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木薯MebZIP27基因的克隆与原核表达分析
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作者 曾力旺 张小燕 +7 位作者 林墁 杨静琳 林素妍 潘子墨 雷鑫芳 吴春来 曾坚 胡伟 《福建农业学报》 北大核心 2025年第1期1-9,共9页
【目的】碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)蛋白是真核生物中一类独特的转录因子,在植物的生长、发育和生理代谢调控中发挥着关键作用。特别是A类bZIPs通常负责调控携带ABA依赖元件的基因,进而引发ABA响应或实现环境适应。深... 【目的】碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)蛋白是真核生物中一类独特的转录因子,在植物的生长、发育和生理代谢调控中发挥着关键作用。特别是A类bZIPs通常负责调控携带ABA依赖元件的基因,进而引发ABA响应或实现环境适应。深入研究A类木薯bZIPs转录因子的功能,可进一步了解其调控ABA表达的分子机理。【方法】通过RT-PCR技术克隆MebZIP27基因,并运用生物信息学方法对其进行基因和蛋白质水平的分析。此外,通过荧光定量PCR检测MebZIP27基因的时空表达模式及其对逆境的响应,并尝试通过原核表达获得MebZIP27蛋白。【结果】MebZIP27基因位于木薯第5号染色体上,编码区全长1251 bp,具备典型的bZIP结构域特征。该基因与麻风树(Hevea brasiliensis)和橡胶树(Jatropha curcas)的A类bZIP序列一致性分别高达80.00%和85.41%,表明其属于A类bZIP亚族成员。亚细胞定位结果显示,MebZIP27基因位于细胞核。qRT-PCR分析结果表明,MebZIP27基因在木薯储藏根中表达最为显著。在甘露醇、NaCl和低温处理下,MebZIP27基因未表现出显著诱导表达,但在ABA和H2O2处理下表现出显著诱导。通过原核表达成功获得了MebZIP27基因编码的蛋白,并通过谷胱甘肽琼脂糖珠微球分离技术对GST-MebZIP27蛋白进行了纯化。【结论】木薯中的MebZIP27基因属于A类bZIP基因家族,定位于细胞核,在木薯储藏根中的表达最为显著。此外,MebZIP27基因在ABA和H2O2处理下表现出显著诱导。这些结果为深入研究MebZIP27基因在ABA信号调控中的作用提供了参考依据。 展开更多
关键词 木薯 bZIPs 非生物胁迫 原核表达
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小鼠脾脏来源的调节性表型γδT细胞的存在和体外诱导 被引量:2
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作者 杨静琳 康宁 +5 位作者 汤龙 陈兴明 刘庆丰 崔莲仙 胡云章 何维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期488-491,共4页
目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-... 目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)和免疫荧光染色分析初始的γδT细胞以及TGFβ-(5ng/ml)诱导后的γδT细胞中Foxp3及部分调节性T细胞表面分子和细胞因子的表达情况。结果:与CD4+CD25+T细胞相比,初始的γδT细胞Foxp3表达量很低;活化的γδT细胞经过TGFβ-诱导后Foxp3表达量明显增加,同时与免疫调节相关的表面分子如GITR、CTLA-4和细胞因子TGFβ-、IL-10的表达量也相应增加,IFNγ-的表达有所降低。结论:初始的γδT细胞低表达Foxp3,在体外可经TGFβ-诱导产生具有调节性T细胞表型的亚群。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 调节性T细胞 FOXP3 免疫调节
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木薯MeEIN3.1基因克隆及其在采后生理性变质中的信号转导 被引量:1
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作者 赖锦涛 杨静琳 +5 位作者 罗佳科 陈志晟 叶晓雪 颜彦 曾坚 胡伟 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期7-14,共8页
