实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分 被引量：13

1

作者 林彦星 张彩虹 +8 位作者 阮周曦 刘建利 宗卉 廖立珊 孙洁 杨俊兴 吕建强 花群义 曹琛福 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期48-53,共6页

根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的... 根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 检测 鸭源性成分

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猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化 被引量：4

2

作者 林彦星 孙彦伟 +3 位作者 刘镇明 徐铮 鲁俊鹏 龚善中 《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期66-70,共5页

对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE... 对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 重组原核表达载体 重组CAP蛋白 表达 纯化

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我国出口水产品遭遇的技术性贸易措施及对策 被引量：6

3

作者 林彦星 吴江 +1 位作者 刘宵宵 罗焕亮 《安徽农业科学》 CAS 2015年第33期288-291,共4页

水产品是我国农产品中最具出口竞争力的产品之一,但近年来不断遭遇国外技术性贸易措施,严重制约了水产品出口贸易的发展。通过对水产品出口贸易情况的研究以及出口受阻情况的分析,遭遇的技术性贸易措施主要来自日本、美国、欧盟和韩国等... 水产品是我国农产品中最具出口竞争力的产品之一,但近年来不断遭遇国外技术性贸易措施,严重制约了水产品出口贸易的发展。通过对水产品出口贸易情况的研究以及出口受阻情况的分析,遭遇的技术性贸易措施主要来自日本、美国、欧盟和韩国等4大出口市场,品质不合格、农兽药残留和微生物污染是出口水产品被通报的主要原因;通过对当前水产品出口面临的主要技术性贸易措施的分析,从完善技术性贸易措施法律法规体系建设、加强技术标准体系和技术性贸易措施保障体系建设、提升水产业结构、发挥行业协会作用、保障产品质量安全、提高水产品附加值及促进出口市场多元化等提出应对国外技术性贸易措施的对策。 展开更多

关键词 出口 水产品 技术性贸易措施 对策

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非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1

4

作者 林彦星 翁巧玉 +10 位作者 阮周曦 吴江 黄超华 金业 陈鹏 张彩虹 杨俊兴 曹琛福 史卫军 刘建利 花群义 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期42-47,共6页

为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,... 为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,酶标单抗以1∶6000稀释,临界值为50.12%。该方法特异性强,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清无交叉反应。对强阳性血清的最低稀释度为1∶640,弱阳性血清的最低稀释度为1∶10,具有较高的敏感性;重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。应用所建立的方法与商品化同类检测试剂盒对174份血清进行检测,ASFV抗体阳性符合率为100%,阴性符合率为96.75%,总符合率为97.28%。建立的阻断ELISA方法可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 单克隆抗体 阻断酶联免疫吸附试验

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牛结核病诊断方法研究进展 被引量：8

5

作者 鲁俊鹏 邹潍力 +2 位作者 林彦星 常孝勇 罗满林 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期25-28,共4页

牛结核病主要是由牛分支杆菌引起的一种人兽共患传染病,近年来发病率有所上升,给奶牛养殖业造成了巨大的危害。目前,牛结核病的诊断仍然以传统的迟发性变态反应试验为主,其他诊断方法有根据临床症状和病理变化诊断、抗酸染色法、细菌分... 牛结核病主要是由牛分支杆菌引起的一种人兽共患传染病,近年来发病率有所上升,给奶牛养殖业造成了巨大的危害。目前,牛结核病的诊断仍然以传统的迟发性变态反应试验为主,其他诊断方法有根据临床症状和病理变化诊断、抗酸染色法、细菌分离培养法、PCR法、血清学方法、淋巴细胞转化试验、γ-干扰素试验和菌体成分检测法等。为了净化该病,必须提高诊断方法的敏感性和特异性。文章对这些诊断方法及其优缺点做了概述,并指出结核病普查检测时,比较合理的诊断方式是迟发性变态反应试验和间接ELISA法同时运用。 展开更多

关键词 牛结核病 牛分支杆菌 诊断方法

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水疱性口炎病毒免提取核酸荧光定量PCR鉴别检测方法的建立 被引量：3

6

作者 张彩虹 林彦星 +6 位作者 杨俊兴 曹琛福 吕建强 黄超华 祁振强 林庆燕 花群义 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期25-29,共5页

为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应... 为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应条件的优化,建立了直接从样品中鉴别VSV-IND和VSV-NJ的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行分析。结果显示,该直扩荧光定量PCR能准确鉴别VSV-IND和VSV-NJ,两者没有交叉反应现象,对其他几种相似病原的灭活抗原,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等检测均呈阴性。对10倍系列稀释的水疱性口炎灭活病毒液的检测敏感性可达10-5,与传统的荧光定量PCR的检测敏感性相当。该方法无需提取核酸,可在2h内完成对样品的检测,结果准确、快速、灵敏,为印第安纳型和新泽西型水疱性口炎病毒的特异性鉴别提供了一种切实可行的方法。 展开更多

关键词 水疱性口炎病毒 直扩荧光定量PCR 鉴别检测

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家蚕微孢子虫诊断方法研究进展 被引量：2

7

作者 曹琛福 林彦星 +1 位作者 吕建强 花群义 《安徽农业科学》 CAS 2016年第2期1-3,15,共4页

自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学... 自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学检测和分子生物学检测方面的研究进行了综述,并且展望未来发展趋势,以期对家蚕微粒子病进行更快速、准确的诊断与防治。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 诊断 方法

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禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法的建立 被引量：3

8

作者 王潇 曹琛福 +3 位作者 黄超华 林彦星 花群义 贾伟新 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期1-7,共7页

