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髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
被引量：
1
1
作者
李亚婷
张洁
+3 位作者
尹荣华
杨晓
明
(
指导
)
任广
明
(
指导
)
葛志强(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期580-585,共6页
目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Ab...
目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。
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关键词
ABRO1
CRE/LOXP重组系统
髓系特异性基因敲除小鼠
造血分化
败血症
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职称材料
敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响
2
作者
李东旭
张文
+3 位作者
葛志强
詹轶群
尹荣华(
指导
)
杨晓
明
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期257-261,共5页
目的:探讨敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响。方法:分离培养ABRO1敲除(KO)及野生型(WT)MEF细胞;采用CBA流式细胞术检测LPS诱导后ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平;采用Western blot法确认其NF-κB信号通路...
目的:探讨敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响。方法:分离培养ABRO1敲除(KO)及野生型(WT)MEF细胞;采用CBA流式细胞术检测LPS诱导后ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平;采用Western blot法确认其NF-κB信号通路以及MAPK信号通路的活化;采用qPCR检测IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达;采用荧光素酶报告基因检测NF-κB的转录活性。结果:CBA流式结果显示,10 ng/ml、100 ng/ml和1μg/ml 3种不同剂量的LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平差异无统计学意义。qPCR检测显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA水平差异无统计学意义。Western blot结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞的NF-κB信号通路以及MAPK信号通路活化差异无统计学意义。荧光素酶报告基因检测结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞NF-κB报告基因活性差异无统计学意义。结论:敲除ABRO1不影响MEF细胞LPS/TLR4信号通路活化。
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关键词
ABRO1基因
小鼠胚胎成纤维细胞
白细胞介素6
脂多糖类
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职称材料
题名
髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
被引量：
1
1
作者
李亚婷
张洁
尹荣华
杨晓
明
(
指导
)
任广
明
(
指导
)
葛志强(
指导
)
机构
天津大学化工学院制药工程系
中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生命组学研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期580-585,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(82001666)。
文摘
目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。
关键词
ABRO1
CRE/LOXP重组系统
髓系特异性基因敲除小鼠
造血分化
败血症
Keywords
ABRO1
Cre/LoxP recombination system
Myeloid-specific gene knockout mice
Hematopoietic differentiation
Sepsis
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响
2
作者
李东旭
张文
葛志强
詹轶群
尹荣华(
指导
)
杨晓
明
(
指导
)
机构
天津大学化工学院制药工程系
军事科学院军事医学研究院生命组学研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期257-261,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(No.81870412)。
文摘
目的:探讨敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响。方法:分离培养ABRO1敲除(KO)及野生型(WT)MEF细胞;采用CBA流式细胞术检测LPS诱导后ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平;采用Western blot法确认其NF-κB信号通路以及MAPK信号通路的活化;采用qPCR检测IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达;采用荧光素酶报告基因检测NF-κB的转录活性。结果:CBA流式结果显示,10 ng/ml、100 ng/ml和1μg/ml 3种不同剂量的LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平差异无统计学意义。qPCR检测显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA水平差异无统计学意义。Western blot结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞的NF-κB信号通路以及MAPK信号通路活化差异无统计学意义。荧光素酶报告基因检测结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞NF-κB报告基因活性差异无统计学意义。结论:敲除ABRO1不影响MEF细胞LPS/TLR4信号通路活化。
关键词
ABRO1基因
小鼠胚胎成纤维细胞
白细胞介素6
脂多糖类
Keywords
ABRO1
Mouse embryonic fibroblast
Interleukin-6
Lipopolysaccharides
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
李亚婷
张洁
尹荣华
杨晓
明
(
指导
)
任广
明
(
指导
)
葛志强(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
2
敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响
李东旭
张文
葛志强
詹轶群
尹荣华(
指导
)
杨晓
明
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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已选择
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