阿勒泰羊胚胎PDGFD基因编辑研究

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作者 马秀玲 张欣如 +7 位作者 陈莹 梁红艳 古丽米热·阿布都热依木 汪立芹 林嘉鹏 李伟健 王旭光 吴阳升 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1700-1711,共12页

旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-... 旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-sgRNA2、PDGFD-397-sgRNA7),结合Cas9核酸酶进行体外活性分析。电转阿勒泰羊体外受精4~5 h的胚胎Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物(RNP),每组35~40枚,3次重复,培养至第7天统计囊胚率,进行基因组靶基因位点扩增及测序分析。受精卵电转PDGFD和MSTN基因(非PDGFD基因)同源重组基因编辑材料,培养至第7天统计囊胚率及进行PDGFD sgRNA脱靶效率分析。结果表明,5个sgRNA在体外均有高效的切割活性;电转受精卵的存活率和卵裂率与对照组差异均不显著(P>0.05),但电转组囊胚率显著低于对照组(P<0.05)。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊体外胚胎中的编辑效率均高于其它sgRNAs。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊基因组上错配1个碱基的脱靶位点有19个,覆盖在外显子区的基因有CFDP1,APOO,PCDH11X等;错配2个碱基的位点有31个,覆盖在外显子区的基因有TIMM17B、C1H1orf228和TLL1等。电转PDGFD和MSTN基因同源重组编辑材料,两组胚胎的存活率和卵裂率差异不显著(P>0.05),但前者的囊胚率显著低于后者(P<0.0 5)。本研究结果表明,阿勒泰羊PDGFD基因尾脂性状相关SNP位点的CRISPR/Cas9编辑显著降低体外胚胎的囊胚率,因此,PDGFD基因可能影响绵羊早期胚胎的发育。综上所述,PDGFD基因可能对绵羊胚胎的早期发育有着重要的作用。 展开更多

关键词 电转 CRISPR/Cas9 PDGFD 胚胎发育

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尿促性素对中国美利奴羊卵泡诱导发育及活体采卵效果的影响研究

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作者 吴向利 陈莹 +6 位作者 薛利 古丽米热·阿布都热依木 何学城 李勇文 汪立芹 毋状元 林嘉鹏 《中国畜禽种业》 2025年第5期31-40,共10页

该试验通过对104只无繁殖疾病中国美利奴羊(以下简称:中美羊)注射促卵泡生成素(Follicle-stimulat-ing hormone,FSH)及尿促性素(Human menopausal gonadotropin,HMG)激素处理、不同剂量HMG处理、不同放栓时间、不同采卵时间及不同品种... 该试验通过对104只无繁殖疾病中国美利奴羊(以下简称:中美羊)注射促卵泡生成素(Follicle-stimulat-ing hormone,FSH)及尿促性素(Human menopausal gonadotropin,HMG)激素处理、不同剂量HMG处理、不同放栓时间、不同采卵时间及不同品种等方面进行比较卵泡发育情况,分析中美羊平均卵泡数、平均获得卵数及可用卵数等数据,结果显示:与FSH相比,HMG对中美羊活体采卵效果无显著影响(P>0.05)。中美羊放栓7d或放栓13 d均不影响卵母细胞回收数量(P>0.05)。注射300 IUHMG的平均卵泡数、平均获得卵数和可用卵数均极显著低于注射400IU和500 IUHMG组(P<0.01),但400IU与500IU之间无显著差异(P>0.05)。最后一次注射HMG后间隔12h或36h均不会对中美羊活体采卵回收效果产生影响(P>0.05)。HMG能促进中美羊和阿勒泰羊卵泡发育,但两者之间卵母细胞回收数量差异不显著(P>0.05)。可见,中美羊活体采卵时不同的放栓时间不影响卵母细胞回收数量,同时注射适量的HMG能够诱导卵泡发育。 展开更多

关键词 尿促性素:中国美利奴羊 卵泡 活体采卵 卵母细胞

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新疆褐牛和中国荷斯坦牛POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量的关联分析 被引量：3

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作者 林嘉鹏 贺三刚 +4 位作者 白杰 刘磊 杨波 谭立新 刘明军 《中国草食动物》 CAS 2009年第1期6-8,共3页