【目的】ethylene insensitive 3/ethylene insensitive-like 1(EIN3/EIL1)是乙烯信号通路的重要成员,克隆并分析其在木薯块根采后生理性变质(post-harvest physiological deterioration,PPD)过程中的表达情况,可以为深入研究乙烯信号... 【目的】ethylene insensitive 3/ethylene insensitive-like 1(EIN3/EIL1)是乙烯信号通路的重要成员,克隆并分析其在木薯块根采后生理性变质(post-harvest physiological deterioration,PPD)过程中的表达情况,可以为深入研究乙烯信号在木薯块根PPD过程中的功能提供参考。【方法】通过RT-PCR技术从木薯栽培品种SC8中克隆得到了木薯MeEIN3.1基因,然后对MeEIN3.1基因的遗传进化关系、结构域、蛋白质结构、理化性质等进行分析。对MeEIN3.1蛋白进行亚细胞定位,并通过荧光定量PCR和酵母双杂交技术对MeEIN3.1基因在木薯块根PPD过程中的表达水平以及下游互作转录因子进行分析。【结果】MeEIN3.1基因的长度为1452 bp,编码483个氨基酸残基,等电点和分子质量分别为5.08和55.12 ku,氨基酸序列包含7个EIN3/EIL1结构域,和橡胶HbEIN3-like基因的亲缘关系最近,序列一致性为69.35%。MeEIN3.1蛋白的亚细胞定位结果显示该基因位于细胞核。荧光定量PCR结果显示,在木薯块根的PPD过程中MeEIN3.1基因的表达量和对照0 h相比,表现为显著上升趋势,即MeEIN3.1基因的表达受到PPD过程的诱导。另外,酵母双杂交结果显示MeEIN3.1能够与MeERF1.2和MeERF1.3产生互作。【结论】MeEIN3.1基因的表达在采后过程中受到诱导,推测其通过下游转录因子MeERF1.2和MeERF1.3进行乙烯信号转导来参与木薯块根的PPD过程。 展开更多
关键词 木薯 乙烯 EIN 活性氧 采后生理性变质
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木薯MePP2CAb基因克隆及表达分析 被引量:1
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作者 王舒婷 杨静琳 +5 位作者 林墁 李丽珍 刘博婷 吴春来 曾坚 胡伟 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2392-2400,共9页
2C型蛋白磷酸酶(protein phosphatase 2C,PP2C)在ABA核心信号途径中发挥着重要作用。为了研究PP2C基因在木薯响应非生物胁迫过程中的功能,本研究通过RT-PCR技术,从木薯Arg7中克隆得到MePP2CAb基因,并对其进行生物信息学分析、自激活活... 2C型蛋白磷酸酶(protein phosphatase 2C,PP2C)在ABA核心信号途径中发挥着重要作用。为了研究PP2C基因在木薯响应非生物胁迫过程中的功能,本研究通过RT-PCR技术,从木薯Arg7中克隆得到MePP2CAb基因,并对其进行生物信息学分析、自激活活性分析、启动子活性分析及不同逆境和激素处理下的表达模式分析。结果表明:(1)MePP2CAb基因的长度为1296 bp,包含431个氨基酸残基,蛋白相对分子量和理论等电点分别为47.08 kDa和5.5,具有PP2C家族的结构域特征。蛋白质序列比对结果显示,MePP2CAb与橡胶树和麻风树的PP2C序列最为相似,一致性分别为82.75%和74.01%,在C-端保守。上述结果证明MePP2CAb基因属于PP2C家族。(2)MePP2CAb基因在木薯块根中的表达最高。(3)MePP2CAb具有一定的自激活活性,MePP2CAb基因的全长启动子的活性也较高。(4)MePP2CAb基因属于ABA核心通路,启动子序列分析显示,它包含ABRE(abscisic acid responsiveness)元件、MeJA响应原件、干旱诱导元件(drought-induced motif)等元件。不同逆境和激素处理的结果也表明,MePP2CAb基因在冷处理和SA处理下受到抑制,在NaCl、mannitiol、ABA和MeJA处理的过程中受到诱导。另外酵母双杂交结果显示MePP2CAb能够与MePYL1产生互作。根据上述结果推测,MePP2CAb基因可能对木薯的非生物胁迫有响应,但其到底是正调控因子还是负调控因子尚不清楚。该结果为进一步研究解析MePP2CAb基因在ABA信号通路中的作用及提高木薯在非生物胁迫中的适应能力提供参考。 展开更多
关键词 木薯 ABA PP2C 非生物胁迫
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