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人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定 被引量：4
1
作者 杨翔云 张勇 +4 位作者 赖小刚 裴建明 杨安钢 胡玉珍 周士胜 《医学研究生学报》 CAS 2006年第6期487-491,i0011,共6页
目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2... 目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。 展开更多
关键词 ClC-2基因 人胶质瘤 RNA干扰 重组载体
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生理低氧对人晶状体上皮细胞系基因表达谱的影响 被引量：2
2
作者 王嵩 梅林 +3 位作者 闫博 杨安钢 赵晶 严宏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第5期409-412,共4页
目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、... 目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、超速离心后收集细胞上清分别检测SOD、CAT活性以及GSH含量,Trizol提取细胞总RNA进氉行基因表达谱检测,生物信息学软件DAVID分析差异基因的功能聚类,qRT-PCR验证差异基因。结果低氧组细胞的SOD、CAT酶活性及GSH含量均低于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。表达谱芯片结果显示:符合差异表达标准的基因中,在低氧组细胞上调的基因有319个,下调的基因有83个。Gene Ontology分析显示:319个上调基因聚类于148个功能分类中,富集值最高的功能分类为低氧反应。选取5个上调基因进行qRT-PCR验证显示:DDIT4、VEGFA、EDN1、VLDLR、EGLN1在低氧组中的表达量均高于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论生理低氧状态下HLEC的抗氧化能力弱于常氧组,两种氧环境下细胞的基因表达谱不同,提示相应的抗氧化损伤机制可能存在差异。 展开更多
关键词 人晶状体上皮细胞 生理低氧 基因表达谱
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HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用 被引量：1
3
作者 纪振钢 裘秀春 +7 位作者 杨彤涛 龙华 马保安 周勇 张明华 许彦鸣 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2007年第2期120-122,127,I0001,共5页
目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid... 目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。 展开更多
关键词 截短型Bid片段 人上皮细胞生长因子受体2 融合蛋白 骨肉瘤SOSP-9607细胞 细胞凋亡
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Adeno-X Tet-On系统调控LacZ基因在雪旺细胞中表达的研究 被引量：1
4
作者 郝伟 朱锦宇 +2 位作者 朱庆生 李志全 杨安钢 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第2期118-121,共4页
目的　应用Adeno XTet On系统感染雪旺细胞 ,通过四环素衍生物强力霉素 (doxcycline ,Dox)调控LacZ基因产物 (βgal)的表达。方法　①取生后 5～ 6dSD仔鼠坐骨神经进行雪旺细胞培养 ,并进行形态学及S 10 0蛋白相关抗原免疫组织化学染色... 目的　应用Adeno XTet On系统感染雪旺细胞 ,通过四环素衍生物强力霉素 (doxcycline ,Dox)调控LacZ基因产物 (βgal)的表达。方法　①取生后 5～ 6dSD仔鼠坐骨神经进行雪旺细胞培养 ,并进行形态学及S 10 0蛋白相关抗原免疫组织化学染色鉴定。②将Adeno XTet OnVirusStock与Adeno XTRE βgalVirusStock分别感染HEK2 93细胞 ,收获病毒并作滴度测定。③将扩增后的病毒感染雪旺细胞并绘制Dox调控下βgal诱导表达曲线。结果　①由体外培养获得的雪旺细胞纯度可达 90 %以上并且状态良好 ,免疫组织化学染色阳性结果明显。②扩增后的病毒滴度较高 ,分别达 1.2 6× 10 9、1.99× 10 9pfu/ml。　结论　将病毒感染雪旺细胞后 ,经检测发现DOX对 展开更多
关键词 Adeno-X Tet-On系统 LACZ基因 雪旺细胞 免疫组织化学 周围神经损伤 重组腺病毒载体
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重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定 被引量：1
5
作者 裘秀春 许彦鸣 +7 位作者 马保安 周勇 单乐群 杨彤涛 于翠娟 孟艳玲 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期963-966,I0009,共5页
目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复... 目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。 展开更多
关键词 腺病毒表达载体 LACZ
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模块教学中应用PBL教学法开展案例讨论的实践和思考 被引量：6
6
作者 温伟红 王涛 +4 位作者 张赟 宋朝君 方亮 金伯泉 杨安钢 《西北医学教育》 2013年第5期971-974,共4页
