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人TSARG4真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立 被引量:7
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作者 杨幼波 向红 邢晓为 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期684-687,共4页
目的:构建人TSARG4基因真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系。方法:应用RT-PCR从人睾丸中扩增TSARG4的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到pUCm-T载体中测序验证。随后,将TSARG4进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达... 目的:构建人TSARG4基因真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系。方法:应用RT-PCR从人睾丸中扩增TSARG4的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到pUCm-T载体中测序验证。随后,将TSARG4进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中。用脂质体将经过测序、验证的pcDNA3.1(+)/TSARG4质粒转染HeLa细胞,通过G418筛选建立TSARG4稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交技术检测TSARG4在稳定转染的HeLa细胞系中的表达。结果:成功构建了pcDNA3.1(+)/TSARG4表达质粒,建立了稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交检测结果表明,TSARG4基因在该细胞系中成功表达。结论:TSARG4真核表达载体成功构建和稳定转染HeLa细胞系的建立为进一步体外研究TSARG4的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 TSARG4 基因表达 转染 RT-PCR 组织原位杂交
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肿瘤性骨软化症继发甲状旁腺功能亢进症1例
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作者 杨幼波 金萍 +4 位作者 张淑婷 陈科 何红晖 莫朝晖 袁晶晶 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1937-1943,共7页
肿瘤性骨软化症(tumor-induced osteomalacia,TIO)是一种因肿瘤组织分泌过量成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)而引起肾脏排磷增多的代谢性骨病,是一种罕见的副肿瘤综合征。中南大学湘雅三医院2021年9月收治1例... 肿瘤性骨软化症(tumor-induced osteomalacia,TIO)是一种因肿瘤组织分泌过量成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)而引起肾脏排磷增多的代谢性骨病,是一种罕见的副肿瘤综合征。中南大学湘雅三医院2021年9月收治1例罕见的TIO患者,该患者的肿瘤位于舌骨体,并且继发了三发性甲状旁腺功能亢进症。在舌骨体肿瘤切除后,患者的症状并未好转,随后对其进行左侧甲状旁腺切除,患者的低磷血症才逐渐改善。发源于舌部肿瘤的TIO十分少见,同时继发三发性甲状旁腺亢进的病例更是罕见,本报告有助于加深对TIO的了解,并为TIO的诊断和治疗提供参考。 展开更多
关键词 肿瘤性骨软化症 甲状旁腺功能亢进症 磷酸盐尿性间叶肿瘤 成纤维细胞生长因子23
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RET基因p.M918T突变导致多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型1例 被引量:2
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作者 金萍 胡文沐 +2 位作者 杨幼波 龙晓丹 莫朝晖 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1261-1265,共5页
多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型(multiple endocrine neoplasia type-Ⅱb,MEN-Ⅱb)是一种罕见的由RET基因突变引起的常染色体显性遗传病,具有特殊的临床表型,如黏膜神经瘤、类马方综合征体型、甲状腺髓样癌及嗜铬细胞瘤等。临床医生对此病认识... 多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型(multiple endocrine neoplasia type-Ⅱb,MEN-Ⅱb)是一种罕见的由RET基因突变引起的常染色体显性遗传病,具有特殊的临床表型,如黏膜神经瘤、类马方综合征体型、甲状腺髓样癌及嗜铬细胞瘤等。临床医生对此病认识不足,诊断往往延迟。2018年11月中南大学湘雅三医院收治了1例MEN-Ⅱb患者,该患者自幼有舌黏膜神经瘤,曾因二尖瓣脱垂及脊柱畸形接受手术治疗,于22岁时被诊断为甲状腺髓样癌并接受手术治疗,但直至28岁发现嗜铬细胞瘤才临床诊断为MEN-Ⅱb。基因检测提示该患者携带一新发RET基因p.M918T杂合突变。在临床工作中早期识别内分泌系统以外的临床表现并进行RET基因筛查是早期诊断及治疗的关键。 展开更多
关键词 多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型 甲状腺髓样癌 嗜铬细胞瘤 RET基因
