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抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定
被引量：
15
1
作者
刘德辉
何俊
+1 位作者
林云熊
黄毓茂
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期98-101,120,共5页
为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37...
为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。
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关键词
抗菌肽LL-37
基因设计
高效表达
活性鉴定
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职称材料
题名
抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定
被引量：
15
1
作者
刘德辉
何俊
林云熊
黄毓茂
机构
华南农业大学兽医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期98-101,120,共5页
基金
广东科技计划项目(2006B20801003)
文摘
为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。
关键词
抗菌肽LL-37
基因设计
高效表达
活性鉴定
Keywords
antimicrobial peptide LL-37
genetic modification
secretion expression
antibacterial activity
分类号
S852.5 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定
刘德辉
何俊
林云熊
黄毓茂
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
15
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