嗜水气单胞菌外膜蛋白ISCOM疫苗免疫欧洲鳗鲡后抗体分泌细胞变化

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作者 林晨韬 黄春兰 +2 位作者 李艳虹 李盼 宋铁英 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期859-863,共5页

制备嗜水气单胞菌MOMP-ISCOMs疫苗,使用该疫苗口服和注射免疫欧洲鳗鲡,分别于口服或注射免疫后第14、28d分离欧洲鳗鲡的皮肤和肾脏细胞,使用ELISPOT技术分析其中抗体分泌细胞ASC的数量变化。结果显示:2种免疫方式均能不同程度增加皮肤... 制备嗜水气单胞菌MOMP-ISCOMs疫苗,使用该疫苗口服和注射免疫欧洲鳗鲡,分别于口服或注射免疫后第14、28d分离欧洲鳗鲡的皮肤和肾脏细胞,使用ELISPOT技术分析其中抗体分泌细胞ASC的数量变化。结果显示:2种免疫方式均能不同程度增加皮肤和肾脏中免疫细胞的数量;其中口服免疫组非特异性免疫细胞数量增加速度较快,注射免疫组特异性免疫细胞数量增加更多。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 欧洲鳗鲡 外膜蛋白ISCOMs疫苗 皮肤 肾脏 ASC

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嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析 被引量：4

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作者 李盼 李素一 +3 位作者 吴唯维 林天龙 林晨韬 陈叙 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期844-848,共5页

为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化... 为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定抗体效价达到1∶100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48h后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 DNA疫苗 外膜蛋白

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斑马鱼在鱼类病原免疫学研究中的应用 被引量：3

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作者 吴唯维 李盼 +5 位作者 柯翎 李素一 陈华 陈叙 林天龙 林晨韬 《福建农业学报》 CAS 2014年第6期602-607,共6页

斑马鱼全基因组测序已经完成,建立了多个专门的在线数据库,作为模式生物在遗传学、发育生物学等领域已得到了广泛的应用。本文介绍了斑马鱼用于鱼类病原免疫学研究的优点,包括个体发育过程透明、免疫系统较成熟,具有先天性和获得性2种... 斑马鱼全基因组测序已经完成,建立了多个专门的在线数据库,作为模式生物在遗传学、发育生物学等领域已得到了广泛的应用。本文介绍了斑马鱼用于鱼类病原免疫学研究的优点,包括个体发育过程透明、免疫系统较成熟,具有先天性和获得性2种免疫系统;多种鱼类来源的细菌和病毒在成年斑马鱼和胚胎中都能感染和复制,使其成为研究鱼类病原的入侵机制和宿主免疫应答的模式生物。同时,对当前已建立的鱼类细菌和病毒病原斑马鱼感染模型以及在疫苗方面的研究现状作简要概述。 展开更多

关键词 斑马鱼 病原 免疫 模式生物

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创伤弧菌铁调基因fur的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：2

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作者 李素一 张丽娟 +3 位作者 陈华 柯翎 陈叙 林晨韬 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第9期912-916,共5页

应用PCR方法克隆了创伤弧菌Vibrio vulnificus FJ03-X2株的铁调基因fur(Ferric uptake regulator),该基因片段大小为450bp,编码149个氨基酸;以pET32a为表达载体,构建了原核表达质粒pET32a-FUR,表达质粒测序结果表明目的基因与GenBank中... 应用PCR方法克隆了创伤弧菌Vibrio vulnificus FJ03-X2株的铁调基因fur(Ferric uptake regulator),该基因片段大小为450bp,编码149个氨基酸;以pET32a为表达载体,构建了原核表达质粒pET32a-FUR,表达质粒测序结果表明目的基因与GenBank中报道的创伤弧菌fur基因的同源性达98%以上;诱导表达获得可溶性的重组表达蛋白rFUR。镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化rFUR,SDS-PAGE电泳分析其分子量约33kD。以纯化后的融合蛋白rFUR为抗原,4次免疫SD大鼠,制备抗rFUR蛋白大鼠多克隆抗体。用ELISA方法检测鼠多克隆抗体的效价达到1∶256 000,表明融合蛋白rFUR具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 创伤弧菌 铁调基因fur 克隆 原核表达 多克隆抗体