以新疆褐牛和中国荷斯坦牛为研究对象,应用PCR-RFLP方法对POU1F1基因第6外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。结果表明,新疆褐牛和中国荷斯坦牛的群体在该位点分别有2种等位基因(A/B),频率分别为0.43/0.57和0.33/0.67,B等位... 以新疆褐牛和中国荷斯坦牛为研究对象,应用PCR-RFLP方法对POU1F1基因第6外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。结果表明,新疆褐牛和中国荷斯坦牛的群体在该位点分别有2种等位基因(A/B),频率分别为0.43/0.57和0.33/0.67,B等位基因是优势等位基因。在新疆褐牛群体中,BB型个体的产奶量显著高于AA型(P<0.05)。 展开更多

关键词 新疆褐牛 中国荷斯坦牛 POU1F1 多态性 产奶量

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TLR2基因多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究 被引量：15

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作者 白杰 林嘉鹏 +3 位作者 袁芳 侯敏 李文蓉 刘明军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期356-362,共7页

旨在分析Toll-样受体2在奶牛隐性乳房炎中的作用。本研究以同一牛场内的中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,选取奶牛体细胞数小于20万和大于100万的个体各15头,对TLR2基因进行测序,然后对发现的多态位点进行PCR-RFLP检测,分析这些位... 旨在分析Toll-样受体2在奶牛隐性乳房炎中的作用。本研究以同一牛场内的中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,选取奶牛体细胞数小于20万和大于100万的个体各15头,对TLR2基因进行测序,然后对发现的多态位点进行PCR-RFLP检测,分析这些位点与体细胞评分(SCS)的相关性。结果发现了TLR2基因E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点,其中E+631和E+2260位点为本试验首次发现。E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点在2个品种内均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);3个位点在2个品种间的基因型分布差异都极显著(P<0.01)。分析每个SNP位点与SCS的相关性,显示TLR2E+189位点AA比BB和AB基因型个体的SCS高(P<0.05),AB与BB基因型个体的SCS差异不显著(P>0.05);说明BB基因型个体的乳房炎发病率低。而TLR2E+631的SCS和TLR2E+189位点表现相似,但各个基因型个体间的SCS差异不显著(P>0.05)。E+2260位点AA基因型个体比AB的SCS低(P>0.05)。新疆褐牛的SCS低于荷斯坦牛(P<0.01),说明新疆褐牛乳房炎发病率比荷斯坦牛低。在发现的3个SNP位点中,E+189位点对奶牛的SCS有显著影响(P<0.05),TLR2基因SNP位点在2个品种内的分布差异可能是新疆褐牛比荷斯坦牛乳房炎发病率低的原因之一。 展开更多

关键词 新疆褐牛 TLR2基因 隐性乳房炎 体细胞评分

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NaCl胁迫对小麦生理生化特征的影响 被引量：15

5

作者 石庆华 林嘉鹏 +2 位作者 姚正培 冯海英 石书兵 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1479-1484,共6页

【目的】对不同品种小麦幼苗的盐胁迫,测定其生理生化指标,为进一步的研究工作提供理论基础。【方法】以2个不同品种的小麦幼苗(新冬22号和新冬34号)为试验材料,分别用0.3和0.6mol/LNaCl进行胁迫。盐胁迫后测定可溶性糖、脯氨酸(Pro)和... 【目的】对不同品种小麦幼苗的盐胁迫,测定其生理生化指标,为进一步的研究工作提供理论基础。【方法】以2个不同品种的小麦幼苗(新冬22号和新冬34号)为试验材料,分别用0.3和0.6mol/LNaCl进行胁迫。盐胁迫后测定可溶性糖、脯氨酸(Pro)和丙二醛(MDA)含量以及过氧化物酶活性(POD)4个生理生化指标。【结果】在0.3和0.6mol/LNaCl溶液胁迫下,POD活性差异不显著,其余指标差异极显著。【结论】试验所选两个小麦品种均具有一定的抗盐能力,新冬34号小麦抗盐性相对较强。 展开更多

关键词 小麦 NACL胁迫 生理生化指标

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不同处理方法对萨福克肉羊超排回收效果的影响 被引量：11

