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大肠杆菌Nissle 1917类T7表达系统的构建及应用
1
作者
郑烨
邓睿哲
+3 位作者
杨富荏
林艺娜
王辉
叶健文
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
北大核心
2025年第2期151-162,共12页
目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统...
目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统;通过构建基因组整合表达类T7 RNA聚合酶(T7-like RNA polymerase,MmP1)的菌株LM01,并测试其启动子突变文库,优化其表达强度及动态输出范围;利用MmP1诱导系统表达超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),验证其蛋白表达能力。结果:在EcN中成功构建并表征了多个诱导系统,其中以MmP1为RNA聚合酶的类T7诱导表达系统的饱和诱导输出强度最优,最大动态调控范围高达909倍;将MmP1聚合酶表达模块整合至EcN基因组后,其饱和响应表达输出提高达66.8%;P MmP1启动子突变文库的构建提供了涵盖65~1097倍动态范围的宽范围可诱导表达可能性;MmP1系统在SOD蛋白可溶性表达测试中产量最高,达到435.7 mg/L,为香草酸诱导系统产量的4.02倍,且酶活性最高达到391.3 U/mL。结论:类T7(MmP1)诱导系统在EcN中可成功构建,并具有高饱和表达、低本底渗漏、动态范围可控等特性,有助于实现蛋白的高效表达合成。
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关键词
大肠杆菌Nissle
1917
诱导表达系统
类T7表达系统
蛋白表达
合成生物学
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职称材料
题名
大肠杆菌Nissle 1917类T7表达系统的构建及应用
1
作者
郑烨
邓睿哲
杨富荏
林艺娜
王辉
叶健文
机构
中山大学附属第六医院结直肠肛门外科
广东省黄浦区中六生物医学创新研究院
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
北大核心
2025年第2期151-162,共12页
基金
国家重点研发计划(2021YFC2101700)
国家自然科学基金项目(32322003)
+4 种基金
广东省科技计划项目(2022B1111080006)
珠海产学研合作项目(2220004002580)
中国博士后科学基金项目(2022M721193)
广东省普通高校青年创新人才计划项目(2024KQNCX003)
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2023ZYGXZR095)。
文摘
目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统;通过构建基因组整合表达类T7 RNA聚合酶(T7-like RNA polymerase,MmP1)的菌株LM01,并测试其启动子突变文库,优化其表达强度及动态输出范围;利用MmP1诱导系统表达超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),验证其蛋白表达能力。结果:在EcN中成功构建并表征了多个诱导系统,其中以MmP1为RNA聚合酶的类T7诱导表达系统的饱和诱导输出强度最优,最大动态调控范围高达909倍;将MmP1聚合酶表达模块整合至EcN基因组后,其饱和响应表达输出提高达66.8%;P MmP1启动子突变文库的构建提供了涵盖65~1097倍动态范围的宽范围可诱导表达可能性;MmP1系统在SOD蛋白可溶性表达测试中产量最高,达到435.7 mg/L,为香草酸诱导系统产量的4.02倍,且酶活性最高达到391.3 U/mL。结论:类T7(MmP1)诱导系统在EcN中可成功构建,并具有高饱和表达、低本底渗漏、动态范围可控等特性,有助于实现蛋白的高效表达合成。
关键词
大肠杆菌Nissle
1917
诱导表达系统
类T7表达系统
蛋白表达
合成生物学
Keywords
Escherichia coli Nissle 1917
inducible expression system
T7-like expression system
protein expression
synthetic biology
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
大肠杆菌Nissle 1917类T7表达系统的构建及应用
郑烨
邓睿哲
杨富荏
林艺娜
王辉
叶健文
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
北大核心
2025
0
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