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创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达 被引量：2

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作者 李素一 吴唯维 +5 位作者 李盼 柯翎 许斌福 林晨韬 林天龙 陈叙 《福建农业学报》 CAS 2013年第6期517-521,共5页

创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋... 创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋白rompU以可溶形式表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的rompU为与预期大小一致的单一条带。将纯化的rompU免疫SD级大鼠,ELISA检测收获的多克隆抗体血清效价,并通过Western-blot证实该OmpU多克隆抗体可以识别创伤弧菌FJ03-X2株中的天然外膜蛋白OmpU。 展开更多

关键词 创伤弧菌 外膜蛋白OmpU 克隆 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

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CpG-ODN 2006对斑马鱼抗创伤弧菌感染的作用 被引量：2

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作者 陈华 李素一 +3 位作者 张丽娟 柯翎 陈叙 林晨韬 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第1期1-6,共6页

为创建环境友好的免疫预防技术,分析CpG-ODN对斑马鱼抗创伤弧菌感染的作用,采用PBS(对照)和人工合成的CpG-ODN 2006(试验组)序列分别注射斑马鱼,48h后创伤弧菌FJ03-X2进行攻毒,收集斑马鱼的肠道和肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real... 为创建环境友好的免疫预防技术,分析CpG-ODN对斑马鱼抗创伤弧菌感染的作用,采用PBS(对照)和人工合成的CpG-ODN 2006(试验组)序列分别注射斑马鱼,48h后创伤弧菌FJ03-X2进行攻毒,收集斑马鱼的肠道和肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real-time RT-PCR检测相关基因的表达。结果表明,24h后CpG-ODN2006组的免疫保护率高达70.0%;相关免疫基因表达检测结果发现CpG-ODN 2006组肠道中lysozyme、Myd88、tlrs和tnf的mRNA水平显著下调,而il1b和il10则显著上调;肾脏中的基因表达差异更为明显:lysozyme显著上调,il1b、myd88、tnf、ifng1-2、il10、il22均显著下调。结果表明CpG-ODN 2006通过调节斑马鱼肾脏及肠道中非特异性免疫相关基因的表达,维持免疫系统的平衡,增强抗创伤弧菌FJ03-X2感染的能力。 展开更多

关键词 斑马鱼 CPG-ODN 创伤弧菌 非特异性免疫

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对两种不同投料方式的大黄鱼肠道菌群结构分析 被引量：2

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作者 柯翎 李素一 +4 位作者 张丽娟 陈华 林晨韬 龚晖 陈叙 《畜禽业》 2019年第3期4-5,共2页

为了解在不同投喂方式下大黄鱼的肠道微生态结构,研究采用高通量测序的方法对投喂冰鲜饲料和投喂颗粒饲料的大黄鱼的肠道菌群进行高通量测序,分析了肠道菌群结构差异。研究表明:变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌... 为了解在不同投喂方式下大黄鱼的肠道微生态结构,研究采用高通量测序的方法对投喂冰鲜饲料和投喂颗粒饲料的大黄鱼的肠道菌群进行高通量测序,分析了肠道菌群结构差异。研究表明:变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、蓝藻门(Cyanobacteria)是大黄鱼肠道的主要菌群,其中变形菌门的丰度超过了30%;不同投喂组的大黄鱼肠道菌群结构存在一定差异,投喂冰鲜料组大黄鱼肠道内菌群OTUs和菌群的α多样性略低于投喂颗粒料的。 展开更多

关键词 大黄鱼 投喂 肠道 菌群结构

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华支睾吸虫病诊断学研究进展 被引量：1

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作者 陈叙 林晨韬 《福建农业科技》 2012年第10期75-78,共4页