6

作者 陈童 林嘉鹏 黄俊成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期159-161,共3页

对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P<0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P>0.05);供体... 对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P<0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P>0.05);供体羊经第二情期或埋栓同期发情处理后均能达到预期的效果,但首次超排和二次超排供体羊胚胎回收率均差异显著(P<0.05)。 展开更多

关键词 萨福克肉羊 超排 输卵管冲胚 胚胎移植

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鹰嘴豆种子蛋白分析 被引量：4

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作者 石庆华 王希东 +2 位作者 张桦 林嘉鹏 陈芯 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期516-520,共5页

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对不同品种的鹰嘴豆的种子蛋白进行分析,结果显示:6种鹰嘴豆种子的蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、盐溶和醇溶蛋白质组成,其中清蛋白和球蛋白种类较多,盐溶蛋白和醇溶蛋白种类较少。在清蛋白和球蛋... 利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对不同品种的鹰嘴豆的种子蛋白进行分析,结果显示:6种鹰嘴豆种子的蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、盐溶和醇溶蛋白质组成,其中清蛋白和球蛋白种类较多,盐溶蛋白和醇溶蛋白种类较少。在清蛋白和球蛋白的种类方面,165号(卡布里型),阿克苏鹰嘴豆(卡布里型),88-1(迪西型)和阿瓦提2号鹰嘴豆(卡布里型)较185号(迪西型)和176号(迪西型)多;在盐溶蛋白和醇溶蛋白种类方面,6个品种的蛋白种类均较少。 展开更多

关键词 鹰嘴豆 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 种子蛋白

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奶牛乳房炎与核转录因子κB基因的表达调控 被引量：3

8

作者 袁芳 刘明军 +2 位作者 白杰 林嘉鹏 侯敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期129-133,共5页

核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,参与机体的免疫反应、细胞黏附、细胞分化、细胞增殖与凋亡及应激反应等。在奶牛感染乳房炎时,大部分涉及中性白细胞移行和激活的炎性蛋白质的编码基... 核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,参与机体的免疫反应、细胞黏附、细胞分化、细胞增殖与凋亡及应激反应等。在奶牛感染乳房炎时,大部分涉及中性白细胞移行和激活的炎性蛋白质的编码基因在他们的启动子区都包含一个可结合NF-κB的κB位点,因此在一定程度上依赖NF-κB调控这些基因的表达。笔者详细的阐述NF-κB基因在奶牛乳房炎发病过程中的特点、作用和表达机制,为从分子水平认识和治疗奶牛乳房炎提供一定的文献支持。 展开更多

关键词 NF-ΚB 奶牛乳房炎 奶牛

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母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达 被引量：5

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作者 侯敏 林嘉鹏 +5 位作者 白洁 赵云程 汪立琴 陈世彬 叶小芳 黄俊成 《中国草食动物》 CAS 2010年第2期5-10,共6页

为探讨母源基因在绵羊卵母细胞和胚胎发育过程中的表达模式,运用Real-time PCR技术研究4种母源基因:Gdf9(生长分化因子9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)及Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)的mRNAs在绵羊GV期卵母细胞,24h成熟... 为探讨母源基因在绵羊卵母细胞和胚胎发育过程中的表达模式,运用Real-time PCR技术研究4种母源基因:Gdf9(生长分化因子9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)及Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)的mRNAs在绵羊GV期卵母细胞,24h成熟卵母细胞,2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞胚胎以及囊胚中的含量变化情况。结果表明:在GV期卵中Zar1、Mater、Gdf9以及Dnmt1m RNA相对含量最高(P<0.05);从2-细胞胚胎开始,4种基因的mRNA相对含量显著降低(P<0.05),各基因mRNA的含量在不同发育阶段的卵母细胞和胚胎中存在动态变化,这对卵子生长和胚胎发育有重要意义。 展开更多

关键词 卵母细胞成熟 早期胚胎发育 母源基因 实时定量PCR 基因表达

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新疆褐牛与荷斯坦牛NF-κB基因表达与TOLL样受体4基因型的关系 被引量：2

10

作者 袁芳 刘明军 +2 位作者 白杰 林嘉鹏 李文蓉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期114-120,共7页