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pEGFP-C_3-insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响
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作者 陈科 莫朝晖 +3 位作者 邢晓为 胡平安 杨幼波 谢艳红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期309-311,316,共4页
目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细... 目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细胞,通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化。结果成功地构建了pEGFP-C3-insig2融合基因的真核表达载体,荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达,insig2基因的转录明显上调。转染后24h、72h较0hAP2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调。结论构建了insig2基因的真核表达质粒,在转染的3T3-L1细胞中insig2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢。 展开更多
关键词 Pegfp-C3-insig2 3T3-L1细胞 表达
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不同浓度葡萄糖对3T3-L_1细胞分化及insig-1和insig-2 mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 谢艳红 莫朝晖 +3 位作者 陈科 杨幼波 刑晓为 廖二元 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期238-244,共7页
目的:观察不同浓度葡萄糖对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1细胞)分化及insig-1和insig-2 mRNA基因表达的影响,探讨insig基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用。方法:将3T3-L1细胞分别在高葡萄糖浓度(25mol/LG.S)、低葡萄糖浓度(5.5mol/LG.S)和甘露... 目的:观察不同浓度葡萄糖对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1细胞)分化及insig-1和insig-2 mRNA基因表达的影响,探讨insig基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用。方法:将3T3-L1细胞分别在高葡萄糖浓度(25mol/LG.S)、低葡萄糖浓度(5.5mol/LG.S)和甘露醇(19.5mol/L甘露醇+5.5mol/LG.S)中诱导分化,利用油红"O"染色检测脂肪细胞分化,RT-PCR和原位杂交法检测insig-1和insig-2 mRNA、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA表达的动态变化。结果:随着3T3-L1细胞的分化,insig-1和insig-2 mRNA和AP2 mRNA表达逐渐上调,低糖诱导组及甘露醇对照组细胞分化程度显著低于高糖诱导组,但两组insig-1和insig-2 mRNA的表达较高糖诱导组明显上调(P<0.05),而AP2 mRNA表达则下调;低糖诱导组与甘露醇对照组细胞分化程度及各基因表达无明显差别。结论:葡萄糖浓度可影响脂肪细胞分化;低糖时脂肪细胞分化及脂质沉积相对受抑制,可能与insig基因表达上调有关。 展开更多
关键词 葡萄糖浓度 3T3-Ll细胞 insig-J基因 insig-2基因
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全外显子组测序诊断2例Gitelman综合征 被引量:1
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作者 谢容融 金萍 +2 位作者 杨幼波 张勤 熊静 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期401-406,共6页
中南大学湘雅三医院内分泌科收治了2例疑诊Gitelman综合征的患者。抽取2例患者外周血进行基因组DNA抽提,然后采用全外显子组测序进行基因学检测,寻找致病位点,并通过生物信息学软件对突变位点进行功能分析。全外显子组测序及Sanger测序... 中南大学湘雅三医院内分泌科收治了2例疑诊Gitelman综合征的患者。抽取2例患者外周血进行基因组DNA抽提,然后采用全外显子组测序进行基因学检测,寻找致病位点,并通过生物信息学软件对突变位点进行功能分析。全外显子组测序及Sanger测序验证发现2例Gitelman综合征患者均携带SLC12A3基因复合杂合突变:c.486_490delTACGGinsA、p.R943W、p.D486N及p.R928C。其中c.486_490delTACGGinsA插入缺失突变将造成框移及蛋白质截短,而p.R943W、p.D486N及p.R928C突变经SIFT、PolyPhen2和Mutation Taster预测为有害。这4个突变既往均有报道,其中p.R943W为首次在中国人群中发现。Gitelman综合征临床较罕见,漏诊率高。对Gitelman综合征患者及早进行基因检测有助于明确病因及指导治疗。 展开更多
关键词 全外显子组测序 GITELMAN综合征 SLC12A3 低钾血症
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