华支睾吸虫病是主要流行于东亚地区的一种由华支睾吸虫所引起的寄生虫病,传统的病原学诊断方法有着明显的局限和弊病,免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进,华支睾吸虫病... 华支睾吸虫病是主要流行于东亚地区的一种由华支睾吸虫所引起的寄生虫病,传统的病原学诊断方法有着明显的局限和弊病,免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进,华支睾吸虫病诊断的敏感性和特异性不断提高。该文着重对华支睾吸虫病的免疫诊断尤其是诊断抗原的研究进展简要综述。 展开更多

关键词 华支睾吸虫病 诊断 抗原 研究进展

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斑马鱼g型溶菌酶基因序列分析及其原核表达 被引量：3

9

作者 陈华 林晨韬 +1 位作者 陈曦 葛均青 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期229-237,共9页

【目的】实现斑马鱼g型溶菌酶在大肠杆菌中表达,以获得高纯度且具溶菌活性的融合蛋白,为探究g型溶菌酶在斑马鱼抗菌过程中的作用机制及其开发利用打下基础。【方法】通过ClustalW、ExPASy、SignalP-5.0 Server及PSIPRED等在线软件对斑马... 【目的】实现斑马鱼g型溶菌酶在大肠杆菌中表达,以获得高纯度且具溶菌活性的融合蛋白,为探究g型溶菌酶在斑马鱼抗菌过程中的作用机制及其开发利用打下基础。【方法】通过ClustalW、ExPASy、SignalP-5.0 Server及PSIPRED等在线软件对斑马鱼g型溶菌酶进行生物信息分析,经密码子优化后合成斑马鱼g型溶菌酶基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达,并通过非干扰型蛋白浓度测定试剂盒和溶菌酶测定试剂盒(比浊法)测定其浓度及溶菌活性。【结果】从GenBank检索获得的斑马鱼溶菌酶基因g1(NM_001002706.1)和g2(XM_002664371.5)分别命名为Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2。Zeb-Lys-g1基因开放阅读框(ORF)长591 bp,共编码196个氨基酸残基,其编码蛋白分子量约21.6 kD;Zeb-Lys-g2的ORF长576 bp,共编码191个氨基酸残基,其编码蛋白分子量约21.1 kD;2种斑马鱼g型溶菌酶序列中均含有2个半胱氨酸残基及3个保守的催化残基位点(Glu、Asp和Asp)。Zeb-Lys-g1的N端含有17个氨基酸的信号肽,而Zeb-Lys-g2不存在典型的信号肽结构,但其三级结构均具有多个α-螺旋结构。在基于溶菌酶序列相似性构建的系统发育进化树中,Zeb-Lys-g1序列与金鱼g型溶菌酶序列的亲缘关系最近,而Zeb-Lys-g2序列与鲈形目和鲽形目鱼类的g型溶菌酶序列亲缘关系较近。将合成的斑马鱼g型溶菌酶基因(Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2)亚克隆至pET-28a(+)表达载体并转化BL21(DE3)感受态细胞,20℃下经IPTG(终浓度0.5 mmol/L)诱导16 h,可获得融合蛋白Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2,纯化后的浓度分别为1.01和1.66 mg/mL,对应的溶菌活性分别为689.68和44.39 U/mg。【结论】鱼类g型溶菌酶的基因变异较保守,经密码子优化及全基因合成方式合成的斑马鱼g型溶菌酶基因Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2可通过原核表达获得高纯度、高溶菌活性的融合蛋白,为探究斑马鱼溶菌酶的抗菌机制提供了技术支持。 展开更多

关键词 斑马鱼 g型溶菌酶 序列特征 原核表达 溶菌活性

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饲料中添加裂殖壶菌对斑马鱼抗创伤弧菌感染的影响 被引量：1

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作者 陈华 张丽娟 +3 位作者 李素一 柯翎 陈叙 林晨韬 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1117-1123,共7页