核转录因子NF-κB与动物机体的炎症反应、免疫应答、细胞分化和凋亡等密切相关,而Toll样受体(TLR)通过对侵入机体的病原微生物的抗原识别和信号转导,在NF-κB介导的炎症和免疫应答反应中发挥着重要作用。本研究在新疆褐牛和荷斯坦牛隐... 核转录因子NF-κB与动物机体的炎症反应、免疫应答、细胞分化和凋亡等密切相关,而Toll样受体(TLR)通过对侵入机体的病原微生物的抗原识别和信号转导,在NF-κB介导的炎症和免疫应答反应中发挥着重要作用。本研究在新疆褐牛和荷斯坦牛隐性乳房炎调查和TLR4外显子3+2021位点(E3+2021)SNP基因型与隐性乳房炎相关性研究的基础上,分析和比较了E3+2021 SNP位点3种不同基因型奶牛个体NF-κB信号通路上9个基因(NFκB1、NFκB2、RelA、c-Rel、RelB、IKKα、IKKβ、IKKγ和IκBα基因)转录水平的差异。结果显示,在BB基因型中,NFκB1和IKKα基因的mRNA转录水平在新疆褐牛与荷斯坦牛品种间差异显著(P<0.05),RelA、RelB、IKKβ、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异极显著(P<0.01)。在AB基因型中,IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异显著(P<0.05)。在对新疆褐牛的研究中发现,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异显著(P<0.05);而在荷斯坦牛检测的9个基因的mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异均不显著。因此,Toll样受体信号转导通路下游NFκB1、RelA、IKKβ、IKKγ和IκBα基因的mRNA转录水平在品种间的变化,可能与新疆褐牛乳汁中体细胞数(SCS)显著低于荷斯坦牛相关。在新疆褐牛中,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平的变化可能是AA基因型SCS显著高于AB基因型的原因之一。 展开更多

关键词 新疆褐牛 荷斯坦牛 NF-ΚB 基因型

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BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析 被引量：1

11

作者 王静 石庆华 +4 位作者 林嘉鹏 陈博 汪立芹 赵云程 黄俊成 《中国草食动物》 CAS 2010年第5期5-9,共5页

卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和... 卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性,判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关,为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中,细胞质着蓝色的为BCB+,没着蓝色的为BCB-;并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mate(r胚胎必要的母体抗原)和Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同质量绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明:BCB染色筛选后,阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性高(P<0.01),这充分证明,BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞,这4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟有关。 展开更多

关键词 BCB染色 母源基因 荧光实时定量PCR

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不同培养系统对牛体外胚胎发育的影响 被引量：2

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作者 汪立芹 陈童 +3 位作者 杨梅 彭夏雨 林嘉鹏 郭志勤 《中国畜禽种业》 2010年第3期142-144,共3页

本研究通过体外不同成熟液、不同受精液、不同培养液、不同气象条件对牛体外受精的效果进行了比较,实验表明:自配的成熟液、受精液、培养液对卵母细胞卵裂率、囊胚率、孵化率与进口的试剂相比没有差异(P>0.05);后期培养时低氧对胚胎... 本研究通过体外不同成熟液、不同受精液、不同培养液、不同气象条件对牛体外受精的效果进行了比较,实验表明:自配的成熟液、受精液、培养液对卵母细胞卵裂率、囊胚率、孵化率与进口的试剂相比没有差异(P>0.05);后期培养时低氧对胚胎发育没有影响。因此,用自配的成熟液、受精液、培养液以及含5%CO2的普通气体完全可以用做胚胎的体外生产,极大的降低了生产成本。 展开更多

关键词 牛 胚胎 卵裂率 囊胚率 孵化率 体外受精 培养系统 成本比较

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添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响

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作者 张秀华 石庆华 +5 位作者 赵云程 林嘉鹏 汪立芹 周川 金贤华 黄俊成 《中国草食动物》 CAS 2012年第3期25-29,共5页

