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慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型
被引量：
6
1
作者
胡明
马远征
+4 位作者
李大伟
黄凤山
杨达宇
杨同磊
刘玉川
《中国骨伤》
CAS
2012年第10期842-845,共4页
目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48h后...
目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚椎间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值。结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50%。半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Westernblot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01。结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型。
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关键词
椎间盘
慢病毒属
膜蛋白质类
RNA干扰
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职称材料
题名
慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型
被引量：
6
1
作者
胡明
马远征
李大伟
黄凤山
杨达宇
杨同磊
刘玉川
机构
解放军第三〇九医院骨科
出处
《中国骨伤》
CAS
2012年第10期842-845,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:30400453)~~
文摘
目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚椎间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值。结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50%。半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Westernblot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01。结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型。
关键词
椎间盘
慢病毒属
膜蛋白质类
RNA干扰
Keywords
Intervertebral disk
Lentivirus
Membrane Proteins
RNA interference
分类号
R735.1 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型
胡明
马远征
李大伟
黄凤山
杨达宇
杨同磊
刘玉川
《中国骨伤》
CAS
2012
6
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