【目的】研究饲料中添加裂殖壶菌对鱼类抗细菌感染能力的影响,为裂殖壶菌作为饲料添加剂的应用提供理论基础。【方法】以6个月的成年斑马鱼为研究对象,以基础颗粒饲料为对照组(C组),试验组在基础饲料中添加干重3%的裂殖壶菌(S组),进行2... 【目的】研究饲料中添加裂殖壶菌对鱼类抗细菌感染能力的影响,为裂殖壶菌作为饲料添加剂的应用提供理论基础。【方法】以6个月的成年斑马鱼为研究对象,以基础颗粒饲料为对照组(C组),试验组在基础饲料中添加干重3%的裂殖壶菌(S组),进行28 d饲喂试验。28 d后以创伤弧菌Vibrio vulnificus菌株FJ03-X2对斑马鱼进行攻毒,统计免疫保护率,并收集斑马鱼的肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real-time RT-PCR检测相关基因lysozyme和tnfb的表达。【结果】饲料中添加3%裂壶菌能够显著提高斑马鱼感染创伤弧菌后的存活率,相对保护率为42.8%;Real-time RT-PCR检测的结果发现S组的斑马鱼肾脏中溶菌酶Lysozyme的mRNA水平极显著高于对照组(P<0.01),而肿瘤坏死因子TNFb的m RNA水平则极显著低于对照组(P<0.01)。【结论】裂殖壶菌作为营养添加剂可以提高斑马鱼抗创伤弧菌感染的能力。 展开更多

关键词 裂殖壶菌 斑马鱼 创伤弧菌 饲料添加剂

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新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin在毕赤酵母中的表达 被引量：2

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作者 张丽娟 吴唯维 +4 位作者 李素一 陈华 柯翎 陈叙 林晨韬 《福建畜牧兽医》 2021年第2期19-21,共3页

前期采用差减杂交的方法筛选到新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin,其基因全长为477 bp,编码159个氨基酸,理论分子量约17.4 kDa。为了获得具活性的大量表达的抗菌肽,本研究利用毕赤酵母表达了elecilin。首先将elecilin基因克隆至酵母分泌表达载... 前期采用差减杂交的方法筛选到新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin,其基因全长为477 bp,编码159个氨基酸,理论分子量约17.4 kDa。为了获得具活性的大量表达的抗菌肽,本研究利用毕赤酵母表达了elecilin。首先将elecilin基因克隆至酵母分泌表达载体pPICZaA,构建了重组分泌表达质粒pPICZaA-elecilin,电击转化毕赤酵母X-33。经Zeocin筛选和PCR鉴定,获得重组酵母菌,通过甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实诱导后的培养基中存在与预期分子量大小相一致的蛋白,能被His-tag单克隆抗体识别,表明利用酵母成功表达了欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin。这为进一步研究该抗菌肽的功能及作为饲料添加剂的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 欧洲鳗鲡 抗菌肽 表达 毕赤酵母

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卵黄抗体在水产养殖病害防治中的应用 被引量：8

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作者 俞晶晶 萧枪枪 +2 位作者 郑晨阳 赵轩 林晨韬 《水产养殖》 CAS 2022年第2期44-50,共7页

简述了卵黄抗体的基本特性、产生、作用机制、分离提取和纯化以及卵黄抗体在水产动物细菌性和病毒性疾病防治中的应用,可为今后卵黄抗体的研究及应用提供参考。

关键词 卵黄抗体 水产养殖 病害防治

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卵黄抗体替代抗生素在抗水生致病菌感染中的应用

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作者 陈弘立 赵轩 +2 位作者 徐冰洋 秦艺铭 林晨韬 《福建畜牧兽医》 2023年第6期49-52,共4页

本文简述卵黄抗体的特性和作为抗生素替代的可能性,并阐述其在抵抗不同的水生致病菌感染中的应用效果,为卵黄抗体作为抗生素替代物的研究及在水产养殖中的应用提供参考。

关键词 抗生素替代 卵黄抗体 水生致病菌

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