为筛选出更有利于维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like cell)多能性的因子,在基础培养基N2B27/CH中,分别添加PD、PD+hLIF、PD+BPM4、PD+hLIF+BMP4,通过比较分析,初步筛选出了比本实验室原培养体系(N2B27/CH+bFGF)更利于维持oESC-like多能性... 为筛选出更有利于维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like cell)多能性的因子,在基础培养基N2B27/CH中,分别添加PD、PD+hLIF、PD+BPM4、PD+hLIF+BMP4,通过比较分析,初步筛选出了比本实验室原培养体系(N2B27/CH+bFGF)更利于维持oESC-like多能性的培养基添加因子。结果显示:基础培养基中添加PD、PD+hLIF后细胞生长较好,细胞之间的结合更加致密;各种培养基培养物都表达AKP与Sox2、Oct4免疫荧光蛋白等oESC-like多能性标志;4种不同培养基与bFGF相比,细胞的生长速度减慢;在基础培养基N2B27/CH中添加PD和PD+hLIF使多能性候选基因Lin28与c-Myc表达量极显著升高(P<0.01),Nestin的表达量极显著下调(P<0.01),加入PD+hLIF使Oct4表达量极显著上调(P<0.01)。因此,在oESC-like基础培养液N2B27/CH的基础上,添加PD或PD+hLIF更有利于oESC-like细胞多能性维持。 展开更多

关键词 绵羊类胚胎干细胞 体外培养 多能性调控因子 候选基因

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影响绵羊卵母细胞回收效率因素的研究 被引量：1

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作者 梁红艳 陈莹 +8 位作者 张欣如 马秀玲 胡凯 刘宽宽 白新宇 林嘉鹏 吴阳升 刘书东 汪立芹 《中国畜禽种业》 2024年第4期109-116,共8页

为优化卵母细胞采集方法、提高绵羊卵巢资源利用率奠定基础,该试验利用屠宰绵羊卵巢,研究采卵人员及采卵工具(注射器、负压泵)对卵母细胞回收效率的影响。结果表明:不同人员对卵母细胞回收数量和质量均存在极显著差异(P<0.01);哈萨克... 为优化卵母细胞采集方法、提高绵羊卵巢资源利用率奠定基础,该试验利用屠宰绵羊卵巢,研究采卵人员及采卵工具(注射器、负压泵)对卵母细胞回收效率的影响。结果表明:不同人员对卵母细胞回收数量和质量均存在极显著差异(P<0.01);哈萨克羊/阿勒泰羊卵母细胞回收数量和质量显著低于湖羊(P<0.05);不同规格注射器针头,对绵羊卵母细胞回收数量和质量存在极显著差异(P<0.01),且9号针头(兽用)采卵效果较优;真空负压泵对卵母细胞的回收效果显著高于注射器(P<0.05)。可见,注射器采集卵母细胞对技术人员的熟练程度要求较高,采用真空负压泵采卵方法卵母细胞回收效率显著高于注射器采卵方法。 展开更多

关键词 绵羊 卵母细胞 真空负压泵 采集方法 回收率

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细胞松弛素B对玻璃化冷冻牛卵母细胞的影响 被引量：1

15

作者 郭娟 王志琴 +2 位作者 赵云程 林嘉鹏 黄俊成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期55-59,共5页

用不同浓度细胞松弛素B(CB)预处理体外成熟牛卵母细胞,以固体表面玻璃化(SSV)法冷冻解冻后的存活率和孤雌激活发育能力作为评价指标,探讨CB对体外成熟牛卵母细胞冷冻保存的影响。结果显示,存活率方面,各浓度CB处理组与对照组无显著差异(... 用不同浓度细胞松弛素B(CB)预处理体外成熟牛卵母细胞,以固体表面玻璃化(SSV)法冷冻解冻后的存活率和孤雌激活发育能力作为评价指标,探讨CB对体外成熟牛卵母细胞冷冻保存的影响。结果显示,存活率方面,各浓度CB处理组与对照组无显著差异(P>0.05);激活后卵裂率方面,20μg/mLCB处理组显著高于对照组(47.67%和30.25%,P<0.05);囊胚率方面,20μg/mLCB处理组极显著高于对照组(9.00%和1.75%,P≤0.01),同时还显著高于其他4个处理组(P<0.05)。研究表明,CB在玻璃化冷冻过程中的保护作用存在一定浓度的依赖性,其中用20μg/mLCB浓度处理最适于牛成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果的改善。 展开更多

关键词 卵母细胞 玻璃化冷冻 牛 细胞松弛素B

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冷冻保护剂在卵母细胞上的研究进展 被引量：1

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作者 郭娟 王志琴 +2 位作者 赵云程 林嘉鹏 黄俊成 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第31期15265-15267,共3页

