在99%以上,氨基酸序列一致。结果表明,ENTV-2在福清市流行较为广泛,流行毒株出现了一定的变异,需要持续加强监测,采取综合措施控制该病流行。本研究有助于了解和掌握ENTV-2在山羊群中的感染情况和遗传变异特征,为提高该病防治效果奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊地方性鼻内肿瘤病毒2型 流行病学 福清 qPCR
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