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基于核酸适配体功能化氧化石墨烯荧光传感器检测氯胺酮及去甲氯胺酮
1
作者
韦丽霞
刘波
+8 位作者
杨小圆
张茜
兰艺凤
张潮
贾娟
张丹
尉志文
贠克明
陈哲
《法医学杂志》
北大核心
2025年第4期326-339,共14页
目的利用能同时识别氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的核酸适配体,构建核酸适配体羧基化氧化石墨烯(carboxylated graphene oxide,CGO)荧光传感器,实现氯胺酮及去甲氯胺酮的高灵敏、高特异性检测。方法采用氧化石墨烯-指数富集配体系统进化...
目的利用能同时识别氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的核酸适配体,构建核酸适配体羧基化氧化石墨烯(carboxylated graphene oxide,CGO)荧光传感器,实现氯胺酮及去甲氯胺酮的高灵敏、高特异性检测。方法采用氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术(graphene oxide-systematic evolution of ligand by exponential enrichment,GO-SELEX)结合分子对接技术筛选出能同时识别氯胺酮及去甲氯胺酮的特异性核酸适配体。将适配体标记Cy5荧光并通过化学偶联反应与CGO结合,构建核酸适配体功能化CGO荧光传感器。通过优化CGO质量浓度、核酸适配体浓度、反应温度及孵育时间等检测条件,利用加入靶标前后的荧光强度变化比率实现目标物的定量分析。通过检测传感器在空白血液、尿液中荧光强度随孵育时间的变化,评估其与传统物理吸附CGO荧光传感器在生物检材中的稳定性;通过空白血液、尿液加标回收实验,比较其与HPLC-MS/MS的检测性能。结果筛选得到特异性核酸适配体A5,并与CGO化学偶联构建荧光传感器。在优化条件下,该荧光传感器对氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,检出限(limit of de⁃tection,LOD)为0.86 ng/mL;对去甲氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,LOD为0.70 ng/mL。与物理吸附构建的CGO荧光传感器相比,本传感器在血液、尿液中表现出更高的生物稳定性。空白血液、尿液中氯胺酮及去甲氯胺酮的加标回收率为81.50%~110.03%,表现出与HPLC-MS/MS相当的检测性能。结论核酸适配体筛选方法可为毒(药)物原体及其代谢物的适配体筛选提供新的思路,所构建的核酸适配体功能化CGO荧光传感器可为氯胺酮及去甲氯胺酮的高效、可靠检测提供新方法。
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关键词
法医学
毒物分析
氯胺酮
去甲氯胺酮
氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术
核酸适配体
化学偶联
荧光传感器
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职称材料
题名
基于核酸适配体功能化氧化石墨烯荧光传感器检测氯胺酮及去甲氯胺酮
1
作者
韦丽霞
刘波
杨小圆
张茜
兰艺凤
张潮
贾娟
张丹
尉志文
贠克明
陈哲
机构
山西医科大学法医学院
法庭毒物分析公安部重点实验室
法医学山西省重点实验室
出处
《法医学杂志》
北大核心
2025年第4期326-339,共14页
基金
国家重点研发计划资助项目(2022YFC3302003)
国家自然科学基金资助项目(82101980,82402204)
山西省重点研发计划资助项目(202302130501007)。
文摘
目的利用能同时识别氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的核酸适配体,构建核酸适配体羧基化氧化石墨烯(carboxylated graphene oxide,CGO)荧光传感器,实现氯胺酮及去甲氯胺酮的高灵敏、高特异性检测。方法采用氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术(graphene oxide-systematic evolution of ligand by exponential enrichment,GO-SELEX)结合分子对接技术筛选出能同时识别氯胺酮及去甲氯胺酮的特异性核酸适配体。将适配体标记Cy5荧光并通过化学偶联反应与CGO结合,构建核酸适配体功能化CGO荧光传感器。通过优化CGO质量浓度、核酸适配体浓度、反应温度及孵育时间等检测条件,利用加入靶标前后的荧光强度变化比率实现目标物的定量分析。通过检测传感器在空白血液、尿液中荧光强度随孵育时间的变化,评估其与传统物理吸附CGO荧光传感器在生物检材中的稳定性;通过空白血液、尿液加标回收实验,比较其与HPLC-MS/MS的检测性能。结果筛选得到特异性核酸适配体A5,并与CGO化学偶联构建荧光传感器。在优化条件下,该荧光传感器对氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,检出限(limit of de⁃tection,LOD)为0.86 ng/mL;对去甲氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,LOD为0.70 ng/mL。与物理吸附构建的CGO荧光传感器相比,本传感器在血液、尿液中表现出更高的生物稳定性。空白血液、尿液中氯胺酮及去甲氯胺酮的加标回收率为81.50%~110.03%,表现出与HPLC-MS/MS相当的检测性能。结论核酸适配体筛选方法可为毒(药)物原体及其代谢物的适配体筛选提供新的思路,所构建的核酸适配体功能化CGO荧光传感器可为氯胺酮及去甲氯胺酮的高效、可靠检测提供新方法。
关键词
法医学
毒物分析
氯胺酮
去甲氯胺酮
氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术
核酸适配体
化学偶联
荧光传感器
Keywords
forensic medicine
toxicological analysis
ketamine
norketamine
graphene oxide−systematic evolution of ligand by exponential enrichment(GO-SELEX)
aptamer
chemical conjugation
fluorescent sensor
分类号
R89 [医药卫生—法医学]
DF795.1 [医药卫生—法医学]
D919.1 [医药卫生—法医学]
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被引量
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1
基于核酸适配体功能化氧化石墨烯荧光传感器检测氯胺酮及去甲氯胺酮
韦丽霞
刘波
杨小圆
张茜
兰艺凤
张潮
贾娟
张丹
尉志文
贠克明
陈哲
《法医学杂志》
北大核心
2025
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