系统综述了细胞松弛素B、紫杉醇、咖啡因和谷胱甘肽4种冷冻保护剂在增强卵母细胞抗冻能力方面的研究,并分析了Bcl-2和Bax2种凋亡基因的表达程度与卵母细胞凋亡之间的关系。

关键词 冷冻保护剂 卵母细胞 骨架稳定剂 抗氧化剂

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FKBP 5基因对绵羊卵泡颗粒细胞功能的影响

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作者 古丽米热·阿布都热依木 张欣如 +5 位作者 吴阳升 陈莹 汪立芹 徐新明 黄俊成 林嘉鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3947-3956,共10页

旨在探讨FKBP 5在绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)中的潜在功能。本研究从乌鲁木齐市华凌屠宰场的20个2岁左右处于性成熟阶段的阿勒泰羊卵巢中分离GCs。将试验分为4组:GC(空白对照)、GC+NC(转染siRNA-NC)、GC+si FKBP 5(转染siRNA-FKBP5)、GC+si ... 旨在探讨FKBP 5在绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)中的潜在功能。本研究从乌鲁木齐市华凌屠宰场的20个2岁左右处于性成熟阶段的阿勒泰羊卵巢中分离GCs。将试验分为4组:GC(空白对照)、GC+NC(转染siRNA-NC)、GC+si FKBP 5(转染siRNA-FKBP5)、GC+si FKBP 5+LH(促黄体生成素处理转染siRNA-FKBP5)。利用细胞免疫荧光检测FKBP5蛋白在GCs中的定位。通过EdU、Tunel和Western blot检测其对细胞增殖、凋亡的影响;通过Western blot检测其对AKT和ERK信号通路的影响;通过ELISA检测其对E2、P4水平的影响。结果表明,FKBP5表达于GCs细胞质中。FKBP 5表达量随着LH浓度不断升高;5 IU·mL-1 LH作用4 h,FKBP 5表达较高(P<0.001)。干扰FKBP 5后显著抑制了细胞增殖,并显著降低PCNA蛋白表达量(P<0.001);显著促进了细胞凋亡,增加了BAX的表达并减少了Bcl-2的表达(P<0.001);显著抑制了GCs中AKT和ERK信号通路的激活以及E2和P4的分泌(P<0.001)。LH处理部分改善了干扰FKBP 5对GCs的影响(P<0.05)。本研究结果表明,FKBP 5影响绵羊GCs的增殖、凋亡、AKT和ERK信号通路以及E2和P4的分泌,其功能受LH的影响。这些结果为进一步研究FKBP5在绵羊卵泡发育中的作用提供了理论依据。 展开更多

关键词 FKBP 5 颗粒细胞 细胞增殖凋亡 AKT和ERK信号通路 类固醇

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玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响

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作者 王静 林嘉鹏 +4 位作者 石庆华 陈博 汪立芹 赵云程 黄俊成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1233-1238,共6页

为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM期(18、24h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养。GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37%、23.17%、33.07%)均极显著低于对照组(82.96... 为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM期(18、24h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养。GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37%、23.17%、33.07%)均极显著低于对照组(82.96%,P<0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P<0.01)。本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P<0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P<0.01)。结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响。 展开更多

关键词 母源基因 玻璃化冷冻 荧光实时定量PCR

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细胞松弛素B对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

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作者 郭娟 王志琴 +2 位作者 赵云程 林嘉鹏 黄俊成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期101-104,共4页

本试验通过玻璃化冷冻前不同浓度细胞松弛素B(cytochalasin-B,CB)预处理来分析CB对牛GV期卵母细胞固体表面玻璃化(SSV)冷冻后发育潜力的影响。试验结果表明,玻璃化冷冻后,CB处理组和未处理组之间卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),... 本试验通过玻璃化冷冻前不同浓度细胞松弛素B(cytochalasin-B,CB)预处理来分析CB对牛GV期卵母细胞固体表面玻璃化(SSV)冷冻后发育潜力的影响。试验结果表明,玻璃化冷冻后,CB处理组和未处理组之间卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),但均显著低于体外培养组。说明试验中所用CB浓度(2.5、7.5、15、20和30μg/mL)对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的改善作用不明显。 展开更多

关键词 玻璃化冷冻 细胞松弛素B 牛 GV期卵母细胞

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