介绍了作者所在高校的教学团队在五年制学员的免疫与感染基础模块教学中,应用PBL教学模式进行大班教学的实践和思考,探讨了PBL教学在这些模块教学中的应用前景及存在的问题,以期总结经验,提高教学水平并为同行提供某些借鉴之处。
关键词 PBL 免疫与感染基础 模块教学 五年制
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人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡
7
作者 王智 赵晶 +3 位作者 张莉 温伟红 王成济 杨安钢 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期329-332,共4页
目的　观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法　用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共... 目的　观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法　用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞 ,经G4 18和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达 ,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果　建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达 ,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态 ,细胞生长受到抑制。电镜和TUNEL分析表明 ,颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达使部分细胞呈现凋亡的典型特征。 展开更多
关键词 颗粒酶B 融合蛋白 HELA细胞 诱导表达 凋亡
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黑色素瘤抗原-A10蛋白在肺癌中的表达及意义
8
作者 李林 陈丽华 +6 位作者 庄然 方亮 李琦 刘雪松 王薇 杨安钢 金伯泉 《医学研究生学报》 CAS 2004年第6期493-495,F003,共4页
目的 :观察黑色素瘤抗原 (MAGE) A10在不同类型肺癌的表达分布和临床意义。　方法 :应用组织芯片技术、免疫组化S P法研究MAGE A10在 6 5例肺癌患者的表达情况 ,并分析其与病理类型、病理分级的关系。　结果 :MAGE A10蛋白在小细胞肺... 目的 :观察黑色素瘤抗原 (MAGE) A10在不同类型肺癌的表达分布和临床意义。　方法 :应用组织芯片技术、免疫组化S P法研究MAGE A10在 6 5例肺癌患者的表达情况 ,并分析其与病理类型、病理分级的关系。　结果 :MAGE A10蛋白在小细胞肺癌、肺鳞癌和肺腺癌的阳性表达率分别为 36 .4 %、76 .5 %和 4 0 .0 % ,在大细胞肺癌和支气管肺泡癌中未见阳性表达。MAGE A10蛋白在小细胞肺癌与非小细胞肺癌的表达率未见差异 ,与肺鳞癌、肺腺癌的病理分级也无明显关系。　结论 :MAGE A10分子在肺鳞癌中表达率最高 ,肺腺癌和小细胞肺癌次之 ,大细胞肺癌和支气管肺泡癌中未见表达 ,对鉴别诊断可能有辅助意义 ,并可能成为某些肺癌生物学治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-A10 肺癌 免疫组化 组织芯片
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氧化损伤诱导的人晶状体上皮细胞系基因表达谱的差异和表型改变
9
作者 梅林 王嵩 +3 位作者 闫博 杨安钢 赵晶 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2016年第5期822-825,共4页
目的:探讨人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H_2O_2刺激。24h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数... 目的:探讨人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H_2O_2刺激。24h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数据库DAVID对氧化刺激组相比对照组显著上调的基因进行Gene Ontology(GO)功能富集分析。RT-q PCR对上调的基因进行验证。通过MTT和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果:表达谱芯片结果显示,氧化刺激造成HLEC中367个基因上调,GO分析表明这些基因富集于310个功能类别中,主要包括p53信号通路、细胞凋亡通路、细胞程序性死亡通路等。RT-q PCR结果证实,6个主要参与促凋亡或抗凋亡调节的基因,包括BCL2A1、TP53I3、FAS、ZMAT3、DDB2和BCL2L1,在氧化刺激后表达水平明显上升。MTT实验和流式细胞仪检测结果显示,H_2O_2刺激后HLEC凋亡逐渐上升,是细胞氧化损伤的主要表现。结论:氧化刺激可同时诱导HLEC中促凋亡基因和抗凋亡基因表达水平上调,但最终仍然导致了细胞凋亡。 展开更多
关键词 人晶状体上皮细胞 氧化损伤 表达谱芯片 细胞凋亡
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临床医学七年制学员《医学免疫学》英语教学探讨
10
作者 陈丽华 李琦 +1 位作者 金伯泉 杨安钢 《西北医学教育》 2008年第1期129-130,共2页
为适应医学发展趋势和教学改革的要求，第四军医大学基础部免疫学教研室在临床医学七年制学员医学免疫学授课过程中，部分章节采用了英语教学。本文对这一教学模式的实践运用进行初步探讨，旨在进一步提高医学免疫学英语教学水平。
关键词 临床医学七年制 医学免疫学 英语教学
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