为了建立一种简便、快速的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H7亚型的检测方法,根据GenBank中禽流感病毒H7亚型的HA保守序列,并按照RPA引物探针的要求,设计多对引物及探针,通过条件的优化,建立禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法,... 为了建立一种简便、快速的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H7亚型的检测方法,根据GenBank中禽流感病毒H7亚型的HA保守序列,并按照RPA引物探针的要求,设计多对引物及探针,通过条件的优化,建立禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法,并与实时荧光定量PCR方法进行比较。特异性试验结果显示,该方法特异性强,只有禽流感病毒H7亚型出现特异性曲线;灵敏性试验结果显示,该方法能检测到禽流感病毒H7亚型最低浓度为0.24×10-3μg/mL,与实时荧光定量PCR方法相比,灵敏性稍差,但该方法的检测快速,仅需要20min。表明所建立的禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法简单、快速,适合用于禽流感病毒H7亚型的现场检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒H7亚型 重组酶聚合酶扩增(RPA) 等温扩增

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蓝舌病病毒8型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：2

9

作者 林彦星 花群俊 +7 位作者 张彩虹 曹琛福 阮周曦 曾少灵 史卫军 黄超华 杨俊兴 花群义 《动物医学进展》 北大核心 2020年第8期44-48,共5页

根据蓝舌病病毒8型(BTV-8)VP2基因序列(Seg-2)设计特异性引物和探针,建立了BTV-8实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法。结果表明该法特异性强,能准确检测BTV-8核酸,与蓝舌病病毒其他血清型病毒、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、牛病毒性腹... 根据蓝舌病病毒8型(BTV-8)VP2基因序列(Seg-2)设计特异性引物和探针,建立了BTV-8实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法。结果表明该法特异性强,能准确检测BTV-8核酸,与蓝舌病病毒其他血清型病毒、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)等病原核酸无交叉反应;最低可检测核酸浓度为2.8×10^3 copies/mL;Ct值组内和组间变异系数(CV)均小于2%。用所建立方法对115份临床样品进行检测,结果均为阴性,与文献报道的方法检测结果一致。建立的RT-qPCR方法可用于BTV-8的临床检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒8型 实时荧光定量RT-PCR 检测

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非洲马瘟病毒实时荧光RT-RPA快速检测方法的建立 被引量：9

10

作者 史卫军 林彦星 +7 位作者 黄超华 曹琛福 曾少灵 吴江 刘建利 陈兵 阮周曦 花群义 《中国动物检疫》 CAS 2022年第7期119-123,共5页

本研究根据非洲马瘟病毒(AHSV)S7基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了检测AHSV的实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)方法。该方法特异性强,仅AHSV检测为阳性,蓝舌病病毒(BTV)、马流感病毒(EIV)、马动脉炎病毒(EAV)等病原检测... 本研究根据非洲马瘟病毒(AHSV)S7基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了检测AHSV的实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)方法。该方法特异性强,仅AHSV检测为阳性,蓝舌病病毒(BTV)、马流感病毒(EIV)、马动脉炎病毒(EAV)等病原检测均为阴性;灵敏性高,最低检出限为2.36×10^(1)copies/μL;反应快速,检测时间为20 min,同时具有良好的重复性。利用该方法和实时荧光RT-PCR平行检测60份临床样品,符合率为100%。结果表明,本研究建立的AHSV RT-RPA检测方法特异、敏感、快速且结果可靠,适用于AHSV的高通量、快速检测。 展开更多

关键词 非洲马瘟病毒 反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA) 检测

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感染唐鱼的草鱼呼肠孤病毒分离与鉴定

11

作者 吴江 赵现锋 +7 位作者 陈兵 安微 孙洁 林彦星 王津津 廖立珊 赵永刚 兰文升 《中国动物检疫》 CAS 2023年第6期31-37,共7页

广东省某渔场待出境送检唐鱼(Tanichthys albonubes)样品,经病理检查未发现临床症状,取样品的肝、脾和肾等器官组织,用细胞分离培养方法检测病毒性因子,发现该批次唐鱼样品的组织提取物能够造成EPC和CHSE-214细胞发生细胞病变效应(CPE)... 广东省某渔场待出境送检唐鱼(Tanichthys albonubes)样品,经病理检查未发现临床症状,取样品的肝、脾和肾等器官组织,用细胞分离培养方法检测病毒性因子,发现该批次唐鱼样品的组织提取物能够造成EPC和CHSE-214细胞发生细胞病变效应(CPE),确定该样品携带病毒性病原。为探究唐鱼携带病原的种类,针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)S9核酸片段设计特异性引物,对产生CPE的细胞培养物进行RT-PCR核酸扩增和序列测定,用EPC细胞扩增该病毒,获得病毒含量为10^(6.25)TCID_(50)/mL的细胞培养物,通过高通量测序技术分析细胞培养物中的病毒类型,并用不同病毒含量的细胞培养物进行唐鱼感染性试验。测序结果经BLAST比对分析发现,扩增序列与GCRV 873株的S9核苷酸序列同源性达98%,鉴定病原为GCRV,将其命名为GCRV SZ0508株。全基因组测序序列注释为GCRV,通过vp2基因遗传进化分析发现,GCRV SZ0508属于I型GCRV。感染性试验中,感染组100%被感染,死亡率为3.3%,表明分离的GCRV能够感染唐鱼,具有造成唐鱼发生草鱼出血病的风险。 展开更多

关键词 唐鱼 草鱼呼肠孤病毒 Illumina高通